论文修改(1)

江苏农牧科技职业学院 毕业设计（论文） 题目：阴道涂片法在犬发情周期中的作用 姓名：刘玉鹏 学号：201311731

二级院系部：动物医学院 班级: 动医132 专业：动物医学

指导教师：陈琳职称：

二0一六年五月 阴道涂片法在犬发情周期中的作用 【摘要】母犬发情周期平均为6个月，发情的特点与其它家畜有较大区别。尤其是排卵时间在发情周期的变化范围较大，因而确定其准确的配种时间比较困难。本文旨在通过摸索自然发情母犬阴道上皮细胞的变化规律，以进一步搞清母犬的发情周期。在母犬的发情周期内，阴道涂片上可以观察到的上皮细胞有：基质细胞、副基质细胞、中间细胞和角化上皮细胞。观察表明，当母犬阴道上皮细胞中角化上皮比例达90%以上，为最佳配种时间。 【关键词】犬；发情周期；阴道涂片；阴道上皮细胞

Estrous Cycle In Dogs Identified On Vaginal Cytology Smears

Student :liuyupeng Tutor:chenlin Abstract：The estrous cycle in dogs is an average of six months. The feature of estrous is different of other animals.In particular ovulation time in estrus cycle changes in thelarge scope.And therefore determining their exact time of ovulation is more difficult.Here I’ll explore the natural estrus dogs through the changing of the vaginal epithelial cells to reveal the estrous cycle of dogs. List the four types of normal vaginal epithelial cells identified on cytology smears that you can see: basal cells; parabasal cells; intermediate cells and superficial cells. Making clear by observation, the best time of breeding is when 90% of the epithelial cells are superficial cells. Key words: Dog; Estrous cycle; Vaginal cytology smears; Vaginal epithelial cell 综述 母犬为季节性单次发情动物，正常在春季3~5月或秋季9~11月发情一次。并且母犬的发情周期受品种、年龄、饲养管理条件与环境的影响较大，野生犬一般1年1次发情；家犬26%一年发情1次，65%一年发情2次，9%一年出现3次发情。平均发情周期为6个月左右。【1】所以，要确定母犬准确的配种时间比较困难。而由于良种母犬的配种费用较高，犬主人对提高良种母犬繁殖率的期望值大，特别希望能帮助确定母犬的准确配种时间，收到较好的繁殖效果。据研究阴道涂片法是一种方便快捷的方法以鉴定犬的发情周期。 对母犬阴道细胞学进行研究的目的，是为了对犬的繁殖管理进行更好的研究和控制。阴道上皮的变化是由于生殖激素，尤其是雌激素的作用引起的，这种变化可以在阴道涂片上的细胞中表现出来。通过对母犬阴道细胞学做研究，探索母犬阴道上皮细胞的变化规律，以更清楚的确定交配时间。因此，阴道涂片的检查可以帮助人们对母犬发情周期进行确定以及对生殖系统的异常进行诊断。

1.阴道上皮细胞分类及形态 从阴道涂片上观察，阴道上皮细胞可以分为五类：基质细胞、副基质细胞、中间细胞、角化上皮细胞和其他细胞。【2】 1.1 基质细胞 基质细胞是其它阴道上皮细胞（副基质细胞、中间细胞、角化上皮细胞）的前体，他们定位于阴道上皮基膜上。基质细胞有一少量的嗜碱性细胞质，也可能含有液泡。基质细胞较少地出现在阴道涂片上。 1.2 副基质细胞 副基质细胞是上皮细胞的典型幼稚体。它们呈小的圆形，有少量的嗜碱性细胞质，有一个小的圆形的核。有的副基质细胞细胞质具有空泡，称之为泡沫细胞。 1.3 中间细胞 中间细胞比副基质细胞大，体积通常是副基质细胞的2倍。中间细胞又可分为小中间细胞和大中间细胞，它们的细胞核略呈圆形，且大小差别比较明显。大中间细胞通常被认为是角化上皮细胞的过渡体。 1.4 角化上细皮胞 角化上皮细胞是发育成熟的阴道上皮细胞。角化上皮细胞的细胞质通常含有少量至大量的空泡，有些角化上皮的胞质还含有一些无明显意义的黑色污点。角化上皮细胞的细胞核比大中间细胞的细胞核小，甚至是消失的。

1.5其他细胞 发情前期可视大量红细胞，会一直持续到发情末期，有些甚至到间情早期。在间情期可视较多的中性粒细胞，其他一些细胞比较少见

2.材料与方法 2.1实验材料 2.1.1受试母犬 由于老龄犬在身体代谢方面都有下降，也要筛选掉营养不良或过度肥胖的，在收集待配种的母犬45只中，年龄大概在2~3岁成年犬，且均属于家养宠物犬，进行阴道涂片检查。 2.1.2实验材料及器材 拭子：长度为10厘米的灭菌棉签；载玻片和盖玻片；常规染色缸；染液：瑞氏●姬姆萨染液、苏木素伊红染液和巴氏染液；高倍光学显微镜。

2.1.3采样 将犬固定于桌上，使阴道保持水平。首先戴上检查手套，用纱布将阴门周围擦拭干净，以一手分开阴门，将浸有生理盐水的灭菌棉签斜向上，约与水平方向呈45度角，插入阴道2~4cm左右后，水平插入阴道深部。轻轻转动棉签2~3圈，以保证棉签的头部沾取到足够的阴道上皮细胞。

2.1.4制片 将棉签的头部顺载玻片长轴于载玻片上转动以将样本移至玻片上，避免来回抹擦，以防过厚导致细胞重叠在一起。室内通风处晾干，选择瑞士●姬母萨染色，阴道细胞染色法等镜检观察。

3. 不同的发情周期犬及阴道涂片结果

3.1 发情前期 发情前期一般可持续3-12天，小型犬与大型犬有所区别，前者9持续9天左右，后者较长，13天左右，指从第一次出血当天至排卵之间的一段时期，前期是发情期的第一个部分，出血则为开始。发情前期的母犬外阴肿胀，可能伴有粉色或淡黄色分泌物的流出，分泌物的颜色会逐渐发白。若触诊可发现外阴发硬。发情前期在阴道涂片可见的上皮细胞主要是副基质细胞、中间细胞和角质化上皮细胞。一般可看到大量的红细胞分布，但由于有些犬不表现很明显的发情出血，故在阴道图片上看不到大量红细胞，在发情前期的初期图片上的上皮细胞主要是副基质细胞和小中间细胞，随后，副基质细胞和小中间细胞逐渐减少，大中间细胞及角化上皮细胞的比例逐渐增加。偶见白细胞（见图1） 图1 发情前期母犬阴道涂片（10×40） 3.2 发情期

这阶段是指母犬可以接受交配时间到拒绝交配的时间段，之后进入发情后期，两种时期间的过渡，也没太多的规定界限。这时期不像发情前期那样，这时母犬外阴部肿胀达到最大，触诊时并不会感觉发硬而是柔软的。之后开始慢慢消退，观察内壁有光泽发亮，淡黄色分泌物有增多。一般持续4~13天，平均九天。此时阴道涂片可见的细胞大于90%的是角质化的上皮细胞，通常无核。也无中性粒细胞，有些含有红细胞，至末期，红细胞继续下降，同时嗜中性粒细胞急剧上升，这一时期的角质化上皮细胞通常是有着浓缩的细胞核或者细胞核消失，有着大的细胞核的角化上皮细胞通常接近于大中间细胞。（见图2） 这一时期的阴道涂片上白细胞是应该消失的，一定比例的白细胞的出现是不正常的或者是子宫或者阴道炎症的提示。红细胞可能出现也可能不出现，如果出现则是来自子宫角的渗出。【4】 图2 发情期母犬阴道涂片（10×40） 3.3 发情间期

此时期是发情后的一段时间，这时，母犬不再吸引公犬并且不接受交配作一标志点。处于发情间期的母犬血液中雌激素的含量逐渐下降，角化细胞被未角化的细胞和大量的细胞碎屑所代替，此时上皮细胞均为角化细胞，嗜中性粒细胞数量会增加，这时期都没有红细胞。母犬阴道涂片上可以观察到角化上皮细胞的突然性的减少以及副基质细胞和中间细胞的增多。可观察到白细胞，而发情间期的晚期，白细胞数目减少，副基质细胞的数目将增加，这阶段的白细胞通常出现在上皮细胞。有时我们还可以观察到细胞碎片（见图3）

图3 发情间期母犬阴道涂片（10×40） 3.4 不动情期 此时期为间期至下一次发情前期之间，时间较长为7个月左右。这时的母犬发情期完全结束，精神状态已恢复往常。早期，子宫内膜增厚，表面上皮呈现柱状，子宫内各腺体快速发育，增大而变弯曲，腺体的分泌活动旺盛。到了后期，原来增厚的子宫内膜回缩，呈现较矮的柱状，腺体也变小，停止分泌活动。可是外阴部位已经不再肿胀，有所干瘪，且没有分泌物滴出，母犬不愿意接近公犬。不动情期母犬阴道图片可见的上皮细胞主要是基质细胞和中间细胞。白细胞和细菌只有极小数量的出现或者不出现。(见图4) 青春期母犬的阴道涂片和一般不动情期母犬的阴道涂片的特征是相似的。唯一的区别是副基质细胞的比例较高，并可以成片地脱落。【5】

图4 不动情期母犬阴道涂片（10×40） 3.5阴道涂片法在犬配种中的应用结果 对收集到的45只待配种母犬做阴道涂片检查，当阴道涂片出现如图2的结果时，我们对其配种两次，实验数据如表一。

被检母犬数（只） 妊娠数（只） 妊娠率（%） 45 42 93.33 表一 实验结果表明，母犬阴道涂片法可作为确定母犬发情周期的一个方法，并具有较高的准确性和临场意义。

4. 犬各发情周期阴道涂片与猫各发情周期阴道涂片的区别