液相色谱中的谱图

高效液相色谱法（反相液相色谱）

一、液相色谱法方法的分类和选择 1、方法的分类：

根据流动相和固定相极性的相对强弱，液相色谱法分为正相色谱法和反相色谱法。两类

色谱使用流动相极性顺序与物质的极性流出顺序恰好相反。

正相色谱法中通常固定相的极性较大，，如硅胶、氧化铝等，流动相极性小于固定相的

极性。实验时，流动相的选择从极性小到极性大递增，样品中极性弱的组分最先流出，随后是极性逐步增大的组分流出。

反相色谱中使用的固定相极性小，如C18键合的硅胶固定相，流动相的极性大于固定

相的极性。通常用水-甲醇作流动相时，样品中极性强的组分先流出，随后是极性较小的组

分。流动相的极性变化从最大的水开始，逐步增加甲醇的比例，流动相的极性逐步减弱。

在HPLC中应用最广泛的是反相分配色谱法（常称为反相色谱法）。它是利用样品组分在流动相和固定相之间的溶解度之差进行分离。在反相色谱柱中改变流动相组成、进行梯度

淋洗和恢复柱子分配平衡容易实现，因此同一柱子可以长时间使用，柱效长久，重复性较好。

在反相色谱法中，极性大的组分先出峰，保留体积小，峰形扩散小，分离效率高，流动相价

格便宜，毒性较小，容易得到。

正相色谱法大多利用吸附的原理进行分离，正相色谱法的柱子如使用强极性的流动相（如水、醇等溶剂）会使柱中吸附剂活性失去后很难恢复，特别是分离极性强的组分时，常

常因为固定相的吸附作用使保留体积增大，引起峰的扩散和拖尾。 2、方法的选择：

HPLC方法的选择主要取决于样品的组成、结构的类型、溶剂性能、相对分子质量范围

等。一般来讲相对分子质量大于2000的高分子化合物，主要采用凝胶色谱法进行分离。相对分子质量小于2000的化合物可以利用它在水中和有机溶剂中的溶解度及溶解性质进行分

离。如极性大的水溶性化合物和在水中可解离的离子化合物，可用不同类型的色谱柱以离子

色谱法进行分离；在水中溶解但不解离的化合物（如糖类）可用反相色谱法进行分离，以甲

醇或乙睛-水作为流动相。

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HPLC的常用术语解释

高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC)又称高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱、近代柱色谱等。它是在生化和分析化学中常用的柱层析仪。接下来小编为大家整理了HPLC的常用术语解释，希望对你有帮助哦!

第一部分 色谱曲线

1、色谱图(chromatogram)：色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图，或者通过适当的方法观察到的纸色谱或薄层色谱斑点、谱带的分布图。

2、(色谱)峰(chromatographic peak)：色谱柱流出

3、峰底(peak base)：峰的起点与终点之间的连接的直线

4、峰高(h ，peak height)：色谱峰最大值点到峰底的距离(图1 中的BE)。

5、峰宽(W ，peak width)：在峰两侧拐点(图1 中的F ，G)处所作切线与峰底相交两点的距离

6、半高峰宽(W h/2 ，peak withd at half height)： 2

通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离(图1 中的HJ)。

7、峰面积(A ，peak area)：峰与峰底之间的面积

8、拖尾峰(tailing peak)：后沿较前沿平缓的不对称的峰。

9、前伸峰(leading peak)：前沿较后沿平缓的不对称的峰。(又叫伸舌峰、前延峰)

10、假峰(ghost peak)：除组分正常产生的色谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定性、定量带来误差。(又叫鬼峰)

11、畸峰(distrorted peak)：形状不对称的色谱峰，

前伸峰、拖尾峰都属于这类。

HPLC的常用术语及符号

第一部分 色谱曲线

1、色谱图（chromatogram）：色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图，或者通过适当的方法观察到的纸色谱或薄层色谱斑点、谱带的分布图。

2、（色谱）峰（chromatographic peak）：色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生的响应信号的微分曲线。

3、峰底（peak base）：峰的起点与终点之间的连接的直线（图1 中的CD）。

4、峰高（h ，peak height）：色谱峰最大值点到峰底的距离（图1 中的BE）。

5、峰宽（W ，peak width）：在峰两侧拐点（图1 中的F ，G）处所作切线与峰底相交两点的距离（图1 中的KL）。

6、半高峰宽（W h/2 ，peak withd at half height）：通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离（图1 中的HJ）。

7、峰面积（A ，peak area）：峰与峰底之间的面积（图1中的CHEJDC）。

8、拖尾峰（tailing peak）：后沿较前沿平缓的不对称的峰。

9、前伸峰（leading peak）：前沿较后沿平缓的不对称的峰。（又叫伸舌峰、前延峰）

10、假峰（ghost peak）：除组分正常产生的色谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定性、定量带来误差。（又叫鬼峰）

11、畸峰（distrorted peak）：形状不对称的色谱峰， 前伸峰、拖尾峰都属于这类。

12、反峰（negative peak）：也称倒峰、负峰，即出峰的方向与通常的方向相反的色谱峰。

14、原点（origin）：纸或薄层板上滴加试样部位的中心点（图２）。

15、斑点（spot）：平面色谱法中，组分在展开和显谱后呈现近似圆形或椭圆形的色区（图2）。

1 液相色谱基础知识

1.1 液相色谱名词术语

Mobile phase：流动相，在色谱柱中存在着相对运动的两相，一相为固定相，一相为流动相。流动相是指在色谱过程中载带样品（组分）向前移动的那一相。

Stationary phase：固定相，柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。

Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。

Detection wavelength：检测波长，

retention time：保留时间，被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间

Peak:峰

Peak Base：峰基线，经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴

Peak Height：峰高，色谱峰顶点至峰底的距离。

Peak Width：峰宽，色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离

Peak Width at Half Height：半峰高宽

Peak Area：峰面积

Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰 Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰

Ghost Peak: 假峰，并非由试样所产生的峰

Baseline Drift:基线漂移

Baseline Noise:基线噪音

Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象.

1.2 流动相

1.2.1 流动相类型

正相液相色谱流动相：一般正相色谱固定相极性大于流动相极性，采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），极性小的组分先出柱。