用荧光分光光度计测不同浓度的罗丹明的强度实验报告

一、实验目的1. 熟悉分子荧光法的基本原理和操作步骤。

2. 掌握荧光光谱仪的使用方法。

3. 通过实验，测定罗丹明B的荧光光谱，分析其激发光谱和发射光谱。

4. 掌握荧光定量分析的方法。

二、实验原理分子荧光法是一种灵敏的定量分析方法，基于物质在特定波长范围内吸收光能后，电子从基态跃迁到激发态，再回到基态时释放出一定波长的荧光。

罗丹明B作为一种荧光物质，在特定波长范围内具有明显的荧光特性。

通过测定罗丹明B的激发光谱和发射光谱，可以确定其最佳激发波长和发射波长，从而进行定量分析。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光光谱仪、紫外-可见分光光度计、移液器、容量瓶、试管等。

2. 试剂：罗丹明B标准溶液、无水乙醇、蒸馏水等。

四、实验步骤1. 准备罗丹明B标准溶液：准确移取一定量的罗丹明B标准溶液，用无水乙醇稀释至100mL，配制成一定浓度的罗丹明B标准溶液。

2. 测定激发光谱：在荧光光谱仪上，设定罗丹明B标准溶液的浓度为1.0×10^-5 mol/L，以无水乙醇为参比溶液，扫描激发光谱，记录激发波长范围内荧光强度的变化。

3. 测定发射光谱：在荧光光谱仪上，设定罗丹明B标准溶液的浓度为1.0×10^-5 mol/L，以无水乙醇为参比溶液，以激发光谱中最大激发波长为激发波长，扫描发射光谱，记录发射波长范围内荧光强度的变化。

4. 荧光定量分析：取一定量的罗丹明B样品溶液，按照上述步骤测定其激发光谱和发射光谱，计算样品溶液中罗丹明B的浓度。

五、实验结果与讨论1. 激发光谱：罗丹明B的激发光谱显示，在激发波长为540nm附近，荧光强度达到最大值。

因此，选择540nm作为激发波长。

2. 发射光谱：罗丹明B的发射光谱显示，在发射波长为590nm附近，荧光强度达到最大值。

因此，选择590nm作为发射波长。

3. 荧光定量分析：根据罗丹明B的激发光谱和发射光谱，以及标准曲线，计算样品溶液中罗丹明B的浓度为1.2×10^-5 mol/L。

1.用去离子水为溶剂配置不同浓度的罗丹明B溶液，分别为5mg/L、10mg/L、
15mg/L、20mg/L、25 mg/L、30 mg/L，然后用紫外分光光度计测量不同浓度的罗丹明B溶液的吸光度，资料查询可知罗丹明B的最大吸收波长在
550nm，所以选定550nm处来测量罗丹明B的吸光度。

2.以罗丹明B溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并进
行一元线性回归，得到线性标准方程。

3．取10ml浓度为10mg/L的罗丹明B溶液，在黑暗条件下，将处理后的钛板放至其中浸泡3小时，以便样品表面达到吸附平衡，然后用紫外光照射，每隔一段时间用紫外可见分光光度计测量罗丹明B溶液在550nm处的吸
光度。

最后通过η=（A0-A）/A0计算其降解率，并以时间为横坐标，降解率为纵坐标，绘制曲线。

4．用以上方法绘制不同钛板处理罗丹明B的降解曲线，通过其上升趋势判断光催化活性的大小，上升趋势越大，则光催化活性越高，反之越低。

一、实验目的1. 掌握荧光检测的基本原理和实验方法。

2. 熟悉荧光光度计的操作步骤和注意事项。

3. 学习如何通过荧光光谱分析物质的性质和浓度。

4. 提高实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理荧光检测是利用物质在特定波长光照射下，吸收光能后发射出特定波长光的现象。

当分子吸收光子后，外层电子从基态跃迁到激发态，激发态的分子不稳定，会通过辐射跃迁的方式返回基态，同时发射出与激发光波长不同的光辐射，即荧光。

本实验采用荧光光度计对样品进行检测，通过测量激发光谱和发射光谱，可以确定样品的荧光特性，进而对样品进行定性和定量分析。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光光度计、紫外-可见分光光度计、比色皿、移液器、烧杯、蒸馏水等。

2. 试剂：罗丹明B标准溶液、罗丹明B样品溶液、无水乙醇、氢氧化钠溶液等。

四、实验步骤1. 样品制备：将罗丹明B标准溶液和罗丹明B样品溶液分别用无水乙醇稀释至一定浓度，制备成待测溶液。

2. 激发光谱测定：a. 将待测溶液置于比色皿中，放入荧光光度计样品室。

b. 设置激发光谱扫描范围和步长，进行激发光谱扫描。

c. 记录激发光谱曲线。

3. 发射光谱测定：a. 将待测溶液置于比色皿中，放入荧光光度计样品室。

b. 设置发射光谱扫描范围和步长，进行发射光谱扫描。

c. 记录发射光谱曲线。

4. 数据分析：a. 利用Origin软件对激发光谱和发射光谱进行拟合处理，得到最佳激发波长和发射波长。

b. 根据罗丹明B标准溶液的浓度和荧光强度，绘制标准曲线。

c. 利用标准曲线对罗丹明B样品溶液进行定量分析。

五、实验结果与讨论1. 激发光谱和发射光谱：通过实验得到罗丹明B标准溶液和样品溶液的激发光谱和发射光谱。

激发光谱表明，罗丹明B在530 nm左右有较强的激发峰；发射光谱表明，罗丹明B在590 nm左右有较强的发射峰。

2. 标准曲线：根据罗丹明B标准溶液的浓度和荧光强度，绘制标准曲线。

线性回归分析结果显示，罗丹明B的浓度与荧光强度呈线性关系，相关系数R²为0.998。

光催化剂降解罗丹明实验心得
实验目的：通过光催化剂降解罗丹明，评估光催化剂在有机染料分解中的效果。

实验步骤：
准备实验装置和材料：准备光催化剂、罗丹明溶液、光源、反应容器等。

设置实验条件：将反应容器放置在合适的位置，确保光源能够均匀照射到反应容器中的溶液。

添加光催化剂：向反应容器中加入适量的光催化剂。

加入罗丹明溶液：向反应容器中加入一定浓度的罗丹明溶液。

开始光照：打开光源，开始对反应容器中的溶液进行照射。

观察和记录：在一定时间间隔内观察溶液的变化，记录颜色的消失情况以及反应时间。

分析结果：根据观察和记录的数据，分析罗丹明溶液的降解情况。

结论：根据实验结果得出结论，评估光催化剂在降解罗丹明中的效果。

实验心得：
在本次实验中，我们采用光催化剂来降解罗丹明。

通过观察和记录的数据，我们可以得出
光催化剂对罗丹明的降解效果显著。

在光照条件下，罗丹明的颜色逐渐消失，说明光催化剂具有良好的降解能力。

实验时间的延长有助于提高降解效果。

随着时间的推移，光催化
剂对罗丹明的降解效果逐渐增强，这表明反应需要一定的时间来达到最佳效果。

光源的选择对降解效果有影响。

在本实验中，我们采用了合适的光源，并确保其均匀照射到反应容器中的溶液。

这样可以保证光催化剂能够得到足够的激发，提高降解效果。

综上所述，通过光催化剂降解罗丹明的实验，我们验证了光催化剂在有机染料分解中的有效性。

这为进一步研究和应用光催化剂在环境治理和废水处理等领域提供了有力支持。

实验标准曲线法测定罗丹明B的含量1．实验目的（1）了解紫外-可见分光光度计的结构及使用方法。

（2）掌握标准曲线法定量分析的技术，了解紫外可见光谱法进行纯组分定量分析的全过程。

（3）掌握不同浓度的配制和样品含量的计算。

2．实验原理E1 带和E2 带是苯环上三个双键共轭体系中的π电子向π*反键轨道跃迁的结果，可简单表示为π→π * 。

B带也是苯环上三个双键共轭体系中的π→π * 跃迁和苯环的振动相重叠引起的，但相对来说，该吸收带强度较弱。

以上各吸收带相对的波长位置由大到小的次序为：R、B、K、E2、E1 ，但一般K和E带常合并成一个吸收带。

与可见光吸收光谱一样，在紫外吸收光谱分析中，在选定的波长下，吸光度与物质浓度的关系，也可用光的吸收定律即朗伯—比尔定律来描述：A= lg (Io /I) =ε bc其中A为溶液吸光度，Io为入射光强度，I为透射光强度，ε为该溶液摩尔吸光系数，b为溶液厚度，c为溶液浓度。

特征峰：1. 吸收峰的形状及所在位置——定性、定结构的依据2. 吸收峰的强度——定量的依据A = lg(1/T)=κCLT：透射率λ：摩尔吸收系数，单位：L·cm⁻¹·mol⁻¹C：浓度L：光程长紫外可见光谱的两个重要特征波峰：λmax, κ例：λmaxEt = 279 nm (κ=5012，logk=3.7)3．仪器与试剂仪器：紫外分光光度计，移液管，吸耳球，微量注射器。

试剂：罗丹明B溶液。

4．实验内容与步骤（1）标准曲线的绘制配制一系列标准浓度的罗丹明B水溶液，用水作空白溶液，测紫外吸收光谱，确定λmax，绘制c-A标准曲线。

（罗丹明B原液浓度1.000mM）（2）未知罗丹明B溶液的紫外可见光谱以水为空白溶液，测未知罗丹明B溶液的的紫外可见吸收光谱。

5．数据处理（1）制作标准曲线。

（2）根据未知罗丹明B溶液在λmax的A，在标准曲线上查浓度。

分子荧光法测定罗丹明b的含量实验报告
一、实验原理
罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比:
I=kc
基此，测定一系列已如浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。

二、仪器与试剂
1.仪器
RF-5301PC分子荧光分光光度计;200 mL的容量瓶12支，2 mL 的吸量管12支，250 mL烧杯12个。

2.试剂
1xl0*+gmL'的罗丹明B储备液。

三、实验步骤
1.标准溶液的配制
取11只200 mL的容量瓶分别加入1x104 g:mL'的罗丹明B储备
液0，0.20,0.40,0.60,0.80,1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00 mL，用水稀释至刻度，摇匀。

2.绘制发射光谱
激发波长固定在556nm,在500-700nm范围内扫描荧光发射光谱。

3.绘制标准曲线
荧光发射波长固定在640nm处，从发射光谱上取系列标准溶液的荧光发射强度。

4.未知试样的测定
在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。

5.绘制荧光强度Ir对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。

一、实验目的1. 了解分子荧光光谱法的基本原理和实验方法。

2. 掌握荧光分光光度计的操作技巧和数据处理方法。

3. 学习利用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。

二、实验原理分子荧光光谱法是一种利用物质分子在吸收特定波长的光后，发射出不同波长的荧光光谱进行定性和定量分析的方法。

当分子吸收光子后，外层电子从基态跃迁到激发态，随后经过辐射跃迁的方式返回基态，发射出一定波长的光辐射，形成荧光光谱。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光分光光度计、紫外可见分光光度计、离心机、电子天平、移液器、比色皿等。

2. 试剂：罗丹明B标准溶液、水、乙醇、磷酸盐缓冲溶液、磷酸盐标准溶液等。

四、实验步骤1. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的罗丹明B标准溶液，利用荧光分光光度计测定其激发光谱和发射光谱，以激发波长为横坐标，发射波长为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品处理：将待测样品用适当方法处理，使其成为适合进行荧光光谱测定的溶液。

3. 激发光谱测定：利用荧光分光光度计，在固定发射波长的情况下，改变激发波长，测定样品的激发光谱。

4. 发射光谱测定：在固定激发波长的情况下，改变发射波长，测定样品的发射光谱。

5. 定量分析：将样品的激发光谱和发射光谱与标准曲线进行对比，确定样品中罗丹明B的浓度。

五、实验结果与讨论1. 标准曲线绘制：绘制罗丹明B标准溶液的激发光谱和发射光谱，得到标准曲线。

2. 激发光谱测定：测定样品的激发光谱，确定激发波长。

3. 发射光谱测定：测定样品的发射光谱，确定发射波长。

4. 定量分析：根据标准曲线，确定样品中罗丹明B的浓度。

实验结果如下：1. 标准曲线绘制：罗丹明B标准溶液的激发光谱和发射光谱如图1和图2所示。

图1 罗丹明B标准溶液的激发光谱图2 罗丹明B标准溶液的发射光谱2. 激发光谱测定：样品的激发光谱如图3所示。

图3 样品的激发光谱3. 发射光谱测定：样品的发射光谱如图4所示。

图4 样品的发射光谱4. 定量分析：根据标准曲线，确定样品中罗丹明B的浓度为X mol/L。

教案（四）开课单位：化学及环境科学系课程名称：分析化学实验专业年级：2006级化学专业任课教师：分析化学课程组教材名称：分析化学实验2008-2009学年第1 学期实验三 分子荧光法测定罗丹明B 的含量一、实验原理罗丹明B 在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B 浓度呈正比：I f =k c基此，测定一系列已知浓度的罗丹明B 的荧光强度，然后以荧光强度对罗 丹明B 浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B 的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。

图1 罗丹明B 的分子结构二、仪器与试剂1．仪器F-4500型分子荧光分光光度计；1000 mL 容量瓶2只，100 mL 的容量瓶12支，1 mL 的吸量管1支。

2．试剂（1）1⨯10-2 g ⋅L -1的罗丹明B 储备液：准确称取1.0000 g 罗丹明B ，加用二次蒸馏水定容至100 mL ，将此溶液稀释100 倍就得到10-4 g ⋅L -1的罗丹明B 标准溶液。

三、实验步骤1．系列标准溶液的配制 取11只100 mL 的容量瓶分别加入10-2 g ⋅L -1的罗丹明B 储备液0，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50，0.60，0.70，0.80，0.90，1.00 mL ，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

2．绘制激发光谱和发射光谱 在300~600 nm 范围内扫描激发光谱；在ON CH 3COOHN H 3CH 3CCH 3+400~700 nm范围内扫描荧光发射光谱。

3．绘制标准曲线将激发波长固定在556 nm，荧光发射波长固定在573 nm 处，测定系列标准溶液的荧光发射强度。

4．未知试样的测定准确移取一定量1⨯10-2g⋅L-1的罗丹明B标准溶液于100 mL的容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，配制成未知样品。

在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。

5．绘制荧光强度I f对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。

罗丹明6G荧光猝灭法测定痕量次氯酸根梁爱惠;章表明【摘要】在稀盐酸介质中,ClO-与过量的I-反应生成I-3,I-3分别与罗丹明6G(RhG)、罗丹明S(RhS)、罗丹明B(RhB)及丁基罗丹明B(b-RhB)形成缔合微粒而导致各体系的荧光分别在550、550、580和580 nm处发生猝灭.ClO-浓度分别在0.015～0.43、 0.020～0.35、0.020～0.51 、0.020～0.35 mg/L范围内与各体系的荧光猝灭强度具有线性关系.各体系的检出限分别为0.010、 0.016、0.028和0.029 mg/L ClO-.据此建立了测定次氯酸根的荧光猝灭分析法,其中RhG-ClO--KI体系不仅灵敏度高而且稳定性较好,用于漂渍液和漂白粉中ClO-的测定,结果满意.【期刊名称】《桂林理工大学学报》【年(卷),期】2008(028)002【总页数】4页(P212-215)【关键词】ClO-;罗丹明6G;缔合微粒;荧光猝灭法【作者】梁爱惠;章表明【作者单位】桂林工学院,材料与化学工程系,广西,桂林,541004;桂林工学院,材料与化学工程系,广西,桂林,541004【正文语种】中文【中图分类】O657.3次氯酸盐是一种常用的漂白剂和消毒剂。

在人体组织中，在亚铁血红素的髓过氧化物酶的催化作用下，过氧化物与氯化物反应可产生ClO－或HClO。

这种在血球内产生的 ClO－/HClO或 Cl2(HOCl的分解产物)在生物大分子的氧化损伤过程中所起的作用已成为目前生物化学研究的热点问题之一。

从事这方面的研究工作通常都用NaOCl作为ClO－/HClO的来源［1，2］。

目前，测定ClO－的方法主要有碘量法［3］、流动注射化学发光法［4］、分光光度法［5］和高效液相色谱法［6］、酶传感器［7］等。

碘量法的缺陷是灵敏度低，不适合于测定低浓度的ClO－。

流动注射分析法测定水中ClO－的线性范围为5～500 mg/L，检出限为5 mg/L。

分光光度法测定罗丹明B的实验设计摘要:设计了一个分光光度法教学实验“分光光度法测定罗丹明B”,采用电脑处理实验数据,对所设计的实验的可行性及教学效果进行了探讨. 关键词:分光光度法;罗丹明B;实验设计;实验教学可见分光光度法是分析工作中最常用的方法之一,这种方法所用仪器价格低廉,操作简便,方法易于推广.广泛应用于工业分析,环境分析等方面.在分析化学和仪器分析的实验教学中,分光光度计的使用和用分光光度法测定样品的含量是必教的内容.在现有的多种教材中[1,2],都用“铁的比色测定”作为实验教学内容,教学时间为4—6学时.但在实际的教学过程中,很难连续安排4—6学时进行实验教学,而仪器分析实验要求一次性完成所有实验过程.实验课一般安排在下午或晚上,通常为3个学时.因此,在保证教学质量的前提下,一个实验尽可能在3学时内完成.根据教学经验,设计了一个可见分光光度法的教学实验.1 实验设计分光光度法测定罗丹明B.1.1 目的要求1.1.1 了解分光光度计的性能、结构及使用方法.1.1.2 掌握测量最大吸收波长的方法.1.1.3 掌握用标准曲线法测定试样的方法.1.2 原理罗丹明B对不同波长的光的吸收能力不同,根据吸光度A波长的关系,找出最大的吸收波长;罗丹明B在一定浓度范围内,在最大波长处的吸光度A与它的浓度C成正比,由标准曲线方程求出水样的浓度.1.3 实验用品试剂:罗丹明B标准液称取0.2500g罗丹明B,加入少量水溶解,移至250mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀.此罗丹明B溶液浓度为1.000g・L-1 .吸取此溶液1.0mL于100mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至标线,摇匀.此罗丹明B溶液为10mg・L-1 .仪器:10mL比色管、各种刻度的移液管.7200型或722型分光光度计.1.4 实验步骤1.4.1 吸收曲线的绘制在一支25mL的比色管中加入4mL10mg・L-1的罗丹明B,加蒸馏水至10mL刻度.在分光光度计上,用1cm的比色皿,以蒸馏水为空白,在450～650nm之间,每隔10nm测定一次吸光度.在吸光度极大值对应的波长左右各10nm的范围内每隔2nm测定一次吸光度.找出最大吸收波长.1.4.2 标准曲线的绘制在5支25mL的比色管中,用吸量管分别加入1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL罗丹明B标准溶液(10mg ・L-1),然后加蒸馏水至10mL刻度,摇匀.用上面所求得的最大波长为测量波长,用1cm比色皿,以蒸馏水作参比溶液测其吸光度.1.4.3 水样中罗丹明B的测定取2mL水样于25mL的比色管中,加蒸馏水至10mL刻度,其它步骤同上,测出吸光度.1.4.4 数据处理(1)在电脑上,打开Excel程序,新建表格文档,将1.4.1所测的数据输入表格中,A列为波长(横坐标),B列为吸光度(纵坐标),按下列步骤操作:点击“插入”、“图表”,在“图表类型”对话框中选择“XY散点图”中的“平滑线散点图”,按“下一步”;进入“图表源数据”,按“下一步”;在“图表选项”中填入“图表标题”、“数值(X)轴”、“数值(Y)轴”,按“完成”.页面上得到吸收曲线,找出最大波长,打印吸收曲线图.(2)新建一个Excel表格文档,将1.4.2所测的数据输入表格中,A列为浓度(横坐标),B列为吸光度(纵坐标),按下列步骤操作:点击“插入”、“图表”,在“图表类型”对话框中选择“XY散点图”中的“散点图”,按“下一步”;进入“图表数据”,按“下一步”;在“图表选项”中填入“图表标题”、“数值(X)轴”、“数值(Y)轴”,按“完成”.在页面上得到散点图,点击图中的数据点,右击,再单击“添加趋势线”,出现对话框后,点击“选项”,在“显示公式”和“显示R平方值”处打“√”,按“确定”,得到标准曲线及线性方程公式,打印标准曲线.(3)由线性方程公式求出水样中罗丹明B的浓度.2 实验可行性按照所设计的实验步骤进行实验.测得罗丹明B 最大吸收峰为554nm.线性方程为A=0.214C+0.0049,R2=0.9998.对合成水样进行测定结果如表1.稳定性试验表明罗丹明B的稳定时间超过30min.实验用水是蒸馏水,实验过程没有干扰物质影响.表1 水样测定结果水样测量值(mg・L-1)平均值(mg・L-1)RSD13.54 3.56 3.503.533.1%23.12 3.08 3.083.092.3%3 实际教学效果罗丹明B的检测用于可见分光光度法实验教学,突出了教学重点,原理易于讲清,操作简单,相关性好,精密度高,学生容易接受,能很好的体现教学要求.本实验设计为3个学时.教师准备好浓度为1.000g・L-1罗丹明B储备液,配制适当浓度的待测水样.在教学过程中,用15分钟讲解实验原理,仪器原理及仪器使用方法,剩余时间为学生实验.对二个班72位学生实验过程进行了考察.结果是:全部学生基本掌握仪器操作31 第2期占达东,王开强,陈多谋:分光光度法测定罗丹明B的实验设计方法,都能在3个学时内完成实验;全部学生都能够找出最大吸收波长,67位学生对标准曲线实验的测定结果:R2大于0.990.图1和图2是某一位学生的实验结果,最大吸收波长是554nm,R2=0.9966,两个水样测量结果分别是3.51mg・L-1和3.03mg・L-1,说明实验效果良好.用电脑辅助处理数据,数据处理快,教师在课内能判断学生的测量结果.如果R2小于0.990,说明学生的测量误差较大.电脑辅助数据处理使学生将所学的电脑知识与专业知识结合起来,提高了学生信息处理能力.4 结论教学实践证明,分光光度法测定罗丹明B的实验相关性好,精密度高,能满足实验教学要求.学生能在较短时间内掌握分光光度法的基本操作,掌握测量最大吸收波长的方法,掌握用标准曲线法测定试样的方法,获得很好的教学效果.所以,本文提出的“分光光度法测定罗丹明B”的实验教学设计是合理可行的/view/a02524212f60ddc cda38a073.html。

一、实验目的1. 理解单色荧光分析的原理及方法；2. 掌握单色荧光光度计的操作方法；3. 通过实验验证荧光强度与激发波长、发射波长、浓度之间的关系；4. 了解荧光猝灭现象及其影响因素。

二、实验原理荧光分析是利用物质在特定条件下吸收光能后，电子从激发态跃迁到基态时释放出的光辐射进行定性和定量分析的方法。

单色荧光分析是指使用单色荧光光度计对物质进行荧光光谱分析。

当物质吸收光能后，其电子会从基态跃迁到激发态。

激发态的电子不稳定，会以发射荧光的形式释放能量，回到基态。

荧光的波长通常比激发光的波长长，这种现象称为斯托克斯位移。

单色荧光光度计通过调节激发光波长和检测器波长，分别获得激发光谱和发射光谱，从而分析物质的荧光特性。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：单色荧光光度计、样品池、紫外-可见光分光光度计、计算机；2. 试剂：罗丹明B标准溶液、乙醇、水、无水乙醇。

四、实验步骤1. 将罗丹明B标准溶液配制成一系列不同浓度的溶液；2. 使用单色荧光光度计，在激发光波长为480nm的条件下，测定各浓度溶液的荧光强度；3. 改变激发光波长，记录激发光谱；4. 在激发光波长为480nm的条件下，改变检测器波长，记录发射光谱；5. 分析荧光强度与激发波长、发射波长、浓度之间的关系；6. 观察荧光猝灭现象，并分析其影响因素。

五、实验结果与分析1. 激发光谱分析：罗丹明B的激发光谱在510nm处出现一个明显的峰，说明罗丹明B的激发波长为510nm；2. 发射光谱分析：罗丹明B的发射光谱在540nm处出现一个明显的峰，说明罗丹明B的发射波长为540nm；3. 荧光强度与浓度的关系：随着罗丹明B浓度的增加，其荧光强度也随之增加，符合朗伯-比尔定律；4. 荧光猝灭现象：在罗丹明B溶液中加入乙醇，荧光强度明显减弱，说明乙醇对罗丹明B的荧光具有猝灭作用。

六、实验结论1. 通过本实验，掌握了单色荧光分析的基本原理及方法；2. 掌握了单色荧光光度计的操作方法；3. 验证了荧光强度与激发波长、发射波长、浓度之间的关系；4. 了解荧光猝灭现象及其影响因素。

荧光光谱法测定罗丹明b实验报告一、实验目的1.掌握荧光光度计的基本原理及使用。

2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。

3.掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。

4.了解影响荧光产生的几个主要因素。

5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。

二、实验原理原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子荧光。

对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧光指分子荧光。

具有不饱和基团的基态分子经光照射后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐射。

(1)激发光谱是指发光的`某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。

横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。

激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。

即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效率。

荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。

获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实际上选波长较长的高波长峰。

(2)发射光谱是指发光的能量按波长或频率的分布。

通常实验测量的是发光的相对能量。

发射光谱中，横坐标为波长（或频率），纵坐标为发光相对强度。

发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。

发射光谱的获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex 不变，改变第二单色器波长，让不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱;从曲线上找出最大的λem。

一、实验目的1. 掌握荧光法的原理和操作步骤。

2. 学会使用荧光分光光度计进行样品的定量分析。

3. 通过实验了解荧光法在物质含量测定中的应用。

二、实验原理荧光法是一种利用物质在特定波长光照射下产生的荧光现象进行定量分析的方法。

当物质分子吸收了特定波长的光子后，电子会从基态跃迁到激发态，随后在返回基态的过程中释放出能量，产生荧光。

荧光的强度与物质的浓度成正比，因此可以通过测量荧光强度来定量分析物质的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：罗丹明B标准溶液、罗丹明B样品溶液、乙醇、水等。

2. 实验仪器：荧光分光光度计、紫外可见分光光度计、移液器、容量瓶、试管等。

四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）取一系列容量瓶，分别加入不同体积的罗丹明B标准溶液，用乙醇稀释至刻度线，配制成一系列不同浓度的标准溶液。

（2）使用荧光分光光度计，在激发波长和发射波长分别为530nm和580nm的条件下，测量各标准溶液的荧光强度。

（3）以罗丹明B浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品溶液的测定（1）取一定量的罗丹明B样品溶液，用乙醇稀释至刻度线，配制成待测溶液。

（2）使用荧光分光光度计，在激发波长和发射波长分别为530nm和580nm的条件下，测量待测溶液的荧光强度。

（3）根据标准曲线，计算待测溶液中罗丹明B的含量。

五、实验结果与讨论1. 标准曲线的绘制根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性回归方程为：y = 0.0123x + 0.0045，其中y为荧光强度，x为罗丹明B浓度。

2. 样品溶液的测定根据实验数据，计算待测溶液中罗丹明B的含量为0.045mg/L。

3. 实验讨论（1）本实验采用荧光法测定罗丹明B的含量，具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点。

（2）实验过程中，应注意标准溶液的配制、测量条件的选择等，以保证实验结果的准确性。

（3）本实验结果表明，荧光法是一种有效、可靠的罗丹明B含量测定方法。

六、实验总结通过本次实验，我们掌握了荧光法的原理和操作步骤，学会了使用荧光分光光度计进行样品的定量分析。

一、实验目的1. 掌握荧光光度计的基本原理及使用方法。

2. 了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。

3. 掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。

4. 通过荧光光谱法对罗丹明B进行定性和定量分析。

二、实验原理荧光光谱法是一种基于物质分子在特定波长光照射下产生荧光现象的分析方法。

当分子吸收光能后，外层电子从基态跃迁到激发态，随后以发射荧光的形式释放能量，回到基态。

根据发射荧光的波长和强度，可以确定物质的种类和浓度。

在本实验中，我们使用罗丹明B作为研究对象。

罗丹明B是一种具有特征荧光光谱的染料，其激发光谱和发射光谱分别对应不同的波长区域。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光分光光度计、紫外可见分光光度计、恒温水浴、移液器、容量瓶、试管等。

2. 试剂：罗丹明B标准溶液、乙醇、去离子水等。

四、实验步骤1. 准备罗丹明B标准溶液：根据实验要求，配制一定浓度的罗丹明B标准溶液，并稀释至所需浓度。

2. 测定激发光谱：将罗丹明B标准溶液置于荧光分光光度计样品池中，在固定发射波长下，扫描激发光波长，记录激发光谱。

3. 测定发射光谱：在固定激发波长下，扫描发射光波长，记录发射光谱。

4. 标准曲线绘制：取一定浓度的罗丹明B标准溶液，测定其荧光强度，以荧光强度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

5. 样品分析：取待测样品，按照上述步骤测定其荧光强度，根据标准曲线计算样品中罗丹明B的浓度。

五、实验结果与讨论1. 激发光谱：罗丹明B的激发光谱显示，在激发波长为540nm处出现一个明显的峰，表明罗丹明B在540nm附近具有较强的吸收能力。

2. 发射光谱：罗丹明B的发射光谱显示，在发射波长为590nm处出现一个明显的峰，表明罗丹明B在590nm附近具有较强的发射能力。

3. 标准曲线：根据罗丹明B标准溶液的荧光强度和浓度，绘制标准曲线，线性关系良好。

4. 样品分析：根据待测样品的荧光强度和标准曲线，计算样品中罗丹明B的浓度为X mol/L。

X荧光分析实验报告
一、实验目的：
1.掌握荧光光谱的仪器操作和数据分析方法；
2.了解荧光分析的基本原理和应用。

二、实验原理：
荧光现象是指物质在受到激发后发射出比激发光波长长的光，其产生的机制是通过吸收光子，激发电子到高能级，然后电子从高能级跃迁到低能级，此跃迁伴随着光的辐射而发出。

荧光分析是利用荧光现象进行物质的定性和定量分析的方法，常用于生物医学、环境科学、材料科学等领域。

荧光光谱分析是荧光分析的主要手段之一，通过测量物质在不同波长的激发光下所发射出的荧光光谱，可以获得物质的荧光特性。

三、实验仪器和荧光剂：
实验仪器：荧光分光光度计；
荧光剂：罗丹明B荧光剂。

四、实验步骤：
1.开启荧光分光光度计，将罗丹明B溶液注入样品池；
2.选择适当的激发波长和扫描范围；
3.调节荧光分光光度计的参数，如增益、积分时间等，使得荧光信号在光谱中位于较高位置，且不超过仪器的最大量程；
4.进行荧光光谱扫描，记录下得到的荧光光谱。

五、实验结果与分析：
[插入荧光光谱图]
根据荧光光谱图，可以看出罗丹明B在激发波长为XXXnm的情况下，发射出了峰位位于YYYnm处的荧光光谱。

根据不同样品的荧光光谱特征，可以进行进一步的定量分析或鉴定。

六、实验结论：
通过本次实验，我们成功地获得了罗丹明B溶液的荧光光谱，并进一步了解了荧光分析的基本原理和应用。

荧光分析是一种灵敏度高、选择性好的分析方法，可以应用于各个领域的物质分析。