细胞活体染色技术

区别细胞死活的方法
1、活体染色剂—亚甲基蓝溶液以前的教材中，活体染色剂亚甲基蓝溶液可用来鉴别所有有新陈代谢的细胞，利用交换吸附的原理，只有活细胞才能完成交换吸附。

2、胚的染色—红墨水细胞膜在细胞存活时有选择透过性，所以有机染料一般不会吸收，所以用它可以鉴定种子的死活，如玉米细胞是活的，胚没被染红，胚乳被染红。

3、显微镜观察—质壁分离和复原活的成熟的植物细胞有明显的质壁分离和复原现象。

显微镜观察—胞质环流通过细胞质流动实验的观察可以知道，只有活细胞才有胞质环流现象。

4、染色剂—台盼蓝人教版教材中，用台盼蓝染色剂，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜，所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。

5、酵母细胞—由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。

细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色一、实验目的通过荧光活体染色观察液泡系和线粒体的形态结构及特点。

二、实验原理荧光活体染色法可以为我们提供高质量，高效率的细胞形态结构信息，其液泡系和线粒体都是细胞内非常重要的细胞器。

液泡系：是一种由膜包裹的小颗粒，由高度表达蛋白的外部囊泡和腺体细胞构成。

液泡系有多种类型，包括突触小泡、内分泌小体和溶酶体等，它们在细胞内部扮演着很重要的角色。

液泡系具有在荧光显微镜下能够显现的一些特定特征，如大小、形状、亮度和分布等。

活体染色可以提供很好的分辨率和细节，从而帮助我们更好地了解液泡系统的形态和功能。

线粒体：是一个直径约为1微米的双层膜结构，是细胞中的能量“发电厂”，在细胞内分解代谢物质，并生成ATP分子，以提供细胞各项生物学过程所需的能量。

可见线粒体可以帮助我们了解线粒体的数量、大小、形状和位置等特征，这有助于我们了解其功能和代谢状态。

三、实验材料激光共焦显微镜，激光荧光探针，放置在组织玻片上的细胞，PBS磷缓冲液，人工合成影响线粒体功能小分子等药物。

四、实验步骤1. 将细胞悬液滴在组织玻片上。

2. 添加荧光探针，荧光探针可以帮助我们区分液泡系和线粒体。

3. 给细胞注射小分子化合物，如人工合成影响线粒体功能小分子等，以研究药物对细胞器的影响。

4. 用激光共焦显微镜观察荧光探针和小分子化合物的荧光信号。

5. 分析显示出的细胞器信息，记录液泡和线粒体的数量、大小、形状和位置等特征。

五、实验注意事项1. 需要小心操作激光共焦显微镜，以避免损坏昂贵的设备或可能对人体存在危害的激光。

2. 荧光探针和小分子化合物需要在适当的浓度下添加，以避免对细胞的生长和存活产生不必要的影响。

3. 细胞的准确选择和应用荧光信号分析需要经验和技能支持，因此可能需要学习其他课程或培训活动，以便更好地完成任务。

六、实验结果正确的观察、检测和记录结果是实验的关键要求。

液泡系和线粒体的活体染色结果应包括液泡和线粒体的数量、亮度、位置和其它相关特征。

实验二 线粒体和液泡系的活体染色
实验目的：
1. 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态、数量与分布； 2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
实验原理
活体染色：是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但 对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是 显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和 产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结 构和生理、病理状态。 分类：根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把 活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体内活 体染色是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的 胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别 的目的。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植 物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被 选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
2、洋葱内表皮细胞线粒体的超活染色
用吸管吸取 1/5000 詹纳斯绿 B 染液，滴一滴在 干净的载玻片上，然后撕取洋葱鳞茎内表皮 1 小块，置于染液中，染色15-20min。 吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展 平，盖上盖玻片，显微镜观察。 先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入 高倍镜继续观察，此时，要注意细胞核位于细 胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生 质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒。 此即线粒体。
3、蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系活体染色 解剖蛙，剪取胸骨剑突软骨最薄部分一小块， 放入载玻片中央的1/3000中性红染液中，染色 5～10min。然后用吸管吸去染液，滴加1－2 滴Ringer液，盖上盖玻片，用油镜观察。 可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚， 在细胞核上方的胞质中，有许多被染成玫瑰红 色的大小液泡，这一特定的区域叫做高尔基区。

实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。

动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。

在一切动物细胞内皆有。

通常为圆形泡状，数目多少不定。

除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。

液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。

液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。

动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。

在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。

根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。

小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。

经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。

含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。

中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。

如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。

此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。

为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。

因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。

细胞材料要浸泡在生理盐水中。

长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。

（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。

3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。