细胞中羟脯氨酸的测定

试验目的：在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。

植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。

因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。

另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。

在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。

一、原理用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：待测植物（水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等）叶片。

（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；5. 大试管；6. 普通试管；7. 移液管；8. 注射器；9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。

（三）试剂1. 酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L 磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中；2. 3％磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml；3. 冰醋酸；4. 甲苯。

三、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。

（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6μg/ml。

（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml 酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。

脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。

2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。

本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。

3. 试剂及仪器3.1脯氨酸3.2 3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（0.3g茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）3.3 2-甲氧基乙醇3.4 蚁酸(96%)，即甲酸3.5 异丙醇（2-丙醇）水溶液：水：丙醇=1：13.6 15ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）3.7 分光光度计，检测吸光度设定在520nm下3.8 1cm 玻璃比色皿4. 样品准备4.1苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20的水进行稀释。

其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L(见稀释表)。

浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。

蜂蜜的稀释，采用2.5g蜂蜜加50ml水。

将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。

4.2原果汁稀释表样品类型稀释比例颜色空白期望值Apple 苹果1:1 yes Apricot 杏21:1 yes Aronia 野樱莓1:1 yes Banana 香蕉1:1 yes Blackberry 黑莓1:1 yes Cherry 樱桃1:1 yes Cranberry 蔓越莓1:1 yes Grape 葡萄16:1 yes Grapefruit 柚子21:1 no Guava 番石榴3:1 yes Kiwi 泥猴桃1:1 yesLemon 柠檬21:1 noLime 酸橙21:1 noMandarin 中国柑桔21:1 noMango 芒果1:1 yesNectarine 油桃21:1 noOrange 柑桔21:1 noPapaya 番木瓜1:1 yesPassion Fruit 西番莲1:1 yesPeach 桃6:1 yesPineapple 菠萝1:1 yesPlum 李子7:1 yesPrune 西梅16:1 yesRaspberry 悬钩子（树梅）5:1 yesStrawberry 草莓1:1 yesTangerine 橘子21:1 noTomato 番茄1:1 yes5. 标准溶液的制备5.1脯氨酸贮备液（500mg/L）：0.0500g脯氨酸加水定容至100ml。

无花果叶水提物对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制王涛;陶如;翟静;高永峰;周成军;刘金成【摘要】目的探讨无花果叶水提物对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长抑制作用.方法用无花果叶水提物处理体外培养的人成纤维细胞后,进行细胞形态学检测,细胞增殖试验(MTT法)、氯胺T法检测无花果叶提取物对成纤维细胞胶原蛋白合成的抑制.结果无花果叶提取物处理后,成纤维细胞增殖活性降低;同时,胶原蛋白的合成受到抑制.结论无花果叶提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有显著地抑制作用,并抑制其合成胶原蛋白.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2010(031)012【总页数】3页(P897-899)【关键词】无花果叶;瘢痕疙瘩;成纤维细胞;增殖【作者】王涛;陶如;翟静;高永峰;周成军;刘金成【作者单位】泰山医学院,山东,泰安,271016;泰山医学院,山东,泰安,271016;泰山医学院,山东,泰安,271016;泰山医学院,山东,泰安,271016;山东大学第二医院,山东,济南,250033;青岛大学医学院,山东,青岛,266021【正文语种】中文【中图分类】R961无花果,桑科榕属多年生落叶小乔木, 属于桑科无花果属植物(Ficus caricaL.)，是目前研究较多的药食兼优的植物。

无花果不仅营养丰富,而且可以防治疾病。

中医认为它具有消肿、解毒、消热、止痛、通乳、润肠、强身健体、延年益寿和防癌抗癌等功效[2-3]。

现代医学研究发现，无花果叶抽提物(主要为补骨脂素、佛手柑内酯) 可破坏线粒体，减少细胞的能量供应,抑制核酸及蛋白质的合成,降低有关酶的活性等作用；具有抗病毒，抗菌，降低血糖、血脂,增强机体免疫功能，抑制多种肿瘤增殖等功能，这为我们研究其对增生性瘢痕组织的作用提供了理论依据[4]。

1 材料和方法1.1 主要试剂 MTT(美国Sigma公司) ; DMEM培养液、胎牛血清、胰蛋白酶(美国HyClone公司)；活性胶原蛋白(四川铭让生物科技有限公司) 。

芝麻素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响曹雨朦;郑书国;赵梦秋;任尤楠;涂鹏程;李方圆;陈雪祎;常雪允【摘要】Objective:To observe the effect of sesamin on the collagen secretion and proliferation of cardiac fibroblasts ( CF) induced by angiotensin Ⅱ(AngⅡ)as well as the potentialmechanisms.Methods:Cardiac fibroblasts were isolated from neonatal rats with trypsin and collagenase digestion and puri-fied by differential attachment technique .MTT assay was applied to assess the effect of sesamin on the proliferation of cardiac fibroblasts after stimulation with Ang II.Hydroxyproline method was used to determine the collagen content,enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for measurement of TGF-β1 level,and colorimetric method for evaluation of the cellular total antioxidant capacity(T-AOC) and malonaldehyde(MDA)level.Results:Sesamin signifi-cantly suppressed AngⅡ induced CF proliferation and collagen secretion as well as TGF-β1 expression(P<0.05or P<0.01),whereas boosted cellular T-AOC and led to decrease of MDA level(P<0.05 or P<0.01).Conclusion:Sesamin is capable of suppressingAngⅡinduced CF proliferation and col-lagen synthesis.The potential mechanisms might involve boosted antioxidant capacity and down-regulation of TGF-β1 expression.%目的：观察芝麻素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CF）增殖及胶原分泌的影响，并探讨其可能机制。

脯氨酸的检测方法Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。

2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。

本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。

3. 试剂及仪器脯氨酸3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）2-甲氧基乙醇蚁酸(96%)，即甲酸异丙醇（2-丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：115ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）分光光度计，检测吸光度设定在520nm下1cm 玻璃比色皿4. 样品准备苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20的水进行稀释。

其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L(见稀释表)。

浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。

蜂蜜的稀释，采用蜂蜜加50ml水。

将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。

原果汁稀释表样品类型稀释比例颜色空白期望值Apple 苹果1:1yes Apricot 杏21:1yes Aronia 野樱莓1:1yes Banana 香蕉1:1yes Blackberry 黑莓1:1yes Cherry 樱桃1:1yes Cranberry 蔓越莓1:1yes Grape 葡萄16:1yes Grapefruit 柚子21:1no Guava 番石榴3:1yesKiwi 泥猴桃1:1yesLemon 柠檬21:1noLime 酸橙21:1noMandarin 中国柑桔21:1noMango 芒果1:1yesNectarine 油桃21:1noOrange 柑桔21:1noPapaya 番木瓜1:1yesPassion Fruit 西番莲1:1yesPeach 桃6:1yesPineapple 菠萝1:1yesPlum 李子7:1yesPrune 西梅16:1yes5:1yesRaspberry 悬钩子（树梅）Strawberry 草莓1:1yesTangerine 橘子21:1noTomato 番茄1:1yes5. 标准溶液的制备脯氨酸贮备液（500mg/L）：脯氨酸加水定容至100ml。

大鼠羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0-40μg/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中羟脯氨酸(Hyp)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠羟脯氨酸(Hyp)水平。

用纯化的大鼠羟脯氨酸(Hyp)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入羟脯氨酸(Hyp)，再与HRP标记的羟脯氨酸(Hyp)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的羟脯氨酸(Hyp)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠羟脯氨酸(Hyp)浓度。

试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

羟基脯氨酸说明书一、产品概述羟基脯氨酸是一种重要的氨基酸补充剂，能够帮助促进身体的蛋白质合成和细胞再生，提高肌肉恢复和生长能力。

本说明书将详细介绍羟基脯氨酸的成分、用途、剂型、剂量和注意事项，以帮助用户正确使用本产品。

二、产品成分羟基脯氨酸主要成分包括羟基脯氨酸粉末、辅料（如胶囊、溶剂等），其中羟基脯氨酸粉末含量符合产品标签上所示。

三、产品用途羟基脯氨酸是一种重要的营养补充品，适用于以下情况：1. 体育锻炼者：可促进肌肉恢复，提高训练效果；2. 肌肉疲劳者：可缓解肌肉酸痛和疲劳感；3. 需要增加蛋白质摄入量的人群：可帮助补充蛋白质，促进身体健康；4. 需要维持肌肉质量的老年人：可减少肌肉流失，提高肌肉功能。

四、产品剂型及规格羟基脯氨酸目前主要有片剂、胶囊和粉剂等剂型。

不同剂型的羟基脯氨酸含量、包装规格和用法用量各有差异，请用户按照产品标签和说明书上的指导服用。

五、产品剂量羟基脯氨酸的剂量应根据个人情况而定，建议在医师或专业营养师的指导下使用。

一般情况下，推荐的剂量为每天1-3次，每次剂量为500-2000毫克。

具体剂量应根据个体身体状况、饮食习惯和运动强度等因素进行调整。

六、产品禁忌1. 对羟基脯氨酸过敏者禁用本产品；2. 未满18周岁的儿童禁用本产品；3. 孕妇、哺乳期妇女和正在怀孕计划的女性慎用；4. 有严重肾脏疾病的患者慎用或遵医嘱使用。

七、产品储存1. 请将羟基脯氨酸产品放置于阴凉干燥处，避免阳光直射；2. 请保持原包装完好，避免受潮；3. 请将产品放置于儿童难以触及的地方。

八、产品注意事项1. 请严格按照产品标签和说明书上的剂量和使用方法使用本产品；2. 请咨询专业医生或营养师的指导以了解个人适宜的剂量和使用频率；3. 本产品不能替代正常饮食，不可过量使用或长期使用；4. 使用过程中如有不适，请及时停用并就医；5. 请勿将本产品与其他保健品或药物混合使用，以免产生不良反应。

九、产品效果及副作用羟基脯氨酸作为氨基酸补充剂，能够帮助促进身体的蛋白质合成，提高肌肉恢复和生长能力，但效果因个人差异而异。

Laennec组织病理学分级与HYP含量、临床分期及肝功能的关系王薇;李继业;潘润华;阿斯楞;廖彩仙【摘要】目的探讨Lannec组织病理学分级与HYP含量、临床分期及肝功能的关系.方法对30例肝炎后肝硬化患者行肝活检术,检测肝组织内羟脯氨酸(HYP)含量,判断肝硬化程度,并进行Lannec组织病理学分级.比较Lannec组织病理学分级与临床分期、HYP含量及肝功能的相关性.结果 Laennec组织病理学分级与临床分级、MELD (model for end-stage liver disease)评分及HYP均具有良好的相关性(r=0.58,P＜0.01;r=0.60,P＜ 0.01;r=0.53,P＜0.01).结论 Laennec组织病理学分级系统可以一定程度地反映肝脏硬化程度、临床阶段以及肝功能情况,有望预测患者并发症的发生率.【期刊名称】《肝胆胰外科杂志》【年(卷),期】2015(027)002【总页数】5页(P89-93)【关键词】肝硬化;病理分级;胶原蛋白;临床分级【作者】王薇;李继业;潘润华;阿斯楞;廖彩仙【作者单位】南方医科大学南方医院肝胆外科,广东广州510515;南方医科大学南方医院肝胆外科,广东广州510515;南方医科大学南方医院肝胆外科,广东广州510515;南方医科大学南方医院肝胆外科,广东广州510515;南方医科大学南方医院肝胆外科,广东广州510515【正文语种】中文【中图分类】R657肝硬化是一种或几种致病因子长期反复作用于肝脏引起的慢性进行性弥漫性肝损害，是肝脏病变的终末阶段。

胶原是细胞外基质（ECM）的主要蛋白质成分，约占机体总蛋白的25%左右，肝脏中胶原含量丰富，对肝细胞的分化、肝小叶结构与功能的维持等有着重要的影响。

肝硬化存在着以胶原为主的ECM增生沉积，其主要病理表现为肝细胞弥漫性坏死、纤维增生，并形成再生结节和假小叶，导致肝脏结构不可逆改变。

其胶原蛋白含量增加为正常肝组织的3～5倍[1]。