当前位置：文档之家 › 清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白基因表达的影响

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白基因表达的影响

  • 格式：doc
  • 大小：111.00 KB
  • 文档页数：7

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白基因表达的影响目的探讨清金化痰汤调节慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠气道黏液高分泌的作用机制。

方法Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组与克拉霉素组，每组10只。

除正常组外，其余3组均采用气管内注入脂多糖和烟熏复合法建立COPD模型，分别给予生理盐水、清金化痰汤、克拉霉素灌胃，连续30 d。

实验第31日，处死大鼠提取肺组织，每组随机选取6只，采用实时荧光定量PCR检测肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、表皮生长因子（EGFR）、黏蛋白5AC（MUC5AC）基因表达。

结果模型组大鼠肺组织NE、MUC5AC mRNA 表达较正常组升高；与模型组比较，清金化痰汤组、克拉霉素组NE、MUC5AC mRNA表达均显著降低，清金化痰汤组NE、MUC5AC mRNA表达较克拉霉素组显著降低；清金化痰汤组EGFR mRNA表达较模型组显著降低。

结论清金化痰汤通过调节NE/EGFR/MUC5AC信号转导通路，抑制气道黏液高分泌。

Abstract：Objective To investigate the action mechanism of Qingjin Huatan Decoction on regulating COPD rats with mucus hypersecretion in airway. Methods Fifty 6-8 week old Wistar male rats were randomly divided into healthy group，model group，Qingjin Huatan Decoction group，clarithromycin group，10 rats in each group. Except for healthy group，all the other groups were used the combination method of injecting LPS and smudging to establish COPD models. The last three groups were fed with normal saline，Qingjin Huatan Decoction，clarithromycin respectively for 30 days. On the 31st day of the experiment，the rats were put to death to take lung tissue. 6 rats from each group were chosen randomly，and the protein expressions of NE，EGFR and MUC5AC mRNA in lung tissue were detected by real-time fluorescent quantitative PCR. Results The expressions of NE，MUC5AC mRNA in lung tissue of COPD rats were higher than the healthy group. Compared with model group，the expressions of NE mRNA and MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group and clarithromycin group were markedly lower，while the expressions of NE，MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group were significantly lower than those in clarithromycin group. The expression of EGFR mRNA in Qingjin Huatan Decoction group was lower than that in model group. Conclusion Qingjin Huatan Decoction can inhibit mucus hypersecretion in airway through NE/EGFR/MUC5AC signal transduction pathway.Key words：Qingjin Huatan Decoction；COPD；mucus hypersecretion；MUC5AC；neutrophil elastase；rats慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种严重危害人类健康的慢性呼吸系统疾病，据世界卫生组织估计该病是当前世界第4位疾病死亡病因。

气道黏液高分泌是影响COPD病情和预后的独立危险因素。

黏蛋白5AC（MUC5AC）是黏蛋白最重要的成分，COPD急性加重期（AECOPD）由杯状细胞分泌为主的MUC5AC过度表达具有突出的病理意义。

我们既往的研究表明，清金化痰汤可以显著缓解AECOP患者的临床症状，改善痰液性状，降低患者痰液中MUC5AC的表达[1]。

本研究观察COPD模型大鼠肺组织表皮生长因子（EGFR）、MUC5AC、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）基因的表达，初步探讨清金化痰汤抗黏液高分泌的作用机制。

1 实验材料1.1 动物雄性清洁级Wistar大鼠50只，体质量（250±20）g，北京华阜康生物科技股份有限公司，动物许可证号SCXK（京）2009-0007。

1.2 药物清金化痰汤（瓜蒌皮、黄芩、连翘、漏芦、浙贝母、清半夏、前胡、桔梗）等，免煎颗粒剂由北京康仁堂药业有限公司提供；克拉霉素片，丽珠集团制药厂，批号120201，0.25 g/片。

1.3 主要试剂与仪器脂多糖（LPS，美国Sigma公司）；大前门牌香烟（上海卷烟厂）；Trizol RNA 提取试剂，购自Invitrogen公司；M-MLV逆转录酶购自Promega公司；SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购自BIO-RAD公司；引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

实时荧光定量PCR仪（BIO-RAD公司）。

气管插管针（16号静脉套管针），自制烟熏箱。

2 实验方法2.1 造模采用烟熏加气道内滴注LPS的复合方法复制AECOPD气道黏液高分泌模型[2]。

LPS气道内滴入：于实验第1、14日气道内滴注浓度为1 mg/mL的LPS溶液0.2 mL。

3.5%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，将大鼠仰卧位固定在鼠板上，头高尾低呈45°角放置，暴露声门，在光源下将套管针迅速插入大鼠气管内，拔出套管针钢芯，以棉丝放在塑料套管外口判断是否成功，插管成功后，先抽取空气0.3 mL 后抽取LPS溶液0.2 mL，通过套管针快速注入气管，然后将大鼠固定板直立旋转，左右摇晃30次，使LPS液能均匀分布于双肺。

实验第2-13日、15-30日给予烟熏，每次10只大鼠，用8支香烟，熏30 min，气道内滴注日不烟熏。

2.2 分组及给药Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组、克拉霉素组，每组10只，饲养于二级动物室，将烟熏装置置于通风橱进行熏烟。

实验动物每日给药量2.16 g/kg，相当于人临床用量的7倍。

正常组正常饲养，其余3组分别给予生理盐水、清金化痰汤14 g/kg、克拉霉素83.3 mg/kg灌胃。

每日1次，连续30 d。

2.3 标本采集于实验第31日脱颈处死实验大鼠，取右上叶肺组织，液氮保存，匀浆提取RNA，在实验过程中各组均有死亡，每组随机取6只备检。

2.4 RT-PCR检测2.4.1 总RNA提取按照Trizol试剂说明，采用异硫氰酸胍一步法抽提组织总RNA，所提总RNA经1%琼脂糖凝胶电泳确定其完整性，并经紫外分光光度计检测所提RNA含量和纯度。

cDNA合成：分别取3 μg总RNA为模板，在加入Oligo（dT）和M-MLV反转录酶后以25 μL体系在42 ℃下反应1 h合成cDNA 第一链，之后70 ℃加热5 min以灭活反转录酶。

2.4.2 RT-PCR扩增采用SYBR Green Ⅰ荧光染料技术，在20 μL反应体系中，加入cDNA2 μL、ddH2O 7 μL、SYBR Green荧光定量PCR Mix 10 μL、引物1 μL：MUC5AC上游5’-CTGTGTCCATCTCAACCTTA-3’，下游5’- GCTGCCATCTATCCAATCA-3’，产物长度101 bp；EGFR上游5’-CATAGCAATGCGGTGAG-3’，下游5’-GAAGTCCTGCTG GTAGTCA-3’，产物长度144 bp；NE上游5’-AATGTGACA GTGGTGACTAA-3’，下游5’-GGCTGCGGATAATGGAAT-3’，产物长度232 bp；用β-actin基因作为内参，β- actin上游5’-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3’，下游5’- TTTAATGTCACGCACGATTTC-3’，产物长度150 bp。

反应条件：94 ℃、10 min，94 ℃、10 s，55 ℃、10 s，72 ℃、10 s，共45个循环。

同时做熔解曲线以确认是否是单一峰。

反应结束后，通过琼脂糖凝胶电泳确认扩增产物是否符合原设计片段长度。

PCR反应及数据采集在CFX-96系统上进行，记录其循环阈值（Ct），每个样品中靶基因的相对mRNA表达采用相对定量公式2-ΔΔCt计算，其中ΔCt 值=靶基因Ct值-β-actin Ct值。

3 统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行分析。

计量资料以—x±s表示，多组间均数比较采用方差分析。

P＜0.05表示差异有统计学意义。

4 结果4.1 总RNA提取总RNA样品经琼脂糖凝胶电泳之后，紫外灯下观察可见18、28 s两条清晰的条带，未被降解。

紫外分光比色测定显示，所有RNA样品在260、280 nm处A值之比均在1.8～2.0之间，纯度符合要求。

4.2 各指标熔解曲线与扩增曲线各目标熔解曲线均为单一峰，扩增曲线均呈平行分布，见图1～图4。

说明本实验引物设计成功，扩增产物特异性很好。

为了验证PCR所得产物与各目标的实际分子量是否相等，我们随机选取各2个目标PCR产物进行电泳分析，结果符合预期分子量，见图5。

4.3 清金化痰汤对大鼠肺组织弹性蛋白酶、表皮生长因子、黏蛋白5AC基因表达的影响与正常组比较，模型组NE和MUC5AC目标基因的mRNA表达显著升高（P ＜0.05，P＜0.01）；与模型组和克拉霉素组比较，清金化痰汤组中3种目标基因的mRNA表达均降低（P＜0.05，P＜0.01）。

合集下载

清金化痰汤加减联合西药治疗肺癌合并慢性阻塞性肺疾病 (COPD)的临床效果

清金化痰汤加减联合西药治疗肺癌合并慢性阻塞性肺疾病 (COPD)的临床效果

清金化痰汤加减联合西药治疗肺癌合并慢性阻塞性肺疾病（COPD）的临床效果摘要】目的：针对肺癌合并COPD患者采取清金化痰汤加减西药治疗的疗效进行探究。

方法：选取2018年2月~2019年2月期间我院收治的82例肺癌合并COPD患者作为研究对象，随机分为对照组（西药治疗）和观察组（西药联合清金化痰汤治疗）各41例，就两组患者治疗效果及不良反应进行对比。

结果：观察组治疗效果明显高于对照组，且经治疗后观察组患者肺功能各项指标均高于对照组，差异显著（P＜0.05）。

结论：西药联合清金化痰汤可有效提升肺癌合并COPD患者治疗效果，且安全性较高，故值得借鉴。

关键词：清金化痰汤；慢性阻塞性肺疾病；肺癌慢性阻塞性肺疾病（COPD）在临床中属于一种较为多见的呼吸性系统疾病，且40%~65%肺癌患者中就患有该合并症，该疾病使肺的顺应性大大降低，稍微劳作后就会表现出呼吸困难、咳喘等症状，对其生活质量造成严重制约。

现阶段，临床上常给予止咳及平喘等药物予以治疗，短期内虽可有效缓解其症状，但病情易反复发作[1]。

为此，本研究特针对肺癌合并COPD患者展开清金化痰汤加减联合西药的治疗效果进行探究，现作如下汇报：1资料与方法1.1一般资料选取82例肺癌合并COPD患者作为研究对象，均为我院2018年4月~2020年4月期间收治，随机进行分组。

对照组41例，男24例，女17例；年龄45~72岁之间，平均（53.62±3.40）岁；病程2~12年，平均（6.16±2.33）年。

观察组41例，男22例，女19例；年龄46~74岁之间，平均（54.71±3.28）岁；病程3~11年，平均（6.09±1.89）年。

组间肺癌合并COPD患者基线资料可比（P＞0.05）。

1.2方法对照组患者采取常规西药予以治疗，首先进行控制性氧疗，并结合患者血气情况实施无创通气，取哌拉西林钠舒巴坦钠静脉滴注，3g/次，1次/12h，抗菌药物的使用根据痰培养和药敏结果予以调整；取异丙托溴铵溶液雾化吸入，2ml/次，3次/d；取盐酸氨溴索静脉注射，60mg/次，2次/d，每个疗程周期为7d，持续治疗14d。

清金化痰汤加味治疗痰热壅肺型慢性阻塞性肺病临床分析

清金化痰汤加味治疗痰热壅肺型慢性阻塞性肺病临床分析

清金化痰汤加味治疗痰热壅肺型慢性阻塞性肺病临床分析摘要：目的分析清金化痰汤加味治疗痰热壅肺型慢性阻塞性肺病的临床疗效。

方法选择我院2014年6月-2015年12月期间收治的90例慢性阻塞性肺病患者作为观察对象。

根据随机数字法将90例患者分为观察组（45例）和对照组（45例）。

对照组患者予以常规治疗，观察组加用清金化痰汤加味治疗。

比较两组治疗后的肺功能指标及临床疗效。

结果观察组患者总有效率高于对照组，差异显著（P＜0.05）；治疗后观察组患者的肺功能指标均显著优于对照组，差异显著（P＜0.05）。

结论清金化痰汤加味治疗痰热壅肺型慢性阻塞性肺病临床疗效显著，能有效改善临床病症，促进患者康复。

关键词：清金化痰汤加味；痰热壅肺型；慢性阻塞性肺病；临床疗效慢性阻塞性肺病是一种具有破坏性的肺部疾病，患者常伴有气短、咳嗽、咳痰、呼吸困难及胸闷等临床症状，该病不仅对呼吸道产生影响，若治疗不及时对全身的系统均会造成一定的影响[1-2]。

在中医上称为肺胀，病理特征为气流受限，呼吸道对有害颗粒的异常炎症反应，该病在临床上较为多见[3]。

临床上的治疗方法多以使用抗菌药物为主，治疗效果不太理想，容易反复发作。

有关研究显示[4]，予以痰热壅肺型慢性阻塞性肺病中医治疗效果更佳。

鉴于此，本研究进一步分析清金化痰汤加味治疗痰热壅肺型慢性阻塞性肺病的临床疗效。

详细报告如下。

1 资料与方法1.1 一般资料选择我院2014年6月-2015年12月期间收治的90例慢性阻塞性肺病患者作为观察对象。

根据随机数字法将90例患者分为观察组（45例）和对照组（45例）。

观察组男24例，女21例；年龄46-74岁，平均（63.59±5.49）岁；病程5个月-18年，平均病程（9.21±5.87）年。

对照组男20例，女25例；年龄44-73岁，平均（62.97±6.08）岁；病程5个月-17年，平均病程（8.79±6.12）年。

清金化痰汤治疗慢性阻塞性肺疾病合并下呼吸道感染的效果

清金化痰汤治疗慢性阻塞性肺疾病合并下呼吸道感染的效果

清金化痰汤治疗慢性阻塞性肺疾病合并下呼吸道感染的效果【摘要】目的探究在慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并下呼吸道感染患者治疗中使用清金化痰汤的效果。

方法选取80例2018年2月至2019年2月收治的COPD合并下呼吸道感染患者，用随机分列表法将其分为对照组（n=40，常规治疗）和实验组（n=40，常规治疗+清金化痰汤），比较两组研究对象肺功能改善情况及综合疗效。

结果在治疗总有效率上，实验组（95.00%）比对照组（80.00%）高（P＜0.05）；在肺功能改善情况上，治疗前两组研究对象两项指标基本一致（P＞0.05），治疗后实验组两项指标均高于对照组（P＜0.05）。

结论对COPD合并下呼吸道感染患者使用清金化痰汤治疗，可明显提高治疗总有效率，改善患者肺功能。

【关键词】清金化痰汤；慢性阻塞性肺疾病；下呼吸道感染；疗效慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）主要对患者肺部造成损害，但同样能影响其他器官[1]。

患病后肺功能不可逆转地开始下降，目前尚无治愈方法，需进行终生治疗，但通过药物治疗可显著改善患者生活质量[2]。

近年来中医在治疗COPD方面积累了大量经验，本研究就清金化痰汤对COPD合并下呼吸道感染患者的综合疗效进行评估，现报告如下1资料与方法1.1一般资料选取80例2018年2月至2019年2月COPD合并下呼吸道感染患者，用随机分列表法将其分为对照组（n=40，常规治疗）和实验组（n=40，常规治疗+清金化痰汤），本研究经过伦理委员会批准。

对照组中男23例，女17例，年龄22-67岁，平均年龄（47.62±5.23）岁；实验组中男25例，女15例，年龄21-66岁，平均年龄（46.57±4.85）岁。

两组间一般资料基本一致（P＞0.05），患者及家属同意并自愿加入本次研究中，且签署知情同意书。

1.2方法对照组：采用西药常规治疗，给予扬子江药业集团有限公司生产的盐酸氨溴索注射液（批号：国药准字H20080545；规格：15mg）静脉滴注，15mg/次，2-3次/d，静脉滴注山西普德药业股份有限公司生产的头孢哌酮钠他唑巴坦钠（批号：国药准字H20123099；规格：2.0g），2g/次，2次/d，连续治疗10d。

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌模型大鼠表皮生长因子受体／MAPK信号通路的影响

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌模型大鼠表皮生长因子受体／MAPK信号通路的影响

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌模型大鼠表皮生长因子受体／MAPK信号通路的影响目的观察清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠表皮生长因子受体（EGFR）/MAPK信号通路的影响，探讨其干预COPD气道黏液高分泌的作用机制。

方法气管内滴注LPS联合烟熏方法建立COPD气道黏液高分泌模型。

实验大鼠随机分为空白组、模型组、清金化痰汤组、克拉霉素组，每组10只。

空白组正常饲养，其余3组分别给予生理盐水、清金化痰汤、克拉霉素片灌胃，每日1次，连续30 d。

各组大鼠于实验第31日分别处死，HE染色观察肺组织病理形态及黏液腺体增生情况，实时荧光定量PCR检测肺组织EGFR、MUC5AC基因表达，免疫组化检测肺组织及气道上皮P-EGFR、P-ERK、P-JNK、P-p38、MUC5AC蛋白表达。

结果与空白组比较，模型组大鼠气道上皮黏液腺体增生及P-EGFR、P-ERK、P-JNK、P-p38、MUC5AC蛋白表达显著升高（P＜0.01），MUC5AC mRNA表达升高（P＜0.05）；与模型组比较，清金化痰汤组大鼠气道上皮黏液腺体增生及P-p38、P-ERK、MUC5AC蛋白表达显著降低（P＜0.05，P＜0.01），P-JNK蛋白表达显著升高（P＜0.01）；清金化痰汤组肺组织EGFR、MUC5AC mRNA表达显著降低（P＜0.01）。

结论清金化痰汤可能通过抑制EGFR 下游ERK、p38信号通路，干预COPD气道黏液高分泌。

Abstract：Objective To observe the effects of Qingjin Huatan Decoction on EGFR/MAPK signaling pathway of airway mucus hypersecretion rats with chronic obstructive pulmonary disease （COPD）. Methods Intratracheal instillation of LPS combined with smudging method was used to establish COPD airway mucus hypersecretion rat models. Experimental rats were randomly divided into blank group，model group，Qingjin Huatan Decoction group and clarithromycin group. The blank group was normally fed，while the other three groups were given NS，Qingjin Huatan Decoction，and clarithromycin respectively for gavage，once a day for 30 days. All rats were killed on the 31st day，and pathological changes of lung tissue and mucous glands hyperplasia were observed by HE staining method. The gene expressions of EGFR and MUC5AC in lung tissue were detected by RT-PCR method. The protein expressions of P-EGFR，P-ERK，P-JNK，P-p38 and MUC5AC in pulmonary tissue and airway epithelium were detected by immunohistochemical method. Results Compared with the blank group，mucous glands hyperplasia on airway epithelium，protein expressions of P-EGFR，P-ERK，P-JNK，P-p38 and MUC5AC on airway epithelium significantly increased in the model group （P＜0.01）；gene expression of MUC5AC of lung tissue increased （P ＜0.05）. Compared with the model group，mucous glands hyperplasia on airway epithelium，P-p38，P-ERK and MUC5AC protein expression on airway epithelium in Qingjin Huatan Decoction group significantly decreased （P＜0.05，P＜0.01）；the protein expression of P-JNK increased significantly （P＜0.01）. EGFR and MUC5AC mRNA in lung tissue in Qingjin Huatan Decoction group decreased significantly （P＜0.01）. Conclusion Qingjin Huatan Decoction can reduce airwaymucus hepersecrection of COPD by inhibiting ERK and p38 signal pathway on EGFR downstream.Key words：Qingjin Huatan Decoction；chronic obstructive pulmonary disease；airway mucus hypersecretion；EGFR/MAPK signaling pathway；rats慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种严重危害人类健康，加重家庭及社会负担的慢性呼吸系统疾病。