DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)

小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被过氧化氢酶（CAT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CAT）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80U/ml 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品编号 产品名称包装 C1098TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)50次产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。

对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB 显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA 。

细胞凋亡时抽提DNA 进行电泳检测，可以发现180-200bp 的DNA ladder 。

基因组DNA 断裂时，暴露的3'-OH 可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP 的催化下通过DAB 显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。

本试剂盒有如下优点。

(1) 高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA 断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。

(2) 特异性好：TUNEL 检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。

(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。

(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

(5) 实测效果好：参考图1。

图1. 本试剂盒的检测效果图。

A. HeLa 细胞未处理或用DNase I 室温孵育10分钟后的检测效果图。

翻译好的罗氏公司T u n e l试剂盒操作说明方案集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书(Insitucelldeathdetectionkit-POD法)一、原理：TUNEL（TdT-mediateddUTPnickendlabeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。

其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radishperoxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。

本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。

还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。

二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含：1号（蓝盖）EnzymeSolution酶溶液：TdT10×、2号（紫盖）LabelSolution标记液：荧光素标记的dUTP1×、3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5μl20×DAB+1μL30%H2O2+94μlPBS）、ProteinaseK工作液（10-20μg/mlin10mMTris/HCl，pH7.4-8）或细胞通透液（0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase1（3000U/ml–3U/mlin50mMTris-HCl，pH7.5，10mMMgCl2，1mg/mlBSA）等。

小鼠髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T3µg/L -160µg/L小鼠髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。

用纯化的人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，再与HRP 标记的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)浓度。

试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（320µg/L）0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

160µg/L 5 号标准品150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液80µg/L 4 号标准品150µl 的5 号标准品加入150µl 标准品稀释液40µg/L 3 号标准品150µl 的4 号标准品加入150µl 标准品稀释液20µg/L 2 号标准品150µl 的3 号标准品加入150µl 标准品稀释液10µg/L 1 号标准品150µl 的2 号标准品加入150µl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

生物素-链霉卵白素免疫组化检测试剂盒使用说明Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems规格:1kit保存:2-8℃避光保存产品简介：SP试剂盒，全称为过氧化物酶标记的链霉卵白素（Streptavidin/Peroxidase）检测试剂盒。

由于链霉卵白素的分子量是60kDa，有四个亚基可和生物素结合，等电点为6.5，所以该方法具有灵敏度高、特异性强、背景清晰、成本低廉的优点，但是由于使用了生物素，所以在某些内源性生物素含量比价高的组织中应慎用。

该系列检测试剂盒是性价比较高的免疫组化检测试剂。

试剂盒内容：试剂（无色液体）：3%H2O2去离子水3ml、6ml或18ml 试剂A（蓝色液体）：封闭用正常山羊血清工作液3ml、6ml或18ml 试剂B（黄色液体）：生物素标记山羊抗兔\小鼠IgG3ml、6ml或18ml 试剂C（橙色液体）：辣根酶标记链霉卵白素工作液（S-A/HRP）3ml、6ml或18ml 操作步骤:仅供参考1、石蜡切片，常规脱蜡至水。

2、如需采用抗原修复，在此步骤后进行。

3、3%H2O2去离子水（无色液体）孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。

PBS 冲洗，3分钟×3次。

4、滴加试剂A（蓝色液体）室温孵育10~15分钟，倾去，勿洗。

5、滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜。

6、PBS冲洗，3分钟×3次。

7、滴加试剂B（黄色液体），室温或37℃孵育10~15分钟。

8、PBS冲洗，3分钟×3次。

9、滴加试剂C（橙色液体），室温或37℃孵育10~15分钟。

10、PBS冲洗，3分钟×3次。

11、显色剂显色（DAB或AEC）。

12、自来水充分冲洗。

13、如果需要，可进行复染，脱水，透明。

14、选择适当的封片剂封片。

小鼠D-乳酸脱氢酶 (D-LDH)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0419（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。

本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。

适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组D-LDH浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。

用抗小鼠D-LDH抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的D-LDH会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。

依次加入生物素化的抗小鼠D-LDH抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

抗小鼠D-LDH抗体与结合在包被抗体上的小鼠D-LDH结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。

加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。

用酶标仪在450nm波长处测OD值，D-LDH 浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中D-LDH的浓度。

标本收集:1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。

避免使用溶血，高血脂标本。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

鸡α干扰素(IFN-α)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T1pg/ml-60pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中α干扰素(IFN-α)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡α干扰素(IFN-α)水平。

用纯化的鸡α干扰素(IFN-α)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α干扰素(IFN-α)，再与HRP标记的α干扰素(IFN-α)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的α干扰素(IFN-α)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡α干扰素(IFN-α)浓度。

试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

冰冻切片-抗胶原Ⅰ、Ⅲ的染色步骤用过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒(链霉卵白素分子量是60KDa，有客四个亚基可和生物素结合，等电点为6.5）试剂（无色液体）：3%H2O2去离子水试剂A（蓝色液体）：封闭用正常血清工作液试剂B（黄色液体）：生物素化二抗工作液（IgG/Bio)SP-9001：生物素标记山羊抗兔IgGSP-9002：生物素标记山羊抗小鼠IgG试剂C（黄色液体）：辣根酶编辑链霉卵白素工作液标本染色：1。

把有组织地载玻片放在37度烘箱中，放置5小时以上2。

从烘箱中取出，在载玻片上加PBS湿润组织3.3%H2O2去离子水孵育10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。

PBS冲洗，3分钟×3次4。

滴加试剂A，室温孵育15分钟，倾去，勿洗5。

滴加适当比例稀释的一抗（抗胶原Ⅰ大致稀释比例为1：200。

抗胶原Ⅲ大致稀释比例为1：300），37度孵育2-3小时，或4度过夜6。

PBS冲洗，3分钟×3次7。

滴加试剂B，室温或37度孵育15分钟，PBS冲洗，3分钟×3次8。

滴加试剂C，室温或37度孵育15分钟。

PBS冲洗，3分钟×3次9。

显色剂显色DAB，自来水充分冲洗10。

苏木素染色1分钟后，自来水冲洗5分钟，ddw洗涮一次（主要是染细胞核）11。

置盐酸酒精中大约3秒（70%酒精497.5ml,浓度为10mol/l盐酸2.5ml）12。

自来水冲洗20-30分钟，ddw洗涮一次13。

脱水：70%酒精1分钟，80%酒精1分钟，95%酒精2分钟，95%酒精2分钟，二甲苯5分钟，二甲苯5分钟。

14。

中性树胶封片附注：PBS配制：8gNacl,0.2gKCL,3.85gNa2HPO4.12H2O,0.27gKH2PO4.ddw定容至1L。

盐酸调PH值，广泛试纸到7。

精密试纸到6.5左右。

加2%-3%的TritonX-100（细胞膜打孔，使大分子物质可以进出细胞，易于抗原抗体结合）。

抗菌化学疗法亚甲蓝-介导光动力灭活-一种新型肠道病毒消毒剂目标：测试亚甲蓝-一种安全价格合适的光敏剂能否在环境中，对EV71进行光动力灭活。

方式：通过增加光剂量及光敏剂的浓度，在试管内观察对EV71及其他肠病毒的光灭活作用。

在新生幼儿活的机体内模拟病毒在环境中的传播。

处理后改变病毒DNA及蛋白质分析可能的方法。

结果：在悬液中对EV71的光动力灭活取决于剂量。

有亚甲蓝时，光灭活EV71的最佳条件是光剂量为200J/cm²。

该种光动力条件还能够灭活其他肠病毒包括脊髓灰质炎病毒及柯萨奇A2， A3，A16与B3病毒。

在一个模拟环境中，在硬表面上传播的EV71被亚甲蓝为媒介的光动力灭活并能阻止EV71传播到老鼠身上。

蛋白质痕迹与反转录酶-聚合酶链锁反应分析表明病毒蛋白质与染色体在光动力灭火后都受到了破坏。

结论：亚甲蓝为媒介的光动力灭活能够提供一种新的根除EV71环境污染源的方式预防感染。

关键词： EV71，光动力疗法简介：EV71是一种单核醣核酸无包膜病毒，是小病毒家族肠道病毒属。

大部分的EV71感染并不是致命的，例如在小孩之间传播的手足口病及疱疹性咽峡炎。

但是中枢神经感染的话，会出现致病的肺部及心脏并发症。

自从脊髓灰质炎病毒得到有效控制以来EV71就被看作是最重要的嗜神经肠道病毒。

据报道导全世界已经发生十几起EV71爆发。

首例是在1969年加利福尼亚被确认的。

EV71病毒能够抵抗70%的酒精消毒，该病毒认为是经口粪传播。

在日托机构，幼儿园，学前班等机构鼓励勤洗手防止EV71感染。

不过该种做法肯定不会减少环境中的微生物。

公共场合及医院硬物体表面消毒剂最常用的是过氧乙酸与氯化物。

但是此类消毒剂有遗传毒性及致癌性，对环境及人类有毒，对蹒跚学步小孩尤其有害，因为他们经常在地上爬并且舔手。

光动力疗法已经被应用到摧毁癌细胞及各种各样的微生物包括病毒与细菌，在有氧气的条件下，通过将光敏剂与光结合。

亚甲蓝是一种噻嗪化合物，几十年以来亚甲蓝手术中细胞染色，肿瘤边缘描绘，同时还被用作硝酸盐毒及高铁血红蛋白血症的解毒剂。