溶血素作用及原理

溶血素作用及原理
血液分析仪试剂主要包括溶血素、染液。

溶血素主要是嗜酸溶血素和嗜碱溶血素，染液则根据染色原理及染色目的不同，可分为化学染色、核酸染色、过氧化物酶染色等。

血液分析仪溶血素，它可以将红细胞溶解掉(溶血作用)，再进行计数，就得出全血中白细胞数量。

每份标本测定完毕之后，都要对仪器管道、小孔、计数池等进行清洗，以免相互干扰。

溶血素作用原理
1、溶解红细胞，以利于白细胞计数：在以电阻法计数的三分类血液分析仪中，红细胞体积和白细胞体积有重合的区域，而且红细胞的个数是白细胞个数的近一千倍，因此在对白细胞进行电阻法计数时，必须加入溶血素，破坏掉红细胞，才能准确地对白细胞进行计数。

2、作用于白细胞膜，可使白细胞膜穿孔，胞浆流失(检测内核)，胞浆流失后的白细胞中，因为只剩下细胞核，淋巴细胞最小，单核细胞稍大，中性粒细胞反而以大细胞形式存在。

这样在电阻法对白细胞进行三分类的白细胞直方图上淋巴细胞在图形最左边区域，单核细胞在中间区域，粒细胞在最右边区域。

适当的离子强度和与血浆相同的渗透压能在一定时间内完整地保持血细胞原来的体积而合适的电导率能保证获得与细胞体积，相应的脉冲大小，血液分析仪试剂则是一类强的表面活性剂，一个作用是溶解红细胞，释放出血红蛋白(HGB)，形成稳定的血红蛋白衍生物，进行血红蛋白的测定。

它的另作用一方面是溶解红细胞，进行白细胞分类与计数。

一、实验目的1. 了解溶血现象的原理。

2. 掌握溶血效应实验的基本操作方法。

3. 学习溶血素和补体在溶血反应中的作用。

4. 分析不同溶血效应的影响因素。

二、实验原理溶血现象是指红细胞破裂、溶解的一种现象。

溶血效应实验主要包括溶血素和补体在溶血反应中的作用。

溶血素是一种能与红细胞表面抗原结合，导致红细胞溶解的蛋白质。

补体是一种存在于血液中的蛋白质，参与机体免疫反应，可激活红细胞溶解。

三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜鼠血、生理盐水、溶血素、补体、绵羊红细胞、抗绵羊红细胞抗体、小试管、移液器、离心机、显微镜等。

2. 仪器：水浴锅、振荡器、微量滴定板、温度计等。

四、实验方法1. 红细胞悬液的制备取新鲜鼠血10 ~ 20ml，放入盛有玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白质，使成脱纤血液。

加入生理盐水100ml，摇匀，1000~1500r/min离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤2~3次，至上清液不显红色为止。

2. 溶血素和补体的添加取小试管6支，分别编号为1、2、3、4、5、6。

分别加入生理盐水、溶血素、补体、抗绵羊红细胞抗体、溶血素+补体、溶血素+抗绵羊红细胞抗体，各0.5ml。

3. 绵羊红细胞的添加向上述6支试管中分别加入0.5ml绵羊红细胞悬液，摇匀。

4. 观察与记录将试管置于37℃水浴锅中，观察30分钟，记录溶血现象。

五、实验结果与分析1. 实验结果（1）生理盐水组：红细胞无明显变化。

（2）溶血素组：红细胞明显溶解。

（3）补体组：红细胞无明显变化。

（4）抗绵羊红细胞抗体组：红细胞无明显变化。

（5）溶血素+补体组：红细胞明显溶解。

（6）溶血素+抗绵羊红细胞抗体组：红细胞无明显变化。

2. 实验分析（1）溶血素对红细胞具有溶解作用，溶血素组红细胞明显溶解。

（2）补体在溶血反应中发挥重要作用，溶血素+补体组红细胞明显溶解。

（3）抗绵羊红细胞抗体对溶血反应无影响，溶血素+抗绵羊红细胞抗体组红细胞无明显变化。

简述抗链球菌溶血素O实验的原理及应用1. 概述抗链球菌溶血素O实验是一种常用的实验方法，用于检测人类血清中是否存在对链球菌溶血素O的抗体。

链球菌溶血素O是链球菌菌株的一种分泌物，具有溶解红细胞的能力。

由于人体免疫系统可以产生抗体来对抗链球菌感染，因此抗链球菌溶血素O实验可以作为一种诊断工具，用于检测患者体内是否存在链球菌感染抗体。

2. 原理抗链球菌溶血素O实验的原理基于抗原-抗体反应。

抗原是指能够引发免疫反应的物质，抗体是人体免疫系统产生的一种特殊蛋白质，可以与特定抗原结合并发挥免疫作用。

在抗链球菌溶血素O实验中，链球菌溶血素O作为抗原，与患者体内的抗体相互作用。

具体操作原理如下： - 采集患者血液样本，离心分离血清。

- 准备链球菌溶血素O抗原。

- 将血清与链球菌溶血素O抗原反应，如果存在相应的抗体，血清中的抗体与抗原结合形成免疫复合物。

- 加入大肠杆菌裂解物，通过人工制备的人红细胞酶系统来检测溶血现象。

- 观察试管中血清的溶血情况，根据溶血程度判断患者体内是否存在抗链球菌溶血素O抗体。

3. 应用抗链球菌溶血素O实验的应用主要体现在以下几个方面：3.1 临床诊断抗链球菌溶血素O实验可以用来判断患者体内是否存在抗链球菌溶血素O抗体。

通过检测血清的溶血情况，可以评估人体免疫系统对链球菌感染的反应程度。

临床上通常将抗链球菌溶血素O实验作为一种辅助诊断手段，用于判断患者是否患有链球菌感染。

3.2 感染监测抗链球菌溶血素O实验也可用于监测链球菌感染的治疗效果。

通过定期检测患者血清中的抗链球菌溶血素O抗体水平，可以评估治疗的有效性。

如果抗体水平明显下降，说明治疗效果良好；反之，如果抗体水平升高或持续较高，可能需要调整治疗方案。

3.3 流行病学研究抗链球菌溶血素O实验在流行病学研究中也有一定的应用。

通过检测不同地区、不同人群血清中的抗体水平，可以评估不同人群对链球菌感染的暴露情况和免疫状况。

这对于了解链球菌传播途径、控制传染病的流行具有重要意义。

兔抗绵羊红细胞溶血素在补体实验中的应用产品名称：兔抗绵羊红细胞溶血素规格：0.5ml*10支/盒免疫动物：家兔性状：冻干粉储存：4～-20℃原免疫血清效价1：4000用途:仅供科研实验原理利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。

在接近50%溶血（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。

以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。

本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。

1．试剂及配制(1)缓冲生理盐水：①贮存液：●Na2HPO4·12H2O 2.85g●KH2PO4 0.27g（加蒸馏水至100毫升，4℃保存）●NaCl 17.00g②应用液（缓冲液）：5毫升贮存液加95毫升蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1毫升。

当日配制。

12小时内使用。

（2）2%绵羊红细胞（From：南京森贝伽生物公司）：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever 液中可保存3周。

用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。

必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。

(3)冻干绵羊红细胞溶血素（From：南京森贝伽生物公司）（规格：0.5ml/瓶，0.5ml蒸馏水复溶）：将本品（效价1：4000），用缓冲液作1：2000倍稀释（即0.5ml溶血素加999.5毫升缓冲液）。

(4)待测血清：新鲜血液室温放置30分钟，再4℃放置60分钟，使血块收缩。

4℃离心（3000r/min）10分钟，取上清，-20℃保存。

2.试管法操作步骤（改良Mayer法）（1）致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1：2000），混匀，置37℃水浴30分钟。

（2）稀释血清：待测血清0.2ml，加缓冲液3.8ml，稀释度为1：20。

实验小鼠血清溶血素含量测定一、血清溶血素（抗体）分光光度检测法【实验原理】抗原（绵羊红细胞，即SRBC）进入机体，刺激机体产生特异性抗体（溶血素，即抗SRBC抗体）；抗原抗体在体内外结合形成抗原抗体复合物，暴露出补体的C1q结合点，激活补体，导致绵羊红细胞溶解。

通过检查机体产生抗体的量，反映机体的免疫功能状态。

【实验目的】掌握血清抗体（溶血素）含量的测定方法。

【试剂与器材】1．小鼠，绵羊红细胞，补体；2．都氏试剂或蒸馏水；3．试管，吸管，钳子，镊子，微量加样器，水浴箱，分光光度计（540nm）。

【操作方法】1．把SRBC用生理盐水洗3次（1000～2000转/分，5分钟），弃上清，3﹕5（V/V）用生理盐水稀释SRBC浓度约为20亿个/ml。

2．实验前4天，每鼠腹腔注射SRBC0.2ml；3．免疫4天后取血，分离血清；4．用生理盐水适当稀释血清（200倍左右）；5．取1ml稀释后的血清加入反应管，再加0.5ml10%SRBC，置冰浴中，每管加入1ml补体；6．将反应管移至37℃水浴中，10分钟后再把其移至冰浴中；7．2000转/分离心10分钟，再取上清1ml，加入3ml都氏试剂（或蒸馏水）混匀，10分钟后用分光光度计（540mn）测定吸光度；8．另取一试管作测定实验用的SRBC半数溶血时的吸光度值。

取同实验用的10%SRBC0.25ml，加4ml都氏试剂，摇匀，10分钟后用分光光度计测定吸光度。

【结果】按下式计算样品的半数溶血值HC50：样品HC50=样品的吸光度值×稀释倍数SRBC半数溶血时的吸光度值【注意事项】在操作过程中，严格遵守冰浴时间，以控制反应时间的一致性。

【作业】计算出样品的溶血素值。

附：二、微量溶血检测法（一）实验原理同血清溶血素分光光度检测法。

（二）实验材料1．小鼠、绵羊红细胞、补体（1：20）。

2．PBS（含Ca2+、Mg2+）。

3.试管、吸管、96孔板、微量加样器、水浴箱、酶标仪等。

一、实验目的1. 了解溶血素的制备方法。

2. 掌握溶血素效价的测定方法。

3. 学习溶血素在免疫学中的应用。

二、实验原理溶血素是一种能与红细胞膜上的抗原结合，导致红细胞溶解的抗体。

在实验中，我们通过制备溶血素，并测定其效价，以了解溶血素在免疫学中的应用。

三、实验材料1. 实验动物：家兔2. 生理盐水3. 抗原：鸡红细胞4. 抗血清：鸡红细胞抗血清5. 0.1%戊二醛6. 吸管、移液器、试管等实验器材四、实验方法1. 制备抗原：取新鲜鸡红细胞，用生理盐水洗涤3次，去除血浆和杂质，最后用生理盐水配成2%的鸡红细胞悬液。

2. 制备溶血素：取家兔，注射鸡红细胞抗原，经过一段时间免疫后，采集血清，用0.1%戊二醛进行灭活处理，得到溶血素。

3. 溶血素效价测定：a. 取12支试管，编号1-12号，每支试管加入0.1ml生理盐水；b. 从1号试管开始，依次加入1、2、4、8、16、32、64、128、256、512、1024、2048倍的溶血素，每加入一次后摇匀；c. 在每支试管中加入0.1ml 2%鸡红细胞悬液，摇匀；d. 37℃水浴孵育30分钟；e. 取出试管，观察红细胞溶解情况，记录未溶血的最高稀释倍数，即为溶血素效价。

五、实验结果1. 制备的溶血素呈淡黄色，半透明状。

2. 溶血素效价为1:256。

六、实验分析1. 溶血素的制备：通过注射鸡红细胞抗原，使家兔产生特异性抗体，进而制备出溶血素。

2. 溶血素效价测定：通过将溶血素进行不同倍数的稀释，观察红细胞溶解情况，确定溶血素的最小有效浓度，即溶血素效价。

3. 溶血素在免疫学中的应用：溶血素可以用于检测抗原抗体反应，以及研究免疫学相关疾病。

七、实验结论本实验成功制备了溶血素，并测定了其效价。

实验结果表明，溶血素在免疫学中具有重要作用，可以用于检测抗原抗体反应，以及研究免疫学相关疾病。

八、实验注意事项1. 实验过程中，应严格控制操作条件，避免溶血素效价受到影响。

一、实验目的了解补体介导的溶血反应原理，掌握溶血实验的基本操作方法，并通过实验验证补体在溶血反应中的作用。

二、实验原理补体系统是一组存在于血清和细胞膜上的蛋白质，在免疫应答中起着重要的防御作用。

当抗体与抗原结合形成抗原-抗体复合物后，补体可以识别并与之结合，进而激活一系列的级联反应，最终导致靶细胞的溶解。

本实验通过观察红细胞在补体参与下的溶血现象，验证补体在溶血反应中的作用。

三、实验材料1. 红细胞悬液（绵羊红细胞）2. 抗红细胞抗体（溶血素）3. 新鲜血清4. 补体（豚鼠血清）5. 磷酸盐缓冲盐水（PBS）6. 移液器7. 离心机8. 吸管9. 实验试管10. 酶标仪四、实验方法1. 红细胞悬液的制备：取绵羊红细胞，用生理盐水洗涤三次，去除血浆蛋白和杂质，最后配制成2%的红细胞悬液。

2. 抗体和补体的稀释：将溶血素和补体用PBS按适当比例稀释。

3. 实验分组：- A组：红细胞悬液 + 抗体 + 补体- B组：红细胞悬液 + 抗体 + PBS- C组：红细胞悬液 + PBS + PBS- D组：红细胞悬液 + PBS + 补体4. 实验操作：- 将各组的试剂加入试管中，轻轻混匀。

- 将试管置于37℃水浴中孵育30分钟。

- 离心各试管，取上清液。

5. 溶血测定：- 用酶标仪测定各组的吸光度值。

- 根据吸光度值计算溶血率。

五、实验结果1. A组（红细胞悬液 + 抗体 + 补体）出现明显的溶血现象，吸光度值显著降低。

2. B组（红细胞悬液 + 抗体 + PBS）吸光度值略有下降，但溶血现象不明显。

3. C组（红细胞悬液 + PBS + PBS）吸光度值无变化，无溶血现象。

4. D组（红细胞悬液 + PBS + 补体）吸光度值略有下降，但溶血现象不明显。

六、实验结论本实验结果表明，补体在溶血反应中起着重要作用。

当抗体与抗原结合形成抗原-抗体复合物后，补体可以识别并与之结合，进而激活一系列的级联反应，导致红细胞溶解。

抗链球菌溶血素（ASO）的相关知识与治疗策略一、ASO的产生与变化（一）ASO对肾脏损伤的机制链球菌溶血素是A群链球菌产生的一种外毒素，简称抗“O”或ASO。

能溶解红细胞，并对机体多种细胞有毒性作用。

人体感染溶血性链球菌后，血清中可出现大量抗链球菌溶血素“O”（抗“O”）抗体。

链球菌感染后，其细胞壁上的M蛋白或胞浆及其分泌的蛋白质作为抗原，与免疫球蛋白结合后，形成免疫复合物，沉积于肾小球基底膜上而引起肾小球滤过膜的损伤；链球菌的某些抗原带有阳性电荷，可通过电荷反应与肾小球结构结合而成为原位种植抗原，与免疫球蛋白结合后形成原位免疫复合物，进而激活补体，引起肾小球内皮质细胞及系膜细胞增生，吸引中性粒细胞及单核细胞浸润而引起病变。

（二）ASO升高与消失的时间抗链球菌溶血素“O”抗体测定，对于急性肾小球肾炎的诊断有重要价值。

正常人体内的抗链球菌溶血素“O”（ASO）具有一定的基础值。

急性肾小球肾炎有70%～80%的患者可有抗链球菌溶血素“O”抗体滴度增高。

一般在链球菌感染后1周滴度上升，4～6周达高峰；如无并发症或再感染2个月后下降，2～6个月降到感染前水平。

其滴度直至病愈后数月到半年方才降至正常水平，故一次测定结果增高不一定就是近期感染的指征，应多次动态观察，并结合临床作全面分析，怀疑风湿活动而抗“O”多次正常，有助于排除本病。

此外，风湿性心肌炎、心包炎，风湿性关节炎也增高；急性咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染也增高；在某些与溶血性链球菌感染无明显关系的疾病如肝炎、肾病综合征、过敏性紫癜等也可见非特异性增高，要加以区别对待。

（三）ASO交叉反应据研究，有70%的患者ASO升高并支原体感染抗体也升高，但与CMV、EBV、螺旋体等感染无升高，不排除ASO与肺炎支原体存在交叉反应。

二、ASO感染的证据（一）ASO感染的人数A族β溶血性链球菌感染（GAS）在儿童常见，据统计，每年全世界有超过47万例急性链球菌感染后肾小球肾炎（APSGN），且97%在发展中国家，大约有5000例最终死亡。

抗链球菌溶血素O临床意义抗“O”是抗链球菌溶血素“O”的简称。

溶血性链球菌产生的一种代谢产物能溶解红细胞,所以这种产物取名为“O”溶血素。

人体感染了A 组溶血性链球菌后,“O”溶血素在体内作为一种抗原物质存在。

为了对抗这一抗原物质,人体就相应地产生另一种抗体来中和这种“O”溶血素,以免生命受到危害。

临床意义1、抗“O”值超过400单位，提示有过溶血性链球菌感染。

因此，凡由此菌感染所引起的疾病（如猩红热、丹毒、急性肾炎等等）会使抗“O”值增高。

由于抗“O”与血沉的变化均无特异性，即使病人抗“O”、血沉都增加情况下，对活动性风湿病的诊断，仍应结合临床表现来考虑。

2、某些与溶血性链球菌无明显关系的疾病，抗“O”值也可增加。

如少数肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织疾病、亚急性感染性心内膜炎以及有些过敏性紫癜等病人，鉴别诊断时应结合临床资料综合分析。

3、高胆固醇血症、巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤病人，ASO也可增高。

升高：（1）溶血性链球菌感染、猩红热、丹毒、链球菌性咽炎、扁桃体炎。

对风湿热、急性肾小球肾炎有间接诊断价值、若多次检测结果递增、并伴有红细胞沉降率(ESR)加快可有助于诊断。

（2）少数非溶血性链球菌感染：病毒性肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织病、亚急性感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤等。

（3）寒冷地区、寒冷季节。

降低：（1）药物性(水杨酸盐类、肾上腺皮质激素、抗生素)。

ASO测定对于诊断A族链球菌感染很有价值，其存在及含量可反映感染的严重程度。

A组链球菌感染后1周，ASO即开始升高，4～6周可达高峰，并能持续数月，当感染减退时，ASO值下降并在6个月内回到正常值，如果ASO滴度不下降，提示可能存在复发性感染或慢性感染。

多次测定，抗体效价逐渐升高对诊断有重要意义，抗体效价逐渐下降，说明病情缓解。

由于常与A族链球菌接触，正常人也存在低效价的抗体，当效价>200IU/ml时，才被认为有诊断价值。

少于15-20%的健康人血清中的ASO含量高于200IU/ml。