第三章_愈伤组织诱导及分化调控
- 格式:ppt
- 大小:10.00 MB
- 文档页数:81
烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立一、概述烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立,是植物组织培养领域中的一项重要研究。
烟草作为一种重要的经济作物,其组织培养技术的研究对于提高其生产效率、优化品质具有重要意义。
愈伤组织的诱导是植物组织培养的第一步,也是后续细胞悬浮培养、基因工程操作等的基础。
烟草愈伤组织的诱导,通常通过无菌操作,利用激素等生长因子刺激烟草叶片等外植体细胞脱分化形成。
这一过程不仅受到激素种类和浓度的影响,还受到光照、温度、湿度等培养条件的影响。
优化诱导条件,降低褐化等不利因素的影响,是烟草愈伤组织诱导研究的关键。
细胞悬浮培养体系的建立,则是进一步将愈伤组织转化为可用于大规模生产和基因操作的细胞悬浮液。
通过选择适当的培养基、调节生长条件、优化细胞悬浮密度等手段,可以实现烟草细胞的稳定增殖和高效表达。
本文旨在探索烟草愈伤组织的诱导条件以及细胞悬浮培养体系的建立方法,通过系统的实验设计和优化,为烟草组织培养技术的发展和应用提供理论基础和实践指导。
这一研究也将为其他植物的组织培养提供有益的参考和借鉴。
1. 烟草愈伤组织诱导与细胞悬浮培养体系的重要性烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立,在植物组织培养、基因工程以及植物快繁等多个领域都具有重要的科学意义和实践价值。
愈伤组织的诱导是植物组织培养中的关键环节。
通过特定的培养基和培养条件,可以诱导烟草叶片等外植体脱分化形成愈伤组织。
这一过程不仅验证了植物细胞的全能性,而且为后续的细胞悬浮培养提供了适宜的起始材料。
细胞悬浮培养体系的建立为植物细胞的大规模培养和遗传转化提供了平台。
通过优化悬浮培养条件,可以获得大量生长状态良好的细胞,进而用于后续的基因转化、次生代谢产物生产等研究。
悬浮培养体系还可以用于筛选具有优良性状或抗性的细胞株系,为烟草育种提供新的途径。
烟草愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系在植物快繁方面也具有潜在的应用价值。
通过诱导愈伤组织再分化形成不定芽或胚状体,可以在短时间内获得大量的植株,从而实现烟草的快速繁殖。
水稻愈伤组织的诱导一、目的掌握外植体的消毒方法和接种技术;了解愈伤组织诱导的过程。
二、原理以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养时,在一定的诱导培养条件下都能诱导形成愈伤组织。
愈伤再经分化培养,通过器官发生途径或体细胞胚胎发生途径可再生成植株。
外植体源自自然环境均为带菌状态,在接种前都必须进行消毒。
对于难消毒的材料,有时要几种消毒剂配合使用;对于多茸毛表面粗糙不平的材料,要加展著剂(吐温20)以增强消毒效果。
三、实验材料水稻成熟种子(用于诱导愈伤组织);四、仪器设备及用具超净工作台培养室、培养皿:¢9cm×2 枪形镊量筒:100mL×2 三角瓶:50mL×2(无菌);废液缸;保鲜膜;标签纸五、试剂及培养基(一)试剂:75%酒精,2% NaCLO,无菌水(每组1瓶400mL)(二) 培养基:诱导培养基:NB+2,4-D 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L(pH5.8)六、实验步骤1、接种室、培养基及用具表面消毒用75%酒精棉球试擦超净工作、镊子,将培养基及用具放工作台,打开紫外灯,照射20分钟以表面消毒。
之后关紫外灯,打开工作台风机,通风30分钟后可进行无菌操作。
2、种子去壳选取饱满、无霉变成熟水稻种子,用手工脱去谷壳(注意保持胚完整),每人准备30粒去壳种子,并按照分组放到三角瓶中。
3、操作者双手的清洗与消毒在进入无菌室之前,各操作者先用自来水清洗干净双手并凉干,然后进入无菌室,坐在超净台前位子上后,用含75%酒精的酒精喷壶喷洒双手对双手进行消毒,在超净台风口待双手酒精风干后进入超净工作台。
(注意:酒精喷壶喷洒双手时切记不要把酒精喷到超净台的有机玻璃板上!)4、超净台面的表明消毒(以下工作在超净工作台内进行)用枪形镊子从含75%酒精棉球的容器中取一团棉球,仔细把整个超净台面擦试一遍,尽量降低超净台面的带菌量,并将废棉球丢到废液缸中,然后点亮超净台里面放置的酒精灯。
实验三大豆子叶的愈伤组织诱导姓名:曹跃强专业班级:农学10-4 学号:20100359 指导老师:刘帆、倪苏摘要:本实验以大豆子叶作为外植体,研究不同种类激素、浓度对大豆子叶的愈伤组织的影响。
实验结果表明:在四种培养基中,以MS+6-BA4.0 mg/L+NAA0.2 mg/L培养基愈伤组织诱导大豆子叶的愈伤组织最为有效。
大豆(Glycine max)别名菽、毛豆、黄豆、青豆、黑豆,是一种蝶形花科一年生草本植物[1]。
大豆呈椭圆形、球形,颜色有黄色、淡绿色、黑色等,大豆叶为三出复叶,花蝶形;大豆为短日照作物,品种间对短日照的敏感性差别大。
中国大豆的集中产区在东北平原、黄淮平原、长江三角洲和江汉平原。
大豆含有丰富的优质蛋白、不饱和脂肪酸、钙及B族维生素是我国居民膳食中优质蛋白质的重要来源。
大豆中维生素B1、维生素B2和烟酸等B 族维生素含量也比谷类多数倍,并含有一定数量的胡萝卜素和丰富的维生素E[2]。
大豆原生质体和单细胞的组织培养与植株再生早在60年代,Cocking 用酶法成功地分离出高等植物原生质体后不久,就有不少研究工作者试图用豆科植物进行原生质体的分离和培养[3]。
本实验以大豆的子叶作为外植体,通过该实验获得大量的大豆子叶的愈伤组织,且进一步学习和了解植物组织培养技术。
关键词:大豆子叶离体培养愈伤组织1 材料与方法1.1 材料名称及来源大豆子叶由植物生理系提供1.2 实验方法1.2.1 材料处理将大豆从荚中取出,用纱布包裹起来,流水冲洗,进行预处理备用。
1.2.2 培养基制备以MS作为基础培养基,添加不同种类的激素、浓度,如表1所示:表1 四种不同培养基的水平水平(mg/L)6-BA NAA 2,4-D KTA 2.0 0.2 ——B 4.0 0.2 ——C —— 2.0 1.0D —— 4.0 1.0以上培养基均加入肌醇100mg/L,蔗糖30g/L,琼脂5g/L,pH=5.8,且均配置500ml即可。