洁净室(区)沉降菌检测标准操作规程
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洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（ 文件编码：SOP-QC-002 版本号:00）
第 1页 共 6页 名称：洁净室（区）沉降菌测试标准操作规程 共 6 页
编号：SOP-QC-002 版本号：00
起草: 日期： 变更原因：
审核: 日期：
批准: 日期： 执行日期： 颁发部门：质量保证部
分发部门：质量总监、质量保证部、质量控制部
目的
制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试方法，指导沉降菌的测试工作。
范围
适用于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任
QC微生物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进行统计分析。
程序
1. 定义
1.1. 菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。
1.2. 沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3. 动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态设备在指定的方式下进行，并且有指定的人员按照规范操作的状态。
2. 测试方法
2.1. 测试过程
2.1.1. 设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平皿或者自制TSA平皿。
2.2. 测试条件
2.2.1. 洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2. 风速、压差应在合格范围内。
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第 2页 共 6页 2.2.3. 动态测试。
2.3. 测试方法
2.3.1. 将准备好的培养皿按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。将采样台面取样位置或采样辅助设施表面消毒，打开培养皿，将培养皿盖置于已消毒位置，将培养皿置于培养皿盖上，使培养基表面充分暴露后，将培养皿盖盖上后倒置。
2.3.2. 在每一只培养皿上标记好具体的取样位置及取样日期，将所有培养皿在QC微生物室进行培养观察。
2.4. 培养观察计数
2.4.1. 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2. 每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本身是否污染。可每次选定2只培养皿作对照培养。
2.5. 计算
2.5.1. 平均菌落数M= M1＋M2＋…MNN
M1＝1号培养皿菌落数
M2＝2号培养皿菌落数
Mn＝n号培养皿菌落数
n＝培养皿总数
2.5.2. 结果判定
2.5.2.1. 最终结果采用平均值。但每个碟的菌落数亦不得多于标准规定。
2.5.2.2. 如有一个碟的菌落数超过标准规定，平均却符合规定，也以不合格论。
2.5.2.3. 静态测试时，若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
2.6. 注意事项
2.6.1. 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
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第 3页 共 6页 2.6.2. 采取一切措施防止人为因素对样本的污染。
2.6.3. 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
2.6.4. 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
2.6.5. 对于沉降菌测试，符合最少采样点数时，还必须符合最小培养皿数。最少采样点数与最少培养皿见附表。
2.7. 日常监控
2.7.1. 对于沉降菌的监控，宜设定纠偏限和警戒限 ，以保证洁净室（区）的微生物浓度受到控制。应定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并做趋势分析。静态动态监控都可以采用此方法。
2.7.2. 对于沉降菌的取样频次。如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情况后，也应确定其他项目的检测频次：
2.7.2.1. 连续超过纠偏限和警戒限
2.7.2.2. 停工时间比预计长
2.7.2.3. 关键区域内发现污染存在
2.7.2.4. 在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修
2.7.2.5. 日常操作记录反映出倾向性的数据
2.7.2.6. 消毒规程的改变
2.7.2.7. 引起生物污染的事故等
2.7.2.8. 当生产设备有重大维修或增加设备时
2.7.2.9. 当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时
2.8. 洁净车间采样点分布图详见《洁净区洁净度监控管理规程》。
2.9. 微生物实验室采样点分布图详见《微生物实验室环境测试规程》。
相关文件和记录
序号 文件/记录名称 文件/记录编号 备注
1 沉降菌测试记录 SOP-QC-002a-00
洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（ 文件编码：SOP-QC-002 版本号:00）
第 4页 共 6页 2 洁净区洁净度监控管理规程 SMP-QA-015
3 微生物实验室环境测试规程 SMP-QA-031
变更 /修订记录：
原版本 生效日期 本次变更/修订的原因、依据及详细变更内容
附图： 最少采样点数目
面 积
m2 洁 净 度 级 别
A级 C级 D级
洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（ 文件编码：SOP-QC-002 版本号:00）
第 5页 共 6页
< 10 2~3 2 2
≥10～< 20 4 2 2
≥20～< 40 8 2 2
≥40～< 100 16 4 2
≥100～< 200 40 10 3
≥200～< 400 80 20 6
≥400～< 1000 160 40 13
≥1000～< 2000 400 100 32
≥2000 800 200 63
注：对于A级的单向流洁净室（区），包括A级工作台，面积指的是送风口的表面积。对于C级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是指房间面积。
洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（ 文件编码：SOP-QC-002 版本号:00）
第 6页 共 6页 沉降菌测试记录
编号：SOP-QC-002a-00
测试人： 测试日期： 测试时间：
测试依据： 测试级别： 级
生化培养箱型号： 编号：________________有效期至：__________________
霉菌培养箱型号：_____________编号：________________有效期至：__________________
培养基批号 ： 来源： 有效期至：__________________
培养条件：
测试标准：
标准规定
级别 标准 警戒限 纠偏限
复核人： 复核日期： 培养结果
测试区域 培养皿号 平均 结论
1 2
阴性对照
