叶绿素的提取与鉴定

叶绿素的提取、分离一、实验目的1.掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。

2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。

二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。

故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。

2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。

滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。

把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。

结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

毛细管点样薄层色谱展开三、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等剪纸形状滤液基线95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。

（2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。

分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。

[详解]叶绿素分离试验一、叶绿体中色素的提取和分离说明1、取材时要选用新鲜的颜色较深的叶片，以便使滤液中含较多的色素2、研磨时加入二氧化硅的目的是为了研磨的充分，更有效的破坏细胞结构;加入少许碳酸钙的目的是为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。

因为叶绿素分子结构中含有一个镁原子，当细胞破裂时，细胞液内有机酸的氢可以取代镁原子而成为褐色的去镁叶绿素，碳酸钙可中和有机酸以防止去镁反应的发生3、研磨时要迅速、充分。

一是因为丙酮容易挥发;二是为了使叶绿体完全破裂，从而能提取出较多的色素;三是叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而破坏。

4、制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角。

这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀，便于观察实验结果。

5、画滤液细线时，一定要细且直。

这样可以防止色素带重叠，使色素分子均匀分布在一条直线上，做到扩散起点一致。

重复划2,3次，是为了增加滤液细线上的色素分子数量，使实验效果更加明显。

6、分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解于层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。

7、识记实验结果的色素带分布及宽窄(四种四素扩散速度的先后顺序为:胡萝卜素,叶黄素,叶绿素a,叶绿素b)二、习题一、选择题1、叶绿素不溶于( )A(水 B(石油醚 C(丙酮 D(苯2、下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是( )A(提取高等植物叶绿体中的色素 B(用纸层析法分离色素C(了解各种色素的吸收光谱 D(验证叶绿体中所含色素的种类3、通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，自上而下依次为 ( )A(胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿紊b B(胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素C(叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素 D(叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 4、在进行叶绿素提取和分离的实验时，不能让层析液没及滤液细线的原因是( )A(滤纸上几种色素会扩散不均影响实验效果 B(滤纸上的滤液细线会变粗而使色素太分散C(色素会溶解在层析液中，使实验结果不明显 D(滤纸上的几种色素会混合起来不分散5、对“叶绿体中色素的提取和分离”实验中，下列描述正确的是( )A(将5 g新鲜完整的菠菜叶，放入研钵中，加入丙酮、石英砂、CaCO以后，迅速研磨 3B(用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，并连续迅速地重复划2,3次C(把划好细线的滤纸条插入层析液中，并不断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散D(色素分子是有机物，不溶于水，所以研磨过程中加入丙酮是为了溶解色素6、在叶绿体中的色素提取和分离实验中，四种色素在滤纸条上扩散速度最快的和最慢的是( )A、胡萝卜素和叶绿素bB、胡萝卜素和叶绿素aB、叶黄素和叶绿素b D、叶黄素和叶绿素a7、装置甲是用来验证绿色植物在有光条件下释放氧气的装置，装置乙和丙是另外两个装置，通常可作为本实验的对照实验的装置( )A(乙和丙 B(乙C(丙 D(乙和丙都不是8、叶绿素体中的各种色素能够在滤纸上彼此分离的原因是( )A(色素提取液中的不同色素已经分层B(阳光的照射使各种色素能彼此分开C(各种色素随层析液在滤纸上扩散速度不同D(丙酮使色素溶解并分离的扩散速度不同9、下列生物实验:?制作洋葱根尖分生区装片时，用10,盐酸处理根尖;?将重组质粒导人大肠杆菌，先用氯化钙溶液处理大肠杆菌;?用胰蛋白酶处理动物组织，使细胞分散开来，进行细胞培养;?用纤维素酶和果胶酶处理白菜和甘蓝体细胞，进行体细胞杂交;?为了更充分提取叶绿体中的色素，在研磨叶片时，加入二氧化硅。

第1篇一、实验目的1. 学习并掌握从菠菜中提取叶绿素的方法。

2. 了解叶绿素的化学性质及其在光合作用中的作用。

3. 培养实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的主要色素，位于叶绿体的类囊体膜上。

叶绿素分子中含有镁离子，是镁卟啉化合物。

叶绿素分为叶绿素a和叶绿素b两种，分别吸收红光和蓝紫光，对绿光的吸收最少，因此叶片呈现绿色。

叶绿素的提取方法主要有溶剂提取法和层析法。

本实验采用溶剂提取法，利用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）将叶绿素从菠菜叶片中提取出来。

叶绿素在有机溶剂中溶解度较高，因此可以通过这种方式提取。

三、实验仪器与材料1. 仪器：研钵、剪刀、烧杯、漏斗、玻璃棒、滤纸、滤液细线、色谱柱、脱脂棉、纱布等。

2. 材料：新鲜菠菜叶、丙酮、碳酸钙等。

四、实验步骤1. 准备材料：称取30g新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎。

2. 研磨：将剪碎的菠菜叶放入研钵中，加入少量碳酸钙，用研杵研磨至烂。

3. 提取：将研磨好的菠菜叶转移到烧杯中，加入30mL丙酮，盖上表面皿，浸泡10-15分钟。

4. 过滤：用滤纸将提取液过滤，收集滤液。

5. 层析：将滤液滴在色谱柱的滤纸条上，层析液从上至下流过，观察色素分离情况。

五、实验结果与分析1. 提取液颜色：提取液呈绿色，表明叶绿素已从菠菜叶片中提取出来。

2. 层析结果：色谱柱上出现四条不同颜色的色带，自上而下依次为胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）。

六、实验讨论1. 叶绿素在光合作用中起着至关重要的作用，是植物进行能量转换的关键色素。

本实验通过溶剂提取法成功提取了叶绿素，为后续研究提供了基础。

2. 实验过程中，碳酸钙的加入有助于防止研磨过程中叶绿素被破坏。

此外，层析法可以有效地将叶绿素与其他色素分离，便于进一步研究。

3. 本实验操作简单，但需要注意以下几点：- 研磨过程中要避免研磨过猛，以免破坏叶绿素结构。

- 提取过程中要控制好溶剂的用量和浸泡时间，以确保叶绿素充分提取。

根据它们在有机溶剂中的溶解特性可用丙酮将它们从叶片中提取出来并可根据它们在不同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同将它们彼此分开叶绿素是一种双羧酸的酯可与碱发生皂化作用产生的盐能溶于水可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开
•Hale Waihona Puke 一、实验目的• 了解也绿色提取分离的原理以及它们的光 学特性和在光合作用中的意义 • 二、实验原理 • 叶绿体色素室植物吸收太阳光能进行光合 作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素组成。根据它们在有 机溶剂中的溶解特性，可用丙酮将它们从 叶片中提取出来，并可根据它们在不同有 机溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的 吸附能力不同将它们彼此分开。
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五、结果与讨论 •分析每个实验的结果，注意事项和原因。 •六、作业 •1、记录每个实验的结果。 •2、为什么提取叶绿体色素要加入少许碳 酸钙和石英砂？
• 叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化作 用，产生的盐能溶于水，可用此法将叶绿素与 类胡萝卜素分开。叶绿素与胡萝卜素都有光学 活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光镜检 查和用分光光度计精确测定。叶绿素在光照下 可产生暗红色的荧光；叶绿素的化学性质很不 稳定，容易受强光破坏，特别是叶绿素与蛋白 分离后光破坏更快；叶绿素中的镁可被H+取代， 称为褐色的去镁叶绿素；加入铜盐后则成为铜 代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破 坏，故常用此法制作子午的浸制标本。
• 二、叶绿体色素的理化性质 • 1、叶绿体的荧光现象：取上述色素提取液少许于试管 中，分别观察反射光和透射光，比较观察到的颜色不同 并分析原因。 • 2、光对叶绿素的破坏：取上述色素提取液少许分别加 入两个试管中，一支试管放在暗处，一支试管放在强光 下照射，2 h后观察颜色变化，分析原因。 • 3、铜代反应：取上述色素提取液加入试管，逐滴加入 浓盐酸，直至溶液呈现褐色，此时叶绿素分子已经遭到 破坏，称为去镁叶绿素，然后加入醋酸铜结晶少许，慢 慢加入溶液，直至出现鲜亮的绿色，此时即形成了铜代 叶绿素。 • 4、黄色素与绿色素的分离：取上述色素丙酮提取液10 ml，加入盛有20 ml乙醚的分液漏斗，并沿漏斗边缘加 入30 ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液 分为两层。色素已经全部转入上层乙醚总，弃去丙酮和 水，再加入5 ml30%KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗， 静置10分钟，再加入蒸馏水10 ml，摇动后静置分离， 得到黄色素层和绿色素层，分别保留，分析实验结果和 原因。