沙门氏菌检验及分析

食品微生物检验沙门氏菌检验常用培养基原理解析食品微生物检验是确保食品安全和卫生的重要环节。

其中，沙门氏菌检验是一项常见的微生物检验方法，用于检测食品中是否存在沙门氏菌。

沙门氏菌是一种常见的食源性病原菌，可以引发沙门氏菌感染，导致胃肠道疾病。

沙门氏菌检验常用的培养基有MacConkey培养基和SS培养基。

下面将解析这两种培养基的原理和使用方法。

1. MacConkey培养基：MacConkey培养基是一种选择性和差异性培养基，能够选择性地生长革兰阴性菌，如沙门氏菌，并区分产酸和非产酸菌。

培养基中添加了乳糖、胆盐和中性红等成分。

胆盐能抑制革兰阳性菌的生长，而对革兰阴性菌无明显影响。

乳糖是沙门氏菌的一种常见碳源，能够选择性地促进沙门氏菌的生长。

中性红是一种pH指示剂，能够区分产酸和非产酸菌。

使用方法是将食物样品接种到MacConkey培养基上，然后在37°C孵育24小时。

如果培养基上出现粉红色的细菌菌落，表示存在沙门氏菌。

2. SS培养基：SS培养基是一种选择性和差异性培养基，主要用于寻找沙门氏菌。

它能够选择性地抑制大多数细菌的生长，同时利用亚硫酸盐和铁盐等成分，区分产气和非产气菌。

培养基中添加了亚硫酸盐、柠檬酸、铁盐和胆盐等成分。

亚硫酸盐是一种氧化剂，可以抑制大多数细菌的生长，但对沙门氏菌和其他一些细菌无影响。

柠檬酸是一种酸性物质，能够促进产气菌的生长。

铁盐是一种指示剂，当沙门氏菌使用铁盐作为能源时，会产生黑色沉淀。

胆盐可以抑制革兰阳性菌的生长。

使用方法是将食物样品接种到SS培养基上，然后在37°C孵育24小时。

如果培养基上出现黑色沉淀和/或产气，表示存在沙门氏菌。

以上是食品微生物检验中常用的两种沙门氏菌检验培养基的原理解析。

使用这些培养基可以快速、准确地检测食品中是否有沙门氏菌污染，从而保障食品安全和卫生。

沙门氏菌的检验方法沙门氏菌（Salmonella）是一类革兰氏阴性的杆状细菌，是引起沙门氏菌属感染的病原菌。

这种细菌可以引发食物中毒和伤寒症，其中食物中毒是最常见的感染途径。

因此，对沙门氏菌的快速、准确的检测非常重要。

目前，沙门氏菌的检测方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。

以下是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。

1. 传统培养分离法传统的沙门氏菌检验方法是利用富含寡糖的培养基，如XLD、SS等，以及一些选择性供氧培养基，如亚硫酸和肉汤琼脂培养基等，将样品进行培养。

通过培养，沙门氏菌会形成典型的红色或蓝绿色菌落。

然后，从菌落中挑取纯培养物，并进行生理生化反应和田纳氏试验以确定是否为沙门氏菌。

2. 免疫学方法免疫学方法是通过检测沙门氏菌特异性抗原或抗体来诊断沙门氏菌感染。

常用的方法有：- 血清凝集试验：利用特异性沙门氏菌抗原和患者血清，在特定条件下观察血清与抗原的凝集反应，可确定是否感染沙门氏菌。

- 酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用特异性沙门氏菌抗原或抗体和酶标记的二抗，通过检测光学密度来判断是否存在沙门氏菌。

3. 分子生物学方法分子生物学方法可以通过检测沙门氏菌的基因或DNA来快速、准确地诊断沙门氏菌感染。

常用的方法有：- PCR（聚合酶链式反应）：通过特异性引物扩增沙门氏菌的DNA片段，然后进行凝胶电泳分析。

PCR可以提供快速、高效的沙门氏菌检测结果。

- 实时荧光PCR：使用带有荧光探针的PCR引物，通过检测荧光信号的强度来定量沙门氏菌的存在量。

- 基因芯片技术：基因芯片上固定了沙门氏菌特异性的探针，可以同时检测多个基因或DNA序列，提高检测效率。

除了上述方法，还可以利用质谱仪等仪器进行快速鉴定，甚至利用抗生素敏感试验、细菌溶解酶试验等进行进一步的鉴定和鉴别。

总结起来，沙门氏菌的检验方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。

这些方法可以单独或联合使用，以提供准确、快速的沙门氏菌检测结果，对于预防和控制沙门氏菌感染具有重要意义。

食品沙门氏菌检测沙门氏菌为肠道细菌科，即引发食物中毒细菌。

根据既有研究结果表明，因沙门氏菌导致的食物中毒病例占比较高，所以对食品中沙门氏菌检测的重要性逐渐突显出来，并且备受关注。

而对食品沙门氏菌的检测需从多个角度展开分析，以解决食品安全问题。

1 沙门氏菌有哪些生物学特性？沙门氏菌会对人和动物的健康带来严重危害，是十分常见的致病菌。

此病菌的型别诸多且抗原复杂，其对于外界环境的抵抗性较为明显，而且能够在食品中存活较长时间，在粪便内的存活时间达到1-10个月之久。

沙门氏菌的传播路径一般包括肉产品、禽和蛋等，在身体状况的基础上，还和菌株血清型存在一定关联，会严重危害老人与孩童，或者是免疫有缺陷的人。

所以说，有必要对容易被污染的食品进行分类型地管理，以免沙门氏菌对我们的身体健康造成负面影响。

2 检测沙门氏菌的国标方法如何？现阶段，根据国家规定对沙门氏菌进行检测的方法被称作是国标方法。

而这种检测方法的步骤较为繁杂，需经过增菌→增菌→分离→生化试验→血清学检定等多个环节完成。

正是因为国标检测沙门氏菌的程序复杂，所以需要耗费较多的时间与精力，一般在4-7天之间才能够获得所要的检测结果。

3 采用分子生物学方法检测沙门氏菌第一种，扩增片段长度多态性技术的应用。

这种对沙门氏菌进行检测的技术相对便利且快速，可以获得稳定且可靠性较高的结果，因而在检测微生物方面的应用较为常见。

在众多研究中，针对沙门氏菌株展开了扩增片段长度多态性指纹分析，并了解到血清型的差异所获得的扩增片段长度多态性指纹图也有所差异，具有较高的分辨率，进而对不同的菌株进行有效地区分。

第二种，聚合酶连反应技术的应用。

聚合酶连反应技术本身敏感性与特异性较为突出，且应用十分便捷，同样被使用在检测微生物方面。

大部分研究者通过对聚合酶连反应技术的合理运用，开展了沙门氏菌的检测工作。

在对聚合酶连反应技术进行应用的过程中，对食品中的沙门氏菌进行检测，在和增强化学发光反应相互结合的基础上，即可实现交杂扩增产物的目的，最终实现了检测方法的成功研发。

实验六食品中沙门氏菌的检验一、概述：1.沙门氏菌的形态特征：革兰氏阴性，两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，周身鞭毛，运动力强，具菌毛。

2.沙门氏菌需氧或兼性，10-42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH 为6.8-7.8。

3.沙门氏菌食物中毒的食品主要为动物性食品，特别是畜肉类及其制品，污染肉类食物的几率很高。

冷冻对沙门氏菌无杀灭作用，即使在-25℃低温仍可存活10个月左右。

意义：沙门氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。

在世界各国各类细菌性的食物中毒中，沙门氏菌常居前列。

因此，沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。

二、操作步骤：1．前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。

2．选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。

此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。

3．选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。

4．生化鉴定——排除大多数非沙门氏菌，提供了沙门氏菌培养物菌属的生理生化鉴定结果。

5．血清学技术——对沙门氏菌属培养物进行血清学分型鉴定，确定菌型。

主要沙门氏菌有2000多个血清型，可先用多价血清鉴定，再用单因子血清鉴定，先有常见菌型的血清鉴定，再用不常见菌型的血清鉴定。

三、实验过程：1.前增菌将样品鸡蛋壳用灭菌棉签查拭蛋壳后，将棉签上部剪掉，下部放入前增菌培养基BPW中，5个棉签放入150mL前增液中，将制备好的预增菌液于37℃培养8-18h。

（样品液变浑浊即可）2.选择性增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取4mL前增菌液转种于40mL TTB选择性增菌液内，于42 ℃±1 ℃培养18h-24h。

如果菌株生长过慢（TTB 培养基需现配现用，每组制备40ml增菌液，需加入816uL的碘液后再加入前增液）。

沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点．检验沙门氏菌的原因和意义：据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～(106个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染，进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。

因此对沙门氏菌的检验事关重大。

二、检测及鉴定：沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。

沙门氏菌典型菌落形态：生化鉴定显示：API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。

限值要求：参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定，《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定，具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。

三、沙门氏菌传统检测方法的关键控制点1、样品处理尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。

2、培养基及培养方面（1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。

（2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。

（3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS培养基认为是最适合的。

（4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。

沙门氏菌的实验报告
《沙门氏菌实验报告：探索病原菌的生长和传播》
在本次实验中，我们对沙门氏菌进行了深入的研究，以探索这种病原菌的生长
和传播特性。

沙门氏菌是一种常见的致病菌，可以引起食物中毒和肠道感染，
因此对其进行研究具有重要意义。

首先，我们在实验室中培养了沙门氏菌，并观察了其在不同条件下的生长情况。

我们发现，沙门氏菌在温暖潮湿的环境中生长迅速，尤其是在含有丰富营养物
质的培养基中。

这表明沙门氏菌在食品加工和储存过程中可能会迅速繁殖，从
而引发食物中毒事件。

其次，我们对沙门氏菌的传播途径进行了研究。

我们模拟了食品加工和储存过
程中可能的污染情况，发现沙门氏菌可以通过接触、飞沫和空气传播等多种途
径传播。

这说明在食品生产和餐饮过程中，如果不严格控制沙门氏菌的传播，
就可能引发食物中毒事件。

最后，我们还对沙门氏菌的耐热和耐酸能力进行了测试。

我们发现，沙门氏菌
对高温和酸性环境具有一定的耐受能力，这意味着在食品加工和烹饪过程中，
需要采取更严格的措施来杀灭沙门氏菌，以确保食品安全。

通过这次实验，我们深入了解了沙门氏菌的生长和传播特性，为预防食物中毒
事件提供了重要的科学依据。

我们希望通过我们的研究成果，能够为食品安全
和公共卫生提供更多有益的信息和建议。

五、结果分析条件设定：使用Roche 荧光PCR检测仪1、选择F1或F1/F2通道（建议选择F1/F2通道），点击Quantification 进入定量分析窗口。

2、在Quantification 窗口中，设定Analysis 方式为Fit points , Adjustment 方式为proportional；选定Noise band 项，阈值（Noise band cursor）设定以刚超过正常阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点，且Ct 值不出现任何数值为准，也可根据仪器的实际情况进行调整。

使用ABI系列荧光PCR 检测仪进行结果分析时基线（baseline）的确定：取3—10 或3—15 个循环的荧光信号。

阈值(threshold)设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点，且不出现Ct值为准。

使用博日Line-Gene荧光PCR检测仪时，在运行扩增程序前，先把增益值调至30左右。

运行结束后点击数据分析进入结果分析界面，选择样点拟合法进行结果分析：零点调整取1－10 或1－15 个循环的荧光信号；在噪声容限界面下调整基线位置，其设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点为准，选择定量分析，对样本进行结果分析。

使用MJ Opticon 系列荧光PCR检测仪进行结果分析时，先扣除本底信号后再输入1－10或1－15之间的荧光密度值来手动设置ct值或拖动Ct线到合适的位置来确定ct值。

质控标准本试剂盒的灵敏度为：500 copies /ml。

定量检测线性范围为：10-1010 copies/ml。

阴性对照应该没有Ct值显示或显示Ct值为40；阳性对照的Ct值应小于等于30.0，否则实验视为无效。

六、结果判断：1. 检测样本Ct值小于等于35.0时，测定结果有效，可直接报告样本阳性；2. 检测样本Ct值大于35.0且小于40时，重复一次，如果Ct值仍小于40，且曲线有明显的对数增长期，可报告样本阳性，否则报告样本阴性。

沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种革兰氏阴性杆菌,广泛存在于食品、环境中,尤其是在沙门氏菌感染的食品中。

沙门氏菌检验是食品安全检测中的重要一环,其准确性和可靠性对保障公众健康至关重要。

下面将介绍沙门氏菌检验国标的检验步骤及接种方式。

一、检验步骤
1.原料准备:准备待检样品,包括食品、环境样品等。

2.样品采集:采集样品时应使用一次性餐具或清洁用具,确保样品的完整性和真实性。

3.样品处理:对采集的样品进行初步处理,包括去除杂质、研磨成粉末等。

4.检验样品:将处理后的样品放入含有适当浓度的试剂管中,进行沙门氏菌检验。

5.结果判断:根据检验结果判断样品是否存在沙门氏菌感染。

二、接种方式
1.沙门氏菌疫苗接种:在食品安全检测中,一般使用沙门氏菌疫苗进行接种。

疫苗接种后,人体免疫系统会产生针对沙门氏菌的抗体和免疫记忆,从而有效地预防沙门氏菌感染。

2.样品接种:对于食品样品,可以使用沙门氏菌疫苗进行接种。

在样品处理过程中,可以通过加入疫苗,使样品受到沙门氏菌的感染,进而进行检测以判断样品是否存在感染。

三、注意事项
1.接种疫苗前,应进行体检,确保没有患有其他疾病或感染。

2.接种疫苗后,应严格按照操作规程进行样品处理和检测,以确保检验结果的准确性和可靠性。

3.疫苗接种后可能会出现短暂的发热、乏力等症状,正常现象,不应影响检测结果。

沙门氏菌检验国标的检验步骤及接种方式非常重要,可以确保食品安全检测的准确性和可靠性。

在食品安全检测中,应严格遵守操作规程,确保疫苗接种的安全和有效性,以保证公众健康安全。

食品论坛
GB4789.4沙门氏菌的生化检测流
沙门氏菌是一群寄生于人与动物肠道内的革兰氏阴性杆菌，也是常见的食源性肠道致病菌。

沙门氏菌污染蛋类、畜禽类、生鲜奶等多数动物食源性食品，也广泛存在于自然环境中，是微生物引起食源性疾病最多的一种致病菌。

以下将是在实验中积累的图片，仅供参考。

一、二增菌形态
下图是ATCC14028鼠伤寒沙门在实验过程中二增菌形态
备注：
BPW缓冲蛋白胨水作为前增菌，不含抑制成分，利于沙门的复苏、受损伤细胞复壮。

TTB四硫磺酸钠煌绿增菌液为选择性增菌，可抑制肠道共生菌。

其添加剂碘液和煌绿可抑制大肠菌群和其他革兰氏阳性细菌。

SC亚硒酸盐胱氨酸增菌液也为选择性增菌，其中的亚硒酸与蛋白胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸和硫的复合物，影响细菌硫代谢，抑制大肠埃希氏、变形杆菌等
二、菌落形态
下图是ATCC14028鼠伤寒沙门在实验过程中的菌落形态
三、生化试验
1.三糖铁琼脂，先划线再穿刺，36℃培养24h,见下图：
2.氧化酶试验：阳性
3．H
2O
2
触酶试验：阳性
4.镜检：革兰氏阴性杆菌
5.API20E 生化鉴定系统
取XLD平板或者沙门显色平板的可疑单独菌落纯化在NA平板上，36℃培养24h,挑取纯化的单独菌落做API20E试验，具体操作按照试剂盒说明书。

备注：
一定要纯化后做API20E ，否则查询系统会出现无意义的生化谱。

沙门显色平板具有选择性，倘若时间紧张，也可从沙门显色平板挑取单菌落做做API20E，效果还可以。