肾缺血再灌注损伤(RIRI)动物模型具体步骤及方法

茶多酚对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用实验研究李华彬【摘要】目的探讨茶多酚(Tea polyphenols TP)预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法建立大鼠肾缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury RIRI)模型.选用健康SD大鼠42只,随机分为3组:假手术组、单纯肾缺血再灌注损伤组,茶多酚预处理组.于肾缺血再灌注(renal ischemia reperfusion RIR)开始时刻,RIR后2h、RIR后24h分别检测血清肌酐(SCr),血清超氧化物岐化酶(SOD)、血清丙二醛(MDA)、肾组织SOD、肾组织MDA及观察肾组织的病理变化.结果茶多酚预处理组与假手术组相比较,RIRI组SCr水平升高(P＜0.05),肾组织及血清中的SOD降低及MDA水平增加(P＜0.05).而茶多酚预处理组SCr、血清MDA和肾组织MDA均比单纯RIRI组低(P＜0.05),血清SOD水平及肾组织SOD水平升高(P＜0.05).结论在肾脏缺血再灌注损伤过程中,茶多酚能起到对肾脏的保护作用.【期刊名称】《中外医疗》【年(卷),期】2010(029)003【总页数】4页(P1-4)【关键词】茶多酚;缺血再灌注损伤;超氧化物歧化酶【作者】李华彬【作者单位】四川省双流县第二人民医院肾内科,四川成都,610213【正文语种】中文【中图分类】R-33肾脏的血流量约是心脏的1/4,因此它是一个高血流的器官,对缺血以及缺氧均较敏感,在临床上如遇到严重烧伤、心脏停跳、失血性休克、呼吸抑制、肾移植术、需暂时阻断肾血流的手术、毒物中毒及严重感染等均可导致肾脏的缺血和缺氧。

目前许多研究表明在体内多种脏器缺血后重新恢复血流灌注或氧供,细胞功能代谢障碍及结构破坏较缺血时加重,器官功能将一步恶化,这种情况称之为缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injure IRI)。

“分心木”水提物对大鼠单侧肾缺血-再灌注损伤的防护作用作者：张伟陈雪洁刘蓉肖朝江沈磊田新雁姜北来源：《中国民族民间医药·下半月》2022年第02期【摘要】目的：運用模型大鼠探究民族民间药物分心木（DJF）水提物预处理对单侧肾缺血-再灌注损伤（RIRI）的防护作用。

方法：SD大鼠随机分为对照组、模型组、DJF水提物高、低剂量组。

DJF水提物高、低剂量组在建模前，每天分别给予不同剂量的DJF水提物，连续用药14 d，对照组和模型组以相同方式灌胃等体积的蒸馏水。

DJF水提物组和模型组进行缺血-再灌注处理，对照组只分离肾动脉。

24 h后，取血和肾脏组织。

检测各组大鼠血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的水平，肾脏组织黄嘌呤氧化酶（XOD）的活力，H&E染色观察各组肾组织病理结构变化。

结果：与模型组相比，分心木水提物高剂量组，可显著降低Cr、BUN、MDA的含量及抑制XOD的活性，提高SOD的活力，明显改善肾脏结构。

结论：分心木水提物具有抑制XOD活性、调节氧化应激的功效，且可一定程度改善肾缺血-再灌注损伤后的肾功能。

【关键词】分心木;水提物;肾缺血-再灌注损伤;氧化应激;黄嘌呤氧化酶【中图分类号】R285.5【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2022）04-0025-04Protective Effect of the Aqueous Extract of Diaphragma Juglandis Fructus on Unilateral Renal Ischemia-reperfusion Injury in RatsZHANG Wei1CHEN Xuejie1LIU Rong1XIAO Chaojiang1SHEN Lei1TIAN Xinyan2JIANG Bei11.Institute of Materia Medica， Dali University， Dali 671000， China;2. Basic Medical College， Dali University， Dali 671000， ChinaAbstract：Objectives To investigate protective effect of aqueous extract of the folk medicine Diaphragma Juglandis Fructus （DJF） on rat model with unilateral renal ischemia reperfusion injury （RIRI）. Methods SD rats were randomly divided into control group， model group， high-dose and low-dose DJF aqueous extract groups. The DJF groups were given different doses of DJF aqueous extract for 14 consecutive days before the model was constructed. The control group and the model group were given the same volume of distilled water in the same way. The groups of DJF aqueous extract and model group were treated with ischemia-reperfusion. In the control group， only the renal artery was isolated. After 24 hours， blood and kidney tissues were taken. Then detect the contents of Cr， BUN， MDA， SOD， and the activities of XOD， renal tissues were taken for H&E staining to observe renal pathological changes in each group.Results Compared with model group， high-dose group of DJF aqueous extract significantly reduces contents of Cr， BUN， MDA， inhibits XOD activity， promotes SOD activity and improves renal structure. Conclusion Aqueous extract of Diaphragma Juglandis Fructus possesses ability of suppressing XOD activity and regulating oxidative stress response， and can improve renal function after RIRI to a certain extent.Keywords：Diaphragma Juglandis Fructus; Aqueous Extract; Renal Ischemia-Reperfusion Injury; Oxidative Stress; Xanthine Oxidase肾缺血-再灌注损伤（Renal ischemia reperfusion injury，RIRI）是指在肾脏缺血的基础上恢复血流后，损伤反而加重的现象，是引发急性肾损伤和肾衰竭的重要因素[1]。

辛伐他汀对肾缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响目的观察辛伐他汀预处理对肾缺血再灌注损伤大鼠远程器官细胞凋亡的影响。

方法采用夹闭双侧肾动静脉45分钟后去夹再灌的方法复制肾缺血再灌注损伤（RI/RI）模型。

36只SD大鼠隨机分成3组：（1）假手术组；（2）肾缺血再灌注组；（3）辛伐他汀组，每组12只。

取心肌组织测定乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活性，TUNEL法检测细胞凋亡率，蛋白免疫印迹检测NF-kB蛋白表达。

结果与假手术组比，肾缺血再灌注组LDH、肌CK活性增高，细胞凋亡率升高，NF-kB表达增多，差异有统计学意义（P＜0.05）。

与肾缺血再灌注组相比辛伐他汀组LDH、CK活性降低，胞凋亡率降低，差异有统计学意义（P＜0.05），NF-kB表达降低。

结论辛伐他汀对RIRI大鼠心肌损伤有改善作用，可能与凋亡基因NF-kB表达有关。

标签：辛伐他汀；细胞凋亡；NF-kB他汀类药物是三羟基三甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，目前普遍用于治疗高脂血症。

近年来发现，他汀类药物除降血脂作用外，还有抗炎作用，对肾脏有保护功能等其他非降脂方面的作用，在防治心脏疾病方面也日益重视[1]。

但辛伐他汀预处理对远程器官的影响的研究尚不多见。

本实验就此进行了初步研究。

1 资料与方法1.1 一般资料成年健康雄性SD（河北省实验动物中心）；辛伐他汀（杭州上虞京新药业有限公司）；LDH、CK（南京建成生物制品公司）；NF-kB（Santa cruz biotechnology）。

成年健康雄性SD大鼠36只，体重16～230 g，在20～26℃实验室安静饲养两天后随机分为3组：（1）假手术组；（2）肾缺血再灌注组；（3）辛伐他汀组。

每组12只。

分组后，辛伐他汀组每日给予辛伐他汀20 mg/kg灌胃，持续2周。

假手术组和缺血再灌组每日给予等量的生理盐水灌胃。

两周之后复制动物模型。

1.2 方法10%水合氯醛腹腔麻醉，开腹，暴露双侧肾动、静脉。

全脑缺血再灌注动物模型建立方法一、引言脑缺血再灌注模型是研究脑缺血再灌注损伤的重要手段，对于深入理解缺血性脑损伤的病理生理机制，探索新的治疗方法具有重要意义。

本文将详细介绍全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。

二、准备工作1. 实验动物：选择健康成年小鼠、大鼠或兔，确保其无疾病、无遗传性疾病。

2. 设备：准备好手术器械、显微镜、止血钳、无创血压计、冰冻浴盆、恒温湿毛巾等。

3. 药物：准备适量麻醉剂、抗生素、输液用品等。

三、全脑缺血模型的建立1. 麻醉：使用麻醉剂对实验动物进行全身麻醉。

2. 暴露手术部位：对实验动物进行全身消毒，打开腹腔，暴露手术部位。

3. 制作全脑缺血：使用特制的夹子将实验动物的脑血管夹闭，制造全脑缺血。

具体夹闭部位和时间需要根据实验需求进行调整。

四、再灌注过程的控制1. 解除血管夹闭：缺血时间结束后，缓慢解除血管夹闭，恢复血流。

2. 观察再灌注情况：在再灌注过程中，密切观察实验动物的神态、行为变化，以及脑部颜色、肿胀等情况。

五、模型评估与结果记录1. 评估再灌注效果：再灌注过程结束后，评估实验动物的全脑缺血再灌注效果，记录相关数据。

2. 观察病理变化：对实验动物的大脑组织进行病理学检查，观察缺血再灌注损伤后的病理变化。

3. 结果记录与分析：将观察到的结果进行记录，并对结果进行分析，为后续研究提供基础数据。

六、注意事项1. 麻醉剂的使用要适量，避免对实验动物造成过大的伤害。

2. 手术过程中要保持无菌操作，避免感染。

3. 制作缺血模型时，要确保夹闭的血管部位准确，时间适当，避免影响实验结果。

4. 再灌注过程要缓慢，确保血流的恢复不会对实验动物造成过大的刺激。

5. 病理学检查要取样准确，切片处理要规范，确保检查结果的准确性。

七、总结本文详细介绍了全脑缺血再灌注动物模型的建立方法，包括准备工作、缺血模型的建立、再灌注过程的控制和结果记录等。

该模型可用于研究脑缺血再灌注损伤的病理生理机制和探索新的治疗方法。

对肾缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制刘文（山东大学第二医院，济南250033）摘要：目的探讨川苇嗪对肾缺血再灌注损伤（RIRI、大鼠的保护作用及机制。

方法18只SD大鼠随机均分为假手术组（Sham组、、肾缺血再灌注组（I/R组、及组,I/R组及组RIR I模型,组仅分离肾动脉，不做缺血。

组再灌注恢复后立即给予盐40mg/kg腹腔注射，每隔6h给1次,4h 后PBS心灌流，取各组肾脏组织。

采用过碘酸-雪夫染色观察肾组织病理变化，全自动生化分析仪检测血清尿素氮与肌g,TUNEL-DAPI双染色法检测肾细胞凋亡‘Western blotting法检测肾组织中Nod样受体蛋白3（NLRP3、蛋白，RT-PCR法检测肾组织中NLRP3mRNA。

结果组肾组织无明，I/R组肾组织有损伤，组肾组织损伤较I/R组轻。

与I/R组比较，川苇嗪组血肌酹、尿素氮水平，肾组织细胞凋亡率，肾组织中NLRP3蛋白、mRNA相对低（P均＜0.05、。

结论可减轻RIRI大鼠的肾，改善肾，其作用机制可能与降低肾组织中NLRP3。

关键词：肾缺血再灌注；；血肌g;尿素氮;Nod样受体蛋白3；炎症小体;大鼠doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2019.22.011中图分类号:R692；R96文献标志码:A文章编号；1002-266X（2019）22-0041-04Protection and mechanism of tetramethylpyrazine on renal ischemia reperfusion injury in ratsLIU Wen(The Second Hospital of Shandong University,Jinan250033,China)Abstract:Objective To investigate the protective effect and mechanism of tetramethylpyrazine on renal ischemia reperfusion injury(RIRI)in rats.Methods18SD rats were randomly divided into sham group,renal ischemia-reperfu­sion group(I/R group)and tetramethylpyrazine group.Tetramethylpyrazine hydrochloride(40mg/kg,at intervals of6 hours)was injected intraperitoneally in the tetramethylpyrazine group immediately after the reperfusion recovery.24h later, the kidney tissues were taken for follow-up experiments.PAS staining was used to observe the pathological changes of renal tissue,serum urea nitrogen and creatinine were detected by automatic biochemical analyzer,renal tubular cell apoptosis was detected by TUNEL-DAPI double staining,nod-like receptor protein3(NLRP3)protein expression in renal tissue was detected by Western blotting,and NLRP3mRNA expression in renal tissue was detected by RT-PCR.Results The renal tissues of the sham operation group had no obvious abnormity and the renal tissues of the I/R group were damaged,while the renal tissues of the tetramethylpyrazine group were less damaged than those of the I/R pared with the I/R group,the blood creatinine and urea nitrogen levels in the tetramethylpyrazine group were low(all P<0.05),the apopto­sis rate was low(all P<0.05),and the relative expression levels of NLRP3protein and mRNA in renal tissues were low (all P<0.05).Conclusion tetramethylpyrazine can reduce renal injury and improve renal function in SD rats,and its mechanism may be related to reducing NLRP3expression in renal tissues.Key words:renal ischemia reperfusion injury；tetramethylpyrazine;urea nitrogen；creatinine；nod-like receptor protein 3；inflammatory corpuscle；rats肾缺血再灌注（RIRI）指原因导致肾脏缺血后，恢复血液供灌注对肾脏造成的损o RIRI病制复杂，主要与自由基年田胞内钙超载、炎性反应和细胞凋亡有关［1］。

《川芎嗪呋咱拼合物对小鼠肾缺血再灌注损伤防治作用的研究》一、引言随着医学研究的不断深入，对缺血再灌注损伤的防治成为当前医学研究的重要领域。

肾脏缺血再灌注损伤（RIPI）是指肾组织经历一定程度的缺血后，在重新恢复血流时出现的一系列病理生理变化，可导致肾功能障碍、肾小管坏死等严重后果。

川芎嗪呋咱拼合物作为一种传统中药的现代制剂，其成分具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等作用，被广泛用于临床治疗多种疾病。

因此，研究川芎嗪呋咱拼合物对小鼠肾缺血再灌注损伤的防治作用具有重要的理论和实际意义。

二、材料与方法1. 实验材料选用健康的成年小鼠，并购买川芎嗪呋咱拼合物及相关实验试剂。

2. 实验方法（1）模型构建：采用夹闭肾动脉法构建小鼠肾缺血再灌注损伤模型。

（2）分组与给药：将小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组等组别，分别进行相应的处理和给药。

（3）观察指标：监测小鼠肾功能指标（如尿素氮、肌酐等）、肾组织形态学变化等。

三、实验结果1. 肾功能指标变化（表格描述各组小鼠在不同时间点肾功能指标的变化情况）结果表明，治疗组在肾缺血再灌注后，肾功能指标的恢复情况明显优于模型组，说明川芎嗪呋咱拼合物对肾功能的恢复具有积极的作用。

2. 肾组织形态学变化（图片或描述各组小鼠肾组织形态学变化情况）结果表明，治疗组在肾缺血再灌注后，肾组织损伤程度明显低于模型组，表明川芎嗪呋咱拼合物能够减轻肾组织的损伤程度。

3. 药理机制研究通过检测相关基因和蛋白的表达情况，发现川芎嗪呋咱拼合物能够上调抗氧化、抗炎等相关基因的表达，下调凋亡相关基因的表达，从而发挥防治肾缺血再灌注损伤的作用。

四、讨论本研究结果表明，川芎嗪呋咱拼合物对小鼠肾缺血再灌注损伤具有显著的防治作用。

其机制可能与调节抗氧化、抗炎、抗凋亡等相关基因的表达有关。

此外，川芎嗪呋咱拼合物还可能通过其他途径发挥治疗作用，如改善微循环、促进血管再生等。

这些研究结果为川芎嗪呋咱拼合物在临床治疗肾脏疾病提供了理论依据和实验支持。

血管再灌注实验报告1. 引言血管再灌注(Ischemia-reperfusion, I/R) 是指血液供应阻断后再恢复供应。

血管再灌注实验常被用于研究心脏、肝脏、肾脏等器官缺血再灌注损伤的机制和治疗方法。

本实验旨在通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型，观察心肌组织的损伤程度，探讨可能的保护措施。

2. 材料与方法2.1 实验动物雄性C57BL/6小鼠，体重22-26g，年龄8-10周。

2.2 实验组织心脏组织。

2.3 实验设计将实验动物随机分为以下组别：- 对照组(Sham)：动物接受手术操作，但没有缺血再灌注处理。

- 缺血再灌注组(I/R)：动物在缺血30分钟后再进行1小时的再灌注。

- 预处理组(PreC)：在缺血前15分钟，给予预处理药物。

2.4 缺血再灌注模型建立1. 手术动物采用深度麻醉并固定在手术台上。

2. 通过胸骨处切口，暴露心脏。

3. 用缝线将冠状动脉结扎。

4. 结扎30分钟后，解开缝线并进行1小时的再灌注。

5. 收集心肌组织样本。

2.5 组织损伤评价方法1. 心脏组织样本定量化。

2. 彩色素沉淀法(TTC staining) 观察心脏梗死面积。

3. 光镜下观察组织结构。

2.6 统计分析采用统计学软件进行数据的描述性分析，并使用方差分析(ANOVA) 进行组间比较，p < 0.05认为差异有统计学意义。

3. 结果3.1 心脏梗死面积变化通过TTC染色观察心脏梗死面积的变化，在I/R组中心脏梗死面积显著增加(p < 0.05)，而在预处理组中心脏梗死面积较小，差异有统计学意义。

3.2 组织结构观察使用光镜观察心肌组织结构变化，发现I/R组心肌细胞出现明显的坏死和水肿，而预处理组心肌细胞结构相对完整，坏死和水肿程度明显减轻。

4. 讨论本实验通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型，观察心肌组织的损伤程度。

结果表明，缺血再灌注会导致心肌梗死面积增加和心肌组织结构损伤。

然而，在预处理组中给予药物处理后，心肌梗死面积减小，心肌组织结构保持较好。

影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤（南方医科大学广州510515）【摘要】目的探究影响肾泌尿功能的因素，探究肾缺血后再灌注对肾的损伤现象。

方法静脉分别补充37℃的生理盐水和20%的高渗葡萄糖，观测平均动脉压，尿量；结扎左肾动脉，一段时间后松开动脉夹再灌注，观测平均动脉压，尿量，血肌酐和尿肌酐含量，计算内生肌酐清除率(Ccr)。

结果补充37℃的生理盐水和20%的高渗葡萄糖尿生成量增加，缺血再灌注后血肌酐浓度增高，尿肌酐浓度降低,内生肌酐清除率(Ccr)明显降低。

结论增加血容量，肾滤过血液增多，尿生成增加；注射高渗溶液增加肾小管内原尿浓度，尿生成量增加；缺血再灌注后肾排泄能力降低，肾的功能受损。

【关键词】尿生成；肾缺血再灌注损伤；尿肌酐；内生肌酐清除率肾是机体主要的排泄器官之一，探究影响肾泌尿功能的因素有助于利尿药等干预肾脏功能药物的研发；肾缺血再灌注(Ischemic reperfusion，I／R)损伤是临床上常见的病理过程，在肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等过程中，均可发生不同程度的再灌注损伤，它是急性肾衰最常见的原因，因此探究肾的缺血再灌注这一病理现象具有重要意义。

肾缺血再灌注时，内生肌酐清除率（Ccr）明显降低，肾功能受损.本实验通过复制肾脏缺血再灌注损伤的模型，对肾脏缺血再灌注损伤后血肌酐和尿肌酐的含量，以及内生肌酐清除率（Ccr）进行测定，来探究肾脏的缺血再灌注损伤。

1 材料与方法1.1 实验材料动物：家兔器材：医用计算机记录系统，家兔手术台，哺乳动物手术器械，压力换能器，动脉静脉插管，三通管，注射器，兔绳，分光光度计，恒温水浴箱。

药品与试剂：20%乌拉坦，0.2%肝素，生理盐水，20%葡萄糖溶液，速尿，肌酐测定试剂。

1.2 探究影响尿生成的因素的方法[1]家兔称重后用20%乌拉坦耳缘静脉麻醉，麻醉后将家兔仰卧位固定在兔台上。

家兔颈部剪毛，沿甲状软骨下正中剪开皮肤5cm，分离右侧颈总静脉和左侧颈总动脉。