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肝癌多药耐药机制研究进展

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中国肿瘤临床2013年第40卷第16期ChinJClinOncol2013,Vol.40,No.16www.cjco.cn作者单位：天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家肿瘤临床医学研究中心（天津市300060）通信作者：李慧锴tjchlhk@126.com

肝癌多药耐药机制研究进展李慧锴综述李强审校摘要原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，化疗是中晚期肝癌综合治疗的重要手段，但肝癌化疗多药耐药现象严重阻碍了化疗的效果。目前肝癌多药耐药的机制仍不明确，主要包括跨膜转运蛋白泵药作用，细胞内酶系统改变，MAPK信号转导系统的激活，控制凋亡的基因和蛋白的改变，肿瘤微环境的影响等。近年随着研究的不断深入，又有新的相关机制报道，如内质网应激和microRNA在肝癌耐药中发挥着不可忽视的作用。本文就近年来肝癌多药耐药的相关研究进展做简要综述，为临床提供新的思路。关键词原发性肝癌多药耐药化疗doi:10.3969/j.issn.1000-8179.20131377

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，全世界每年约有50万例新发患者，其中50％发生在我国，并呈逐年上升趋势［1］。肝癌具有多血管、恶性程度高、生长速度快、转移范围广和复发率高等特点，临床治疗效果不理想。治疗原发性肝癌以手术切除为首选方法，但术后复发率较高，而且大多数患者就诊时已丧失手术机会，只能进行辅助性综合治疗［2］。化疗是中晚期肝癌综合治疗的重要手段，但肝癌化疗多药耐药（multidrugresistance，MDR）现象严重阻碍了化疗的效果，因此，研究引起肝癌MDR的相关因素、作用机制并逆转MDR，提高肝癌化疗效果成为亟待解决的问题之一。1肿瘤MDR相关机制肿瘤MDR是指在肿瘤化疗中细胞对于一种化疗药物产生耐受后，同时对其他同一或非同一类型的化疗药物也产生耐药。据统计，90％以上的肿瘤患者化疗失败的原因都不同程度地与MDR有关。MDR的产生机制尚未阐明，目前认为肿瘤化疗MDR的主要分子生物学机制涉及以下几个方面。1.1跨膜转运蛋白减少药物在细胞中聚集

跨膜转运蛋白将化疗药物从肿瘤细胞中泵出，从而减少药物在细胞中聚集。这类蛋白属于ATP结合盒（ATP-bindingcassette，ABC）转运蛋白，主要包括P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、MDR相关蛋白（multidrugresistanceprotein，MRP）以及乳腺癌耐药相关蛋白（breastcancerresistanceprotein，BCRP）等。P-gp是一类由MDR1基因编码的跨膜糖蛋白，可将

细胞内多种抗肿瘤药物泵出细胞外，使细胞内药量低而无法有效杀灭肿瘤细胞。它还可促使药物在细胞内再分布，积聚于与药物作用无关的细胞器内，进一步降低作用于靶点部位的药物浓度，导致耐药［3］。1.2细胞内酶系统发生改变

还原型谷胱苷肽（reducedglutathionehormone，GSH）和谷胱苷肽巯基转移酶（glutathioneS-transfer⁃

MechanismsofMultidrug-resistanceinhepatocellularcarcinomaHuikaiLi,QiangLiCorrespondenceto:HuikaiLi;E-mail:tjchlhk@126.comDepartmentofHepatobiliarySurgery,TianjinMedicalUniversityCancerInstituteandHospital,NationalClinicalResearchCenterofCancer,Tianjin300060,ChinaAbstractHepatocellularcarcinoma(HCC)isoneofthecommonmalignanttumorsinChina.Themostimportanttreatmentformiddle-latestageHCCischemotherapy.However,thedevelopmentofmultidrugresistance(MDR)inHCCcandramaticallyreducetheefficacyofchemotherapeutictreatment.Atpresent,themechanismsregulatingthedevelopmentofMDRinHCCarestillunknown.ThesemechanismsinvolveATP-dependentdrugeffluxpump,enzymaticdeactivation,theactivationofMAPKsignalpathway,apoptosisgeneandproteinchanging,theinfluenceofthetumormicroenvironment,andsoon.Withthedevelopmentoftheresearch,somenewmechanismsarefound,suchastheendoplasmicreticulumstressandtheeffectofmicroRNA,whichcannotbeignored.ThisreviewaimstosummarizethemechanismsofMDRinHCCanddiscusspotentialtherapeutictargetsforanticancerintervention.Keywords:hepatocellularcarcinoma,multidrugresistance,chemotherapy

1008中国肿瘤临床2013年第40卷第16期ChinJClinOncol2013,Vol.40,No.16www.cjco.cnase，GST）的活化，DNA拓扑异构酶（Topoisomerase，TOPO）和蛋白激酶C（ProteinKinaseC，PKC）的活性

降低，都可能参与肿瘤细胞多药耐药的发生［4-6］。1.3MAPK信号转导系统的激活

丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase，MAPK）是哺乳动物细胞内广泛存在的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，MAPK信号转导通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转导系统，调节着细胞的增殖、分化、凋亡和细胞间相互作用。资料显示，MAPK通路在肿瘤化疗耐药中发挥着重要的作用，抗肿瘤药物能够引起MAPK信号转导系统的激活及MDR的产生［7］。1.4控制凋亡的基因和蛋白的改变多数化疗药物通过诱导肿瘤细胞凋亡来杀灭肿瘤细胞，细胞凋亡是一种由基因控制的细胞程序化死亡过程，肿瘤细胞MDR的产生也是抵抗和逃逸凋亡。随着人们对肿瘤耐药研究认识的深入，更多的基因被发现与肿瘤耐药密切相关。细胞凋亡有关因子及基因如NF-κB、bcl-2、c-Jun、p53、erbB2/neu、c-myc等都参与肿瘤细胞的耐药［8-9］。1.5肿瘤微环境的改变大量和长时间的的炎症刺激和纤维化形成促进了肝硬化和肝癌的形成和发展，其中基质成分与癌细胞和信号通路间的相互作用是造成肝癌耐药的重要原因之一。乏氧诱导因子1（hypoxiainduciblefac⁃tor1，HIF-1）在缺氧条件下广泛存在于人与动物肿瘤细胞内，可调控MDR基因I（MDR1）的表达，诱导MDR1/P-gp表达升高，同时通过促进血管形成、红细胞生成、糖代谢以及调节细胞凋亡、细胞周期等途径，使细胞适应乏氧微环境，是肿瘤预后差，易产生放疗、化疗耐受性的重要原因之一［8-9］。2肝癌MDR相关机制及研究进展2.1ABC转运蛋白将化疗药物从肝癌细胞中泵出P-gp分子量为150～180kDa，为ABC转运蛋白家族中的典型代表，由MDR1基因编码，通常认为其定位于细胞膜，将化疗药物泵出，以降低细胞内药物浓度，使用抗P-gp核酶可逆转肝癌细胞耐药性［10-11］。P-gp还分布于阿霉素诱导的耐药细胞系的细胞核膜表面，可使化疗药物从细胞核泵出［12］。但是P-gp在肝癌中的作用存在着争议。P-gp在HCC中的表达个体差异比较大，有学者通过对人肝癌组织和实验大鼠肝肿瘤的研究发现，P-gp过量表达与肿瘤进展和生存减低密切相关；而另有研究发现一部分HCC中P-gp的表达与肿瘤恶性分型和生存不相关，联合使用P-gp的调节剂维拉帕米并不能逆转HCC的MDR。P-gp还可以调节细胞凋亡，首先P-gp把药物和有毒物泵出胞外，然后影响caspase-3的激活，减少细胞凋亡［13］。2.2肿瘤微环境对肝癌耐药的影响肿瘤微环境指细胞外基质中的瘤样复合物，包括基质细胞和其所分泌的蛋白，这些物质促进肿瘤进展。肝癌微环境由肝癌细胞及其周围淋巴细胞、肝星状细胞、纤维母细胞、特异性免疫细胞，肿瘤血管和淋巴管等构成。这些细胞维持肝癌的增殖、逃逸生长抑制，诱导血管形成，促进侵袭和转移以及进行免疫破坏等。肿瘤内血供差减少了化疗药物与肿瘤细胞的接触使其耐药。肝脏有丰富的血供，但异常新生血管是功能异常而局部缺氧，局部的缺血缺氧使得化疗药物作用降低，因为许多化疗药物需要与氧分子发生反应产生细胞毒素后发挥作用。肝癌细胞缺氧微环境可诱导核转录因子HIF-1的表达，在转录水平调控多药耐药相关基因的表达，从而诱导肝癌多药耐药表型的形成，因此HIF-1α的表达上调是微环境诱导肝癌多药耐药形成的中心环节［14］。缺氧微环境下，肝癌细胞发生上皮-间叶转化（epitheli⁃al-mesenchymaltransition，EMT），细胞侵袭和迁移能

力增强，对药物敏感性明显降低。而间质细胞、胞外基质和肿瘤细胞自身通过与肿瘤细胞直接接触，以粘附分子为介质诱导耐药［15-16］。2.3microRNA表达异常

microRNA是一类长度在22nt左右的非编码RNA基因产物，通过与mRNA的3’UTR结合而介导

翻译水平的调控。研究表明在肝癌细胞中某些mi⁃croRNA表达异常，其通过调节很多重要的肿瘤相关

基因影响肝癌细胞的生物学功能。miR-106b在肝癌细胞中明显上调，靶向作用APC（adenomatouspolypo⁃siscoli），激活Wnt/β-catenin信号通路，影响G1/S期，

促进肝癌细胞的增殖。miR-490-3p在肝癌细胞表达增高，通过靶向作用ERGIC3调节细胞生长和促使上皮细胞向间叶细胞分化。miR-122是肝特异性miR⁃NA，在肝癌细胞中过表达可增加细胞对化疗药物阿

霉素和长春新碱的敏感性，并且能够影响细胞周期，使G2/M期延长［17-19］。2.4内质网应激诱导肝癌耐药

内质网（endoplasmicreticulum，ER）是真核细胞中蛋白质合成、折叠与分泌的重要细胞器。内质网具有极强的内稳态体系，但仍然有很多因素可导致ER功能的内稳态失衡，形成内质网应激（ER

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川芎嗪逆转癌耐药细胞多药耐药的实验研究现状

川芎嗪逆转癌耐药细胞多药耐药的实验研究现状


养、 细胞 毒实验 、 Ｔ—Ｐ Ｒ、 Ｒ Ｃ 流式细 胞仪等 方法 、 察川芎 嗪 观 对体外培养 Ｈ ｐ ２Ａ ｅＧ ／ ＤＭ 细胞 的逆转作用结果显示 川芎 嗪可
以 使细 胞 膜 表 面 的 Ｐ—ｇ ｌ０表达 减 弱 增 加 阿 霉 索对 Ｈ ｐ ２ ｐ７ ｅＧ ／
３ 川芎唼对 胃癌细胞多药耐药株影响 曲正 等 观 察 中 药 川 嗪 （ ＭＰ） 胃癌 耐 药 细 胞 系 Ｉ芎 Ｔ 对
耐药细胞的耐 药作 用， 结果 显示 ｌ Ｏ ／ Ｏ ｍｇ Ｌ和 ３ ０ ｇ Ｌ Ｔ ２ ｍ ／ ＭＰ 对细 胞 的抑 制 率 均 小 于 ５ ％。 两者 无 显著 差 异； ０ｍｇ Ｌ １０ ／
Ｔ ＭＰ加 丝裂 霉 索 （ ＭＭＣ 组 与相 应 浓 度 ＭＭＣ组 比较 。 胞 抑 ） 细
有在体外逆 转 Ｈ ｐ ２ Ａ Ｍ 细胞 多药耐药 的效应， ｅＧ ／ Ｄ 具有临 床 应用前景 ２ 川芎唼对肺癌细胞多药耐药株影响
’
４ 川芎唼对急性 白血病 （ 血癌 ） 多药耐药影响 赵永辰等 考察川芎嗪注射液作为急性 白血病 多药耐药逆 转剂用于临床的可能性 ， 为临床推广应用提供依据 ； 该作者按
有 效成分之一， 具有钙通 道阻滞活 性， 副作 用小， 毒 价格低廉
的特点， 临床常用于治疗心脑血管疾病 。 １ 川芎唼对肝癌细胞多药耐药株影响
Ｓ Ｍｍｃ ７ １Ａ 一７ ２ ／ ＤＭ 的 逆 转 及 其 机 制 ， 用 用 ＭＴ 采 Ｔ法 检
药至终浓度为 ０ ４ ｇ ｍ ， ｖ ． ／ ｌＭ１ｒ比色法 测定川芎 嗪 （ ） Ｔ 对
制率有显著差异 ； 加入 ３ ０ ｇ ＬＴ ２ ｍ ／ ＭＰ的阿霉 索（ Ｄ 、 Ａ Ｍ） 长春
地 辛 （ ＤＳ 、 Ｖ ）ＭＭＣ组 与 相 应 浓 度 各 药 物 组 比较 。 细 胞 抑 制 其 率 有 显 著 差 异 。 中 ＩＰ 其 Ｐ ＣＶＤ ＋ＴＭＰ Ｉ Ｐ Ｓ 、Ｐ ＣＭＭＣ＋Ｔ ＭＰ组 与相 应 浓 度 各 药 物 组 比 较 ， 显 著 差 异 ； 铂 （ 有 顺 Ｃ—Ｄ Ｐ 加 Ｄ ） Ｔ ＭＰ组 与相 应 浓 度 Ｃ—Ｄ Ｐ组 比 较 ， 胞 抑 制 率 无 显 著 差 Ｄ 细 异 ； 为 无 明显 细 胞 毒浓 度 的 Ｔ 认 ＭＰ 可 显 著 逆 转 Ｓ Ｃ Ｐ Ａ一１人 肺腺癌细胞株对 Ａ Ｍ、 Ｄ 、 Ｄ Ｖ Ｓ ＭＭＣ 的耐 药 性 。 对 Ｃ Ｄ 但 Ｄ Ｐ介 导 的 耐 药 性 无 影 响 ［ｌ ４。
野生型p53基因对肝癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制

野生型p53基因对肝癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制

野生型p53基因对肝癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制盖晓东;李国利;黄京子;徐鸿洁;王丹【期刊名称】《癌症（英文版）》【年(卷),期】2006(025)008【摘要】背景与目的:细胞凋亡的发生机制在肿瘤多药耐药中起重要作用,野生型p53基因是细胞凋亡的激活剂,与肿瘤多药耐药密切相关.本研究旨在探讨野生型p53基因能否实现对肝癌细胞多药耐药的逆转以及逆转的相关机制.方法:构建野生型P53蛋白表达序列的真核表达载体pCR 3.1-p53,用脂质体转染技术建立人肝癌细胞Bel-7402的p53转染细胞株,对转染细胞株进行MTT实验,观察p53基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和对肝癌细胞对长春新碱(vincristine,VCR)药物敏感性的影响,姬姆萨染色法观察细胞形态,免疫组织化学SP法检测细胞P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,逆转录PCR法检测细胞内mdr1、MRP、GSTπ、TopoⅡmRNA的表达.结果:转染p53的Bel-p53细胞生长明显慢于未转染的Bel-7402细胞.转染野生型p53的Bel-p53细胞在VCR浓度为0.01μg/ml,0.1μg/ml,1.0μg/ml,10μg/ml,25 μg/ml时,其药物敏感性增加;VCR作用最佳浓度为1.0μg/ml.形态学检查转染细胞,在VCR作用下细胞数明显减少,细胞散在不成片、细胞高度水肿、胞体不规则突起,可见核固缩、核裂解、核溶解.p53基因对Bel-7402细胞的mdr1/P-gp的表达有明显的抑制作用,对TopoⅡα基因的表达有上调作用,对GSTπ、MRP基因表达没有影响.结论:p53基因对肝癌细胞多药耐药有逆转作用,其逆转机制可能与降低mdr1/P-gp的表达、上调TopoⅡα的表达,从而增加细胞内VCR药物浓度和VCR药效有关.【总页数】6页(P954-959)【作者】盖晓东;李国利;黄京子;徐鸿洁;王丹【作者单位】北华大学医学院病理解剖教研室,吉林,吉林,132013;扬州大学医学院病理解剖教研室,江苏,扬州,225000;北华大学医学院病理解剖教研室,吉林,吉林,132013;北华大学医学院病理解剖教研室,吉林,吉林,132013;北华大学医学院病理解剖教研室,吉林,吉林,132013【正文语种】中文【中图分类】R735因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

原发性肝癌的中医药治疗研究新进展

原发性肝癌的中医药治疗研究新进展


Ｐ ３基 因 蛋 白表 达 ， 现该 药 显 著抑 制 ５ 发 Ｓ ＭＭＣ ７ ２ 一 ７ １细 胞 增 殖 和 促 进 细 胞 凋 亡 ，Ｃ ６ Ａ ９ ０处理 后 ，５ Ｐ ３表 达 增 强 ，ｅ一 Ｂ ｌ
２ Ｐ １ａ 表 达 降低 ，推 测 其 抗 肝 癌 可 、２ ｒｓ
１药 理作 用
速 、 度 恶 性 、 转 移 复 发 、 疗 难 度 高 易 治 大 、 存期 短等特 点 ， 病率 为 ２／ 生 发 ２１ ０ 万 ，其 总 体 的相 对 ５年 生 存 率 较 低 『 １ ］ ， 严 重 威 胁 人类 生命 健 康 。 肝 癌 归属 中 医学“ 积 、 聚 、 瘕 、 疸 、 胀 ” 肝 积 瘾 黄 臌 等 病 范 畴 ， 中医 药治 疗 肝 癌 在 防 治 肝 癌 复 发 、 转 移 以及 改 善 中 晚期 肝 癌 患 者 的症 状 、 高 生 存 质 量 、 长 生存 期 等 提 延 方 面 具 有 优 势 ， 是 原 发 性 肝癌 综 合 治 疗 中不 可 缺 少 的手 段之 一 ，现 将 近 年 中 医 药治 疗 厚 发 性 肝 癌 的 药 理 作 用 及
１２ 抑 制 肝 癌 细 胞 增 殖 和 诱 导 肝 癌 细 －
胞 凋 亡
王 昌俊 等 以 中 药 复 方 Ａ ９ ０ 由 Ｃ６ （ 莪术 、 白术 、 参 等 组 成 ） 大 鼠灌 胃 ， 苦 给 采 集 血 清 ， 处 理 人 肝 癌 细 胞 Ｓ ＭＣ Ｍ 一
细 胞 生 长 与分 化 的 作 用 ，发 现 Ｇ ｐｉ ｅｓ ｎ
７ ２ 细 胞 增 殖 明 显 受到 抑 制 。 王 庆 高 ７１
等旧观 察 到 癌 痛 消 胶 囊 大 、 、 剂 量 中 小 的 和 康 赛 迪 胶 囊 均 有 明 显 的 抑 瘤 作 用 ，造 模 各 组 动 物 的肝 癌 细胞 中均 见
肿瘤细胞干性状的识别及其耐药机制研究

肿瘤细胞干性状的识别及其耐药机制研究

肿瘤细胞干性状的识别及其耐药机制研究肿瘤细胞干细胞具有自我更新、多向分化和无限增殖的特性，它们在肿瘤治疗中起着至关重要的作用。

然而，肿瘤细胞干性状的识别和治疗是目前肿瘤研究领域的热点问题。

本文将探讨肿瘤细胞干性状的识别及其耐药机制研究的现状。

一、肿瘤细胞干性状的识别目前，肿瘤细胞的干性状识别主要有两种方法：一种是表面标记法；另一种是功能鉴定法。

表面标记法是通过检测特定的细胞表面标记，如CD133、CD44、CD24等，来鉴定干性状；功能鉴定法则是通过判断细胞是否具有自我更新、多向分化和无限增殖的特性，来确定干性状。

目前，表面标记法在识别肿瘤细胞中的干性状方面已经得到广泛应用。

比如，CD133在肝癌、胰腺癌、结肠癌等多种肿瘤中都被证明是干性状标记物。

CD44也被广泛应用于乳腺癌、肺癌、结肠癌等肿瘤的干性状识别中。

CD24则主要用于识别乳腺癌细胞中的干性状。

功能鉴定法则是通过培养肿瘤细胞，观察细胞具有的自我更新、多向分化和无限增殖的特性，来确定干性状。

这种方法比表面标记法更加严格，可以避免由于表面标记物的低表达或变异所带来的偏差。

然而，功能鉴定法需要至少4-6周的培养时间，工作量大，并且存在着细胞质扰动的风险。

二、肿瘤细胞干性状的耐药机制肿瘤细胞干性状的耐药机制是肿瘤治疗领域的一个难点。

目前，科学家们认为，肿瘤细胞的干性状和肿瘤细胞的耐药性存在一定的关联，干性状肿瘤细胞对传统化疗药物的耐药性更强。

这主要与以下方面有关：1.干性状肿瘤细胞对DNA损伤的修复能力更强。

一些研究表明，肿瘤细胞干性状与DNA损伤修复机制的增强有关。

拥有干性状特征的肿瘤干细胞，其DNA损伤修复或基因损失的复制等减少导致药物在其体内的作用时间缩短，不能达到临界浓度，导致化疗药物无法有效杀死肿瘤细胞。

2.干性状肿瘤细胞对药物的吸收能力更低。

肿瘤细胞表面的ABC转运蛋白是细胞的主动出泵途径，可以从细胞内排出多种化疗药物，从而使肿瘤细胞获得多重耐药性。