脂肪间充质干细胞条件培养基诱导结肠癌HT29细胞凋亡
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ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－１７４０．２０１８．０１．００４
脂肪间充质干细胞条件培养基诱导结肠癌 犎犜２９ 细胞凋亡
胡继军１ 王 梅１ 方 静１ 马春梅１ 沈加裙１ 星１ 陈文莹１ 杨 超２，＃
［中 图 分 类 号 ］ Ｒ７３５．３＋５ ［文 献 标 识 码 ］ Ａ ［文 章 编 号 ］ １００５－１７４０（２０１８）０１－００１８－０５
【摘要】 目的：观察脂肪间充质干细胞条件培养基（ＡＳＣＣＭ）对结肠癌 ＨＴ２９细胞的增殖抑制作用。方法：将 体外培养生长良好的 ＨＴ２９细胞分为两组，一 组 加 入 ＡＳＣＣＭ 再 培 养 （实 验 组 ），另 一 组 加 入 ＤＭＥＭ／Ｆ１２ 培 养 基 再培养（对照组），然后进行如下实验：（１）分别 于 再 培 养 ２４ｈ、４８ｈ 和 ７２ｈ，采 用 ＣＣＫ８ 检 测 两 组 ＨＴ２９ 细 胞 增 殖 水 平，并计算实验组 ＨＴ２９增 殖 率；（２）于 再 培 养 ４８ｈ 采 用 流 式 细 胞 术 检 测 两 组 ＨＴ２９ 细 胞 凋 亡 率；（３）再 培 养 ４８ｈ 后，采用实时荧光定量 ＰＣＲ 检测两组 ＨＴ２９细胞凋亡 因 子 Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ９、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＸＩＡＰ 的 ｍＲＮＡ 表 达 水 平。结果：（１）与对照组比较，实验 组 ＨＴ２９ 细 胞 ２４ｈ 增 殖 水 平 （吸 光 度 ＯＤ 值 ）无 明 显 差 异 （犘＞０．０５），培 养 ４８ｈ、 ７２ｈ的 ＯＤ 值显著降低（犘＜０．０１），且其增殖率下降趋势与培养时间呈 明 显 负 相 关（狉＝ －０．９７４，犘＜０．０１）。（２）实 验组 ＨＴ２９细胞 ＡＳＣＣＭ 培养４８ｈ凋亡 率 较 对 照 组 明 显 增 加 （犘＜０．０１）。（３）实 验 组 ＨＴ２９ 细 胞 ＡＳＣＣＭ 培 养 ４８ｈ凋亡因子 Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ９ｍＲＮＡ 表达较对照组显 著 升 高（犘＜０．０１），Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＸＩＡＰ ｍＲＮＡ 表 达 较 对 照 组显著降低（犘＜０．０１）。结论：ＡＳＣＣＭ 能有效抑制结肠癌 ＨＴ２９细胞增殖和促进凋亡。
【犃犫狊狋狉犪犮狋】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｕｍａｎａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉ ｕｍ （ＡＳＣＣＭ）ｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌｓｏｆｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒ．犕犲狋犺狅犱：Ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄ ＨＴ２９ｃｅｌｌｓｗｉｔｈ ｇｏｏｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｇｒｏｕｐｓ，ｏｎｅｇｒｏｕｐｗｉｔｈｔｈｅＡＳＣＣＭ ｃｕｌｔｕｒｅ （ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ）， ａｎｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈＤＭＥＭ／Ｆ１２ ｍｅｄｉｕｍｃｕｌｔｕｒｅ （ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ），ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｓｆｏｌｌｏｗｓ：（１）ｉｎ２４ｈ， ４８ｈａｎｄ７２ｈｃｕｌｔｕｒｅ，ＣＣＫ８ ｗａｓｕｓｅｄｔｏ ｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌｓｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ；（２）ａｆｔｅｒ４８ｈｃｕｌ ｔｕｒｅ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｓｏｆ ＨＴ２９ｃｅｌｌｓｏｆｔｗｏｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；（３）ａｆｔｅｒ４８ｈｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｆａｃｔｏｒＣａｓｐａｓｅ３，ｃａｓｐａｓｅ９，Ｓｕｒｖｉｖｉｎ，ＸＩＡＰ ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ．犚犲狊狌犾狋狊：（１）ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌ２４ｈｐｒｏｌｉｆ ｅｒａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ （犘＞０．０５），ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ， ４８ｈ，７２ｈｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓ（ＯＤ）ｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ （犘＜０．０１），ａｎｄｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅ
［基 金 项 目］ 武汉市卫生计生委医学科研项目（ＷＸ１６Ｚ０３）
［作 者 单 位］ １武汉市第三医院输血科，武汉 ４３００６０；２湖北中医 药 大 学 检 验 学 院，武 汉 ４３００６０；＃ 通 讯 作 者，Ｅｍａｉｌ：４５０９３６１９６ ＠ｑｑ．ｃｏｍ 本 文 ２０１７１０２３ 收 到 ，２０１８０１１１ 修 回
【关 键 词 】 脂 肪 间 充 质 干 细 胞 ；条 件 培 养 基 ；结 肠 癌 ；凋 亡
犆狅狀犱犻狋犻狅狀犲犱 犕犲犱犻狌犿狅犳犎狌犿犪狀犃犱犻狆狅狊犲犇犲狉犻狏犲犱犕犲狊犲狀犮犺狔犿犪犾犛狋犲犿犆犲犾犾犐狀犱狌犮犲犃狆狅狆狋狅狊犻狊犻狀狅犳犆狅犾狅狀 犆犪狀犮犲狉犎犜２９犆犲犾犾狊 ＨＵＪｉｊｕｎ１，ＷＡＮＧ Ｍｅｉ１，ＦＡＮＧ Ｊｉｎｇ１，ＳＨＥＮ Ｊｉａｑｕｎ１，ＴＵ Ｘｉｎｇ１，ＣＨＥＮ Ｗｅｎｙｉｎｇ１，ＹＡＮＧ Ｃｈａｏ２，＃ １ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，ＴｈｅＴｈｉｒｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷｕｈａｎ，Ｗｕｈａｎ４３００６０，Ｃｈｉｎａ；２ＳｃｈｏｏｌｏｆＬａ ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ，Ｗｕｈａｎ４３００６０，Ｃｈｉｎａ；＃Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ ｉｎｇａｕｔｈｏｒ
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－１７４０．２０１８．０１．００４
脂肪间充质干细胞条件培养基诱导结肠癌 犎犜２９ 细胞凋亡
胡继军１ 王 梅１ 方 静１ 马春梅１ 沈加裙１ 星１ 陈文莹１ 杨 超２，＃
［中 图 分 类 号 ］ Ｒ７３５．３＋５ ［文 献 标 识 码 ］ Ａ ［文 章 编 号 ］ １００５－１７４０（２０１８）０１－００１８－０５
【摘要】 目的：观察脂肪间充质干细胞条件培养基（ＡＳＣＣＭ）对结肠癌 ＨＴ２９细胞的增殖抑制作用。方法：将 体外培养生长良好的 ＨＴ２９细胞分为两组，一 组 加 入 ＡＳＣＣＭ 再 培 养 （实 验 组 ），另 一 组 加 入 ＤＭＥＭ／Ｆ１２ 培 养 基 再培养（对照组），然后进行如下实验：（１）分别 于 再 培 养 ２４ｈ、４８ｈ 和 ７２ｈ，采 用 ＣＣＫ８ 检 测 两 组 ＨＴ２９ 细 胞 增 殖 水 平，并计算实验组 ＨＴ２９增 殖 率；（２）于 再 培 养 ４８ｈ 采 用 流 式 细 胞 术 检 测 两 组 ＨＴ２９ 细 胞 凋 亡 率；（３）再 培 养 ４８ｈ 后，采用实时荧光定量 ＰＣＲ 检测两组 ＨＴ２９细胞凋亡 因 子 Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ９、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＸＩＡＰ 的 ｍＲＮＡ 表 达 水 平。结果：（１）与对照组比较，实验 组 ＨＴ２９ 细 胞 ２４ｈ 增 殖 水 平 （吸 光 度 ＯＤ 值 ）无 明 显 差 异 （犘＞０．０５），培 养 ４８ｈ、 ７２ｈ的 ＯＤ 值显著降低（犘＜０．０１），且其增殖率下降趋势与培养时间呈 明 显 负 相 关（狉＝ －０．９７４，犘＜０．０１）。（２）实 验组 ＨＴ２９细胞 ＡＳＣＣＭ 培养４８ｈ凋亡 率 较 对 照 组 明 显 增 加 （犘＜０．０１）。（３）实 验 组 ＨＴ２９ 细 胞 ＡＳＣＣＭ 培 养 ４８ｈ凋亡因子 Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ９ｍＲＮＡ 表达较对照组显 著 升 高（犘＜０．０１），Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＸＩＡＰ ｍＲＮＡ 表 达 较 对 照 组显著降低（犘＜０．０１）。结论：ＡＳＣＣＭ 能有效抑制结肠癌 ＨＴ２９细胞增殖和促进凋亡。
【犃犫狊狋狉犪犮狋】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｕｍａｎａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉ ｕｍ （ＡＳＣＣＭ）ｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌｓｏｆｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒ．犕犲狋犺狅犱：Ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄ ＨＴ２９ｃｅｌｌｓｗｉｔｈ ｇｏｏｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｇｒｏｕｐｓ，ｏｎｅｇｒｏｕｐｗｉｔｈｔｈｅＡＳＣＣＭ ｃｕｌｔｕｒｅ （ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ）， ａｎｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈＤＭＥＭ／Ｆ１２ ｍｅｄｉｕｍｃｕｌｔｕｒｅ （ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ），ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｓｆｏｌｌｏｗｓ：（１）ｉｎ２４ｈ， ４８ｈａｎｄ７２ｈｃｕｌｔｕｒｅ，ＣＣＫ８ ｗａｓｕｓｅｄｔｏ ｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌｓｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ；（２）ａｆｔｅｒ４８ｈｃｕｌ ｔｕｒｅ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｓｏｆ ＨＴ２９ｃｅｌｌｓｏｆｔｗｏｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；（３）ａｆｔｅｒ４８ｈｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｆａｃｔｏｒＣａｓｐａｓｅ３，ｃａｓｐａｓｅ９，Ｓｕｒｖｉｖｉｎ，ＸＩＡＰ ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ．犚犲狊狌犾狋狊：（１）ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆＨＴ２９ｃｅｌｌ２４ｈｐｒｏｌｉｆ ｅｒａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ （犘＞０．０５），ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ， ４８ｈ，７２ｈｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓ（ＯＤ）ｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ （犘＜０．０１），ａｎｄｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅ
［基 金 项 目］ 武汉市卫生计生委医学科研项目（ＷＸ１６Ｚ０３）
［作 者 单 位］ １武汉市第三医院输血科，武汉 ４３００６０；２湖北中医 药 大 学 检 验 学 院，武 汉 ４３００６０；＃ 通 讯 作 者，Ｅｍａｉｌ：４５０９３６１９６ ＠ｑｑ．ｃｏｍ 本 文 ２０１７１０２３ 收 到 ，２０１８０１１１ 修 回
【关 键 词 】 脂 肪 间 充 质 干 细 胞 ；条 件 培 养 基 ；结 肠 癌 ；凋 亡
犆狅狀犱犻狋犻狅狀犲犱 犕犲犱犻狌犿狅犳犎狌犿犪狀犃犱犻狆狅狊犲犇犲狉犻狏犲犱犕犲狊犲狀犮犺狔犿犪犾犛狋犲犿犆犲犾犾犐狀犱狌犮犲犃狆狅狆狋狅狊犻狊犻狀狅犳犆狅犾狅狀 犆犪狀犮犲狉犎犜２９犆犲犾犾狊 ＨＵＪｉｊｕｎ１，ＷＡＮＧ Ｍｅｉ１，ＦＡＮＧ Ｊｉｎｇ１，ＳＨＥＮ Ｊｉａｑｕｎ１，ＴＵ Ｘｉｎｇ１，ＣＨＥＮ Ｗｅｎｙｉｎｇ１，ＹＡＮＧ Ｃｈａｏ２，＃ １ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，ＴｈｅＴｈｉｒｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷｕｈａｎ，Ｗｕｈａｎ４３００６０，Ｃｈｉｎａ；２ＳｃｈｏｏｌｏｆＬａ ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ，Ｗｕｈａｎ４３００６０，Ｃｈｉｎａ；＃Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ ｉｎｇａｕｔｈｏｒ
