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温和气单孢菌YH311硫酸软骨素裂解酶的分离纯化与固定化

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毕赤酵母表达知识归纳

毕赤酵母表达知识归纳

毕赤酵母表达知识归纳1a.配制500×BIOTIN stock solution（0.02％）有这么3种方案：1、懒人是将Biotin直接溶在去离子水中，放过夜，基本就能溶；2、急性子是将溶液配成0.02N的NaOH，就很容易溶解了；3、水浴加热，温度不能高于50度。

D－生物素是具有生物活性的生物素，也就是vitaminH。

在毕赤酵母代谢过程中，作为多种酶的辅基起作用。

天然培养基中一般可以不单独添加，因为YNB中、酵母粉、蛋白胨中均含有一定量的生物素，但是做高密度发酵还是必须要添加的。

b.有几个比较迷惑的问题请教大家：(很典型的小问题）1、制感受态细胞，OD多少比较好？pyrimidine 战友的方法：取1mlGS115过夜培养物(OD约6-10) 分装到1.5ml EP管中。

说明书还有一些文献是说在1.3左右效率高，再高了效率会很低2、关于高效转化法，文献说用(LiAc)，而invitrogen的说明书说转化毕赤酵母用(LiAc)没用，要用LiCl。

Lithium acetate does not work with Pichia pastoris. Use only lithium chloride.3、YNB到底能高温灭么？有的说能有的说不能。

过滤灭菌的怎么操作？我是把滤器装好膜绑到瓶口用纱布盖上，报纸包上，瓶盖放烧杯里单灭。

然后把配好的溶液用注射器一点点推进去。

4、葡萄糖为什么在YPD里一起灭颜色很深，单灭则不会。

该115度还是121度灭？网上搜了下，都有人用！5、电转化参数用400欧还是200欧？有的用400，有的还专门说不是用400。

都是从园里看到的！电击参数：1.5KV，25uF，200欧姆（不是400）6、电转后，在MD平板上长的应该就是整合了目的基因的重组子了吧？如果不想筛高拷贝的，是否PCR验证一下即可？网友的回答：ynb最好不灭菌，我是0.22um过滤处理的。

invitrogen手册上可以灭菌的。

生命体中的超氧化物歧化酶_综述_

生命体中的超氧化物歧化酶_综述_
4
心超滤浓缩 H 冷冻干燥得淡蓝色成品。 从 一 些 植 物 和 微 生 物 中 提 取 )*% 可 使 用 >?;@;A?8 法，它的特点是采用经典的硫酸铵分级沉 淀 提 取 粗 酶 ， 它 可 避 免 ’77/89 4 :8;9/<;7= 法 使 ’I 4 )*% 失活的缺点。亲和层析法和高压液相色 谱法 （ $P25）均具有提纯步骤少，专一性好，自 动化和纯化率高等特点，但所需试剂和仪器较复 杂昂贵，目前多在科研中使用。利用生物技术生 产 )*% 在 国 外 引 起 重 视 ， 是 一 个 很 有 前 途 的 方 向。日本选用耐草快 （ G+ G 4 二甲基 4 CQC 4 双吡啶 姆，简称 PR）除草剂的烟草愈伤组织为材料生产 )*%，在叶绿素中光系统 S 产生的电子使 PR 还原 成 PR 游离基，后者与 *, 直接反应产生 *, 4 ，故可 制备 PR 的愈伤组织并诱导产生 )*%。来自 PR 愈 伤组织的 )*% 为单一电泳区带，分子量为 , T G+ 万，与一般烟叶相比，活性高很多。 C+ )*% 的活力测定 据报道 H )*% 活性在糖尿病 H 慢性肾功能不全 与正常者间有显著差异 H 吸烟者红细胞 )*% 和精浆 )*% 含量均较非吸烟者低 H 而这与不育可能有关 U 在 )*% 的分离纯化过程中 H 活力监测也至关重要 H 可见适宜的 )*% 活力测定方法的研究具有重要的 现实意义。 脉冲辐射分析法，快速冷冻法结合的 L)V 分 析法，截流光谱分析法，极谱氧电极法和极谱法 可直接获得 )*% 与 *, 4 反应的动力学信息，测定 反应过程中 *, 4 浓度的变化，因而称之为直接法。 因受试剂和仪器的限制，此类方法一般难于在实 验室推广。 )*% 活性测定的另一大类方法是间接法。由 于 )*% 的作用底物是 *, 4 ，它的存在寿命很短， 而上述直接法又不能得到普遍推广，因此一般常 用间接的活力测定方法。其原理是：有一产生 *, 4 的系统，使 *, 4 再产生一个便于检测的反应，通过 监测 )*% 对这个反应的抑制程度间接测定 )*% 活 力。此类方法有经典的邻苯三酚自氧化法，改良 的邻苯三酚自氧化法，四氮唑蓝法，肾上腺素自 氧 化 法 H 联 二 茴 香 胺 法 以 及 黄 嘌 呤 氧 化 酶 4 W(& 法，碱性二甲基亚砜 4 鲁米诺法，化学发光免疫 法 （ 52S6）等。 )*% 活性测定方法已较成熟，近年来国内外 仍有一些报道和专利。杜鸣等 B ! D 合成了 C 种硫代碳 酰胺化合物，这些化合物具有试剂稳定，与 *, 4 反

第三章 细胞破碎

第三章 细胞破碎

3.5.2 与上游相结合
（3）克隆噬菌体溶解基因 ：在细胞内引进噬菌体基 因，培养结束后，控制一定条件（如温度等）， 激活噬菌体基因，使细胞自内向外溶解，释放出 内含物。 （4）耐高温产品的基因表达 ：如果产品能表达成 耐高温型，杂蛋白仍然保持原特性，那么就可在 较高温度下将产品与杂质分开，这样既节省了冷 却费用，又简化了分离步骤。
酶溶法的特点（外加酶）：
（1）酶溶法需要特定的反应条件。 （2）酶具有高度专一性，必须根据细胞壁的结构和 化学组成选择适当的酶或溶酶系统，并确定相应 的次序。 （3）酶溶法的优点是：具有选择性释放产物，条件 温和，核酸泄出量少，细胞外形完整。 （4）酶溶法的不足：一是溶酶价格高；二是酶溶法 通用性差，且不易确定最佳的溶解条件；三是存 在产物抑制，在溶酶系统中，甘露糖对蛋白酶有 抑制作用。
3.3.1 珠磨法

细胞破碎率可用一级反应动力学表示 ： 间歇操作： ln[1/(1-R)]=Kt 连续操作： ln[1/(1-R)]=Kτ 其中 τ =V/F
式中： R—破碎率（g/g） K—反应速率常数(1/s) t—破碎时间(s) τ —平均停留时间(s) V—破碎室悬浮液体积（L） F—进料速率(L/s)
《生物分离工程》 Bioseparation Engineering 第三章 细胞破碎
生物分离过程的一般流程
原料液 原料液 细胞分离 ( 细胞分离 ( 离心，过滤 离心，过滤 )) 细胞－胞内产物 细胞－胞内产物 路线一B 包含体 溶解(加盐酸胍、脲 加盐酸胍、脲 ) 复性 细胞破碎 碎片分离 碎片分离 粗分离( 盐析、萃取、超过滤等 盐析、萃取、超过滤等 ) 纯化( 层析、电泳 层析、电泳 ) 脱盐( 凝胶过滤、超过滤 凝胶过滤、超过滤 ) 浓缩( 超过滤 超过滤) 精制( 结晶、干燥 结晶、干燥 ) 路线一 路线二 清液－胞外产物

地衣芽胞杆菌产纤溶酶的分离、纯化及其酶学性质研究

地衣芽胞杆菌产纤溶酶的分离、纯化及其酶学性质研究

关键 词 ： 纤溶 酶 ； 分离纯 化 ； 酶学性质
中图分 类号 ： Ｑ ９ ３ ９ ． Βιβλιοθήκη ９ 文 献标 识码 ： Ａ
文章编 号 ： １ ０ ０ １ － ５ ３ ３ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ － ０ ０ ８ ５ － ０ ４
血栓 性疾 病 包括 血栓 形成 和血 栓栓 塞 两种 病理
地衣芽胞杆菌产 纤溶酶 的分离 、 纯化 及其酶学性质研究
苏雪 燕， 车程川 ， 刘金峰 ， 杨 革
（ 曲阜师范大学生命科学学院 ， ２ ７ ３ １ ６ ５ ， 山东省 曲阜市 ）
摘要 ： 以地衣芽胞杆菌（ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｌ ｉ ｃ ｈ ｅ ｎ ＠ｒ ｍ ｉ ， ｓ ） Ｗ Ｂ Ｌ 一 ３进行固体发酵生产纤溶酶． 通过生理盐水浸提、 离
Ｎ Ｋ具有 可 口服 、 安全无 毒 、 无抗 原性 、 半 衰 期 长 且 不 易 引发 出血等 优点 ， 因而 开发前 景广 阔 ， 可能 成 为 新 一代 的抗 栓溶 栓 药物 ．
济南力戈生物有限公司， 其他试剂均为国产分析纯．
发 酵培 养基 ： 花生 ２ ０ ｇ ， 蔗糖 ０ ． ４ ｇ ， Ｎ ａ Ｃ １ ０ ． ２ ｇ ， 初始 含水 量 ３ ５ ％， １ ２ １ ｏ Ｃ 蒸煮 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ．
第３ ９卷
第 ３期
２ ０ １ ３年 ７月
曲 阜 师 范 大 学 Ｊ ｏ ｕ ｎａ ｒ ｌ ｏ ｆ Ｑ ｕ ｆ ｕ Ｎ ｏ ｒ ｍ ａ ｌ
Ｖ０ ｌ Ｉ ３ ９ Ｎｏ ． ３
Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０ １ ３
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ １ － ５ ３ ３ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ３ ． ０ ０ ４

DNA提取过程中所用试剂的机理

DNA提取过程中所用试剂的机理

DNA提取过程中所用试剂的机理1.溶菌酶的作用机制是溶菌酶是一种碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸、酰胺残基和芳香族氨，酸的比例较高，酶的活动中心是天冬氨酸和谷氨酸。

溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，称包胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，它专一地作用于肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4键，从而破坏细菌的细胞壁，使之松驰而失去对细胞的保护作用，最终使细菌溶解死亡。

也可以直接破坏革兰氏阳性菌的细胞壁，而达到杀菌的作用，这主要是因为革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由胞壁质和磷酸质组成，其中胞壁质是由杂多糖和多肽组成的糖蛋白，这种多糖正是由N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4键联结的。

对某些革兰氏阴性菌，如埃希氏大肠杆菌，伤寒沙门氏菌，也会受到溶菌酶的破坏。

溶菌酶是母乳中能保护婴儿免遭病毒感染的一种有效成分，它能通过消化道而保持其活性状态，溶菌酶还可以使婴儿肠道中大肠杆菌减少，促进双歧杆菌的增加，还可以促进蛋白质的消化吸收。

简言之,破坏细菌细胞壁，由于细菌在没有细胞壁时不能生存，从而杀死细菌。

2. 十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate，SDS）常用于DNA提取过程中使蛋白质变性后与DNA分开。

SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用：a. 溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂；b. 溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来；c. 对RNase、Dnase有一定的抑制作用；d. SDS能够与蛋白质结合形成R1-O-SO3-…R2+-蛋白质复合物，使蛋白质变性沉淀。

质粒提取常见问题1．溶液I—溶菌液：a.溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。

当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。

b.葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

C. EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。

生物化学真题及解答 考题分析

生物化学真题及解答 考题分析
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c)指出哪一步对酶的纯化最无效。 d)表中结果能否说明该酶已被纯化?若估计酶的纯化程度还需要做些什么? e)若该单纯酶由 682 个氨基酸残基组成，该酶的分子量约为多少?(1997，北医) 考点：酶活力测定及酶的分离纯化。 解析：a)酶含量须用酶活力来表示，即在 1 分钟内转化 1 微摩尔的底物所需的酶量为一个 单位，而每毫克酶蛋白所具有的酶活力，称比活力，用单位 /毫克蛋白表示。 故每一步纯化程序后酶的比活性为 1.4000000〖〗20000＝200(U/mg) 2.3000000〖〗5000＝600(U/mg) 3.1000000〖〗4000＝250(U/mg) 4.800000〖〗200＝4000(U/mg) 5.750000〖〗50＝15000(U/mg) 6.675000〖〗45＝15000(U/mg) b)对同一种酶来说，比活力愈高，表明酶愈纯，从第 4 步到第 5 步酶的比活力明显提高， 故亲和层析一步对酶的纯化最有效。 c)从第 5 步到第 6 步，酶的比活力无变化，所以第 6 步对酶的纯化最无效。 d)因为第 5 步和第 6 步的比活力一样，也就是说经过排阻层析后酶的纯度无变化，所以该 酶基本上已被纯化。 e) 一 般每个氨基酸残基含一 个氮原子，原子量为 14，而 每种蛋白质分子的含氮量都约 为 16%故，设蛋白质分子量为 x，则 14×682〖〗x＝16%，x=59675。 八、已知某多肽组成是 Ala5、Lys1，Phe1 与 2，4-二硝基氟苯(DNFB)反应后再酸解产 生一个游离的 DNFB-Ala，胰蛋白酶解得一个三肽：Lys1,Ala2 和一个四肽 Ala3、Phe1， 整个多肽经 糜蛋白 酶解产生一个六肽和 一个游离氨基酸，写出这个多肽的一级结构(1992 北医) 考点：氨基酸序列分析 解析：1.多肽与 DNFB 反应再酸解产生一个游离的 DNFB-Ala，说明此肽的 N 末端氨基酸 残基是 Ala。 2.胰蛋白酸水解 Lys、Arg 羧基侧的肽键，题中多肽无 Arg。且被此酸水解成一个三肽和一 个四肽，说明第 3 位氨基酸残基是 Lys。 3.糜蛋白酶水解 Phe、Tyr、Trp 羧基侧的肽键，此多肽中只存在 Phe，且被此酶水解成一 个六肽和一个游离氨基酸，说明其第 6 位氨基酸残基是 Phe。 4.此多肽一共有 7 个氨基酸残基组成 5 个 Ala，1 个 Lys，1 个 Phe，所以剩余的 2、4、5、 7 位全是 Ala。故此多肽一级结构为(从 N 端到 C 端)：Ala-Ala-Lys-Ala-Ala-Phe-Ala 九、磷酸酶、磷酸化酶、激酶、蛋白激酶有何区别?各举一例(1994 北医) 考点：对酶定义的理解 解析： 磷酸酶是将酶或蛋白质上磷酸基水解下来的酶， 如磷蛋白磷酸酶可将磷酸化的糖原合 酶上的磷酸基水解掉使其恢复活性。 磷酸化酶是将某一物质水解并将其磷酸化的酶， 如糖原磷酸化酶是在糖原分解过程中从糖链 上水解掉葡萄糖生成 1-磷酸葡萄糖的酶。 激酶包括多种，能将 ATP 磷酸基转移给接受体的反应都由激酶催化，如己糖激酶即可催化 葡萄糖生成 6-磷酸葡萄糖。 蛋白激酶也是激酶的一种，它多是在酶活性调节中发挥作用，将酶的丝氨酸、苏氨酸等残基 磷酸化，发挥共价修饰作用，使其活性升高或降低，如蛋白激酶 A 可将糖原合成酶磷酸化 使其失去活性。 十、从以下几方面对蛋白质及 DNA 进行比较(1999 北医)

解淀粉芽孢杆菌黄曲霉毒素B_1裂解酶的分离纯化及鉴定_蔡国林


214122 ） 1 （ 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 ， 江苏 无锡， 2 （ 江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 ， 214122 ） 江苏 无锡， 3 （ 江南大学 生物工程学院 ， 214122 ） 4 （ 山东鲁花集团有限公司 ， 265200 ） 江苏 无锡， 山东 莱阳， 摘 要 9021 能够高效降解黄曲霉毒素 B1 （ Aflatoxin B1 ， AFB1 ） ， 解淀粉芽孢杆菌 CGMCC确定其降解 AFB1 的
2015 年第 41 卷第 12 期（ 总第 336 期）
27
食品与发酵工业
FOOD AND FEＲMENTATION INDUSTＲIES 蛋白溶液通过 0. 22 μm 微孔滤膜后， 采用 Superdux 75 10 /300GL （ 柱体积为 25 mL， 上样量为 0. 5 mL ） ， pH 7. 0 ） 进行冲洗， 用磷酸盐缓冲液 （ 20 mmol / L， 设 定流速为 0. 5 mL / min， 每管收集 1 mL， 以洗脱体积为 横坐标， 以 280 nm 吸收值为纵坐标绘图， 得到对应的 OD280 图谱如图 3 所示。 通过凝胶过滤色谱的进一 步分离纯化将原有的 L2 色谱峰分离为 4 个色谱峰， 且获得了较好的分离效果。收集凝胶过滤色谱峰 1 、 2、 3、 4 对应的蛋白质溶液， N2 、 N3 、 分别命名为 N1 、 N4 。分别加入 4 μg / mL 的 AFB1 ， 使其最终含量为 100 ng， 37 ℃ ， 200 r / min 振 荡 反 应 72 h， 测定其对 AFB1 的降解效果， 其中 N3 具有明显降解 AFB1 的活 性， 其降解率为 32. 4% 。收集第 3 个色谱峰， 并对其 蛋白浓度、 体积进行测定， 储存于 4 ℃ 以备用。

基因原理

1 名词（基因） 一、绪论 1、基因：是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列，它是遗传物质的最小功能单位。 2、基因工程：将不同的生命元件按照类似于工程学的方法组装在一起，生产出人们所期待的生命物质。 对不同生物的遗传物质-基因，在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体（质粒、噬菌体或病毒等）转入微生物、植物或动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需要的基因在细胞中表达，产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。 3、细胞工程：包括细胞融合、细胞大规模培养以及植物组织培养快速繁殖技术。 细胞融合技术是指将两种不同种类的细胞，通过化学、生物学或物理学手段使之融合在一起，从而产生出兼备两个亲本遗传特性的新细胞。 细胞大规模培养技术是以工业化生产为目的，包托气候、产地、季节的限制，从大量培养的细胞中获得药物或其他有用物质。 植物组织培养快速繁殖技术是利用植物细胞的全能性由扩增的细胞分化再生成植株，这样就有可能用细胞器官和组织的再生苗来代替种子实生苗，无限地扩大繁殖系数。 4、酶工程：在一定的生物反应器中，利用酶的催化作用将相应的原料转化成有用物质的技术。包括酶的生产应用、酶和细胞的固定化以及酶的分子修饰技术。 酶是生物体内产生的具有催化作用的蛋白质。 5、微生物发酵工程：是利用微生物的特定性状，通过现代化工程技术，生产有用物质或直接应用于工业生产的一种技术体系。包括菌种选育、菌体生产利用、代谢产物的生产利用以及微生物机能的利用技术。 6、生化工程：包括生物反应器设计制造、传感器的研制记忆产物的分离提取和精制技术。 7、光合作用：是指绿色植物将大气中的CO2转化为碳水化合物，并向周围环境释放氧气的过程。 固氮作用：是指豆科植物（如蚕豆、豌豆和三叶草等）将空气中的氮（N2）转变为氨（NH3）的过程。 转基因植物：是指将克隆到的一些编码特殊性状的基因，通过生物、物理和化学等方法，导入到受体植物细胞，然后进行组织培养而培育出再生植物。 转基因动物：是指实验方法导入的外源基因在染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 7、内含子、外显子：一个基因往往由几个互不相邻的段落组成；它的内部还包含一段或几段最终不相应出现在成熟mRNA中的片段，称为内含子；而相应出现在成熟mRNA中的片段，称为外显子。 二、生物大分子 8、DNA的一级结构：由数量庞大的4种脱氧核苷酸通过3’，5‘一磷酸二脂键连接起来的直线或环形多聚体，按规定，多核苷酸链以连接5’—羟基的磷酸开始，以脱氧核糖的3‘—羟基终止。 9、核酸的变性：当温度升高时，核酸有规律的螺旋型双链结构变成单链无规律的“线团”。从天然状态转变到分子变性状态分子，这一过程称为变性。 10、呼吸：双链DNA部分的链区被打开的现象。 11、复性或退火：DNA变性后，双螺旋两条链分开，如果溶液迅速冷却，两条单链继续保持分开，但如果缓慢冷却，则两条链可能发生特异的重新组合而恢复成双螺旋，这一变性DNA恢复其原有结构和性质。 12、杂交：不同来源的DNA形成复性DNA分子时，此复性过程称为杂交。 13、β折叠：两条或多条几乎完全伸展的多肽链侧向聚集在一起，相邻肽链主链上的-NH和C=O之间形成有规则的氢键，这样的堕胎构象就是β折叠片。 β折叠有平行和反平行两种，其中以反平行较稳定。 14、β转角：是一种位于多肽链折叠处的结构。β转角含4个氨基酸残基，它为第一个氨基酸残基的C=O 与第一个残基的NH之间的氢键所稳定。β转角有I型和II型两种,它们的主要区别在于第二肽链的空间取向。 15、蛋白质的一级结构：多肽链的氨基酸顺序。 16、蛋白质的二级结构：多肽链中有规则的重复的构象。 17、超二级结构：二级结构的组合形式。最常见的超二级结构有αα、βαβ和βββ三种图式。 18、三级结构：形成二级结构后，多肽链还可进一步折叠成三维球状结构，它们具有独立的结构和功能。 19、四级结构：在寡聚蛋白质蛋白中，亚基的空间关系和缔和。 20、单体蛋白：有些蛋白中，有些蛋白仅含一条多肽链。 21、寡聚蛋白：有许多蛋白质含两个或两个以上的亚基。如血红蛋白有4个亚基组成，天冬氨酸转氨甲酰酶由12个亚基组成等。 22、蛋白质的变性：天然蛋白质因受物理因素或化学因素影响，其分子内部原有的高度规律结构会发生变 2

溶菌酶1

溶菌酶研究现状2010级基地班马冬珂10104109关键词：溶菌酶基本性质活性检测酶学性质提取，分离，纯化纯度检测一：溶菌酶的基本性质：１９０７年，Ｎｉｃｏｌｌｅ最早发表了枯草杆菌溶菌因子的报告，两年后，Ｌａｓｃｈｔｓｃｈｅｎｋｏ指出，鸡蛋也有较强溶菌活性，并把它命名为溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ，ＥＣ３．２．１．１７）。

紧接着Ｆｌｅｍｉｎｇ和Ｍｅｙｅｒ等证实植物中也含有溶菌酶，以后人们对溶菌酶的特性有了更深入的认识。

【1】作用机制：溶菌酶是一种广泛存在于各种动植物有机物中的糖苷水解酶，作用于Ｎ一乙酰氨基葡萄糖和Ｎ一乙酰胞壁之间的β—１，４糖苷键，能使某些细菌细胞壁中的粘多糖成分分解，破坏肽聚糖支架，在内部渗透压的作用下，细胞胀裂，细菌裂解，而人和动物细胞无细胞壁结构，也无肽聚糖，故溶菌酶对人体细胞无毒性作用，但具有溶解细胞壁的能力。

【2】溶菌酶分子量的测定：溶菌酶原料相对分子质量测定采用ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳法测定，分离胶浓度为１２％，采用考马斯亮蓝染色。

溶菌酶是由１２９个氨基酸残基组成的碱性球蛋白，等电点在ｐＨ值１０．８左右，分子量为１４０００，化学性质非常稳定。

当ｐＨ值在１．２—１１．３的范围剧烈变化时，其结构几乎不变。

在酸性环境下，溶菌酶对热的稳定性很强；ｐＨ值低于４时，溶菌酶可以长期在室温下存放。

其纯品为白色或微黄、黄色的结晶体或无定型粉末，无异味，，微甜，易溶于水，遇碱易被破坏，不溶于乙醚. 280nm的消光系数为13.0。

酶活性可被该酶活性可被一些金属离子Cu2+，Fe2+，Zn2+（10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2+,Ca2+（10-5～10-3M）、NaCl所激活。

应用：在国外，溶菌酶普遍的应用在食品的杀菌，保险，防腐以及微生物发酵和生物工程技术中菌体内容物的提取，如核酸，蛋白质，抗生素，酶等的提取，在医药和临床上，溶菌酶制成的各种药物具有抗菌抗病毒，消炎消肿，增强抗生素疗效等作用，检测血清尿中的酶的活性，临床上可用于诊断白血病。

生物分离工程复习题

6. 膜污染由哪些途径造成？如何有效防止和清除？ 凝胶极化现象引起的凝胶层；膜孔堵塞；溶质在膜表面的吸附；膜孔内的溶质吸附。 ①料液的预处理：预过滤、絮凝、调节 pH 值（除胶体悬浮铁锈、易污染的 Pr、与膜 互作的盐） ②改善膜的性质：表面极性、电荷、流体力学条件（提高流速、合理流道结构） ③改变操作条件：提高水温、降低膜两侧的压差或料液浓度（分子扩散↑ 减弱吸附）
3. 在设计下游分离过程前，必须考虑哪些问题才能确保所设计的工艺过程最为经济、可靠？ 要考虑产品价值、产品质量、产物在生产过程中出现的位置、杂质位置、产品和杂质的独特 物化性质、不同分离方法的技术经济性比较。 综上考虑，采用步骤数最少、次序合理、进料组成、产品形式，稳定性和物性（溶解度、分 子大小、电荷、功能团）、有适应产品的技术规格、生产规模、生产方式、环保和安全要求
2-细胞分离与破碎
7.
解：
8.23*1014cm/g Rm=0
加入原点做 Q2-t 线性回归，y=301.91x+128.02
K=301.91×106
������������
=
������
·
2������������ ������������������
=
3.0191
×
108
·
2 1.1
× ×
0.06 × 106 10−3 × 1060
7. 试论述反渗透在工业中的应用。 主要是用作水源净化及纯水生产，制备用于调制生物产品和清洗产品容器的无热原 水，氨基酸、糖最终产品的浓缩和洗滤除盐。
8. 利用截留相对分子质量 MMCO=100000 的超滤膜错流超滤分离发酵清液中的蛋白质， 过滤操作采用开路循环方式初始目标蛋白质（Mr=155000)的质量浓度 cT=1g/L,杂蛋白 质（Mr=23000）的质量浓度 cc=3g/L,发酵液体积 1000mL，透过流量 Q=0.5mL/s.超 滤膜对目标蛋白质的截留率 RT=0.99，对杂蛋白质的截留率 Rc=0.5.设料液槽内全混， 循环管线内液体量可忽略不计。 （1）若采用浓缩操作，计算目标蛋白质的质量浓度达到 5g/L 所需时间？ （2）若采用透析过滤除杂蛋白质，料液槽中添加缓冲液使体积恒定，计算目标蛋白纯 度（总蛋白质中目标蛋白质的质量分数）提高到 95%所需时间，此时目标蛋白质收 率？ 1606s, 16500s 92.1% 解： （1）
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