实验三 薄层色谱法 ppt课件

3.70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年 代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各 步操作的仪器化，并实现了计算机化。
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4.薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）
? 固定相和流动相
?TLC——流动相流动靠毛细作用力， 流动相选择较少受限制，固定相不用 再生。而 HPLC是在封闭的系统内， 流动相流量靠泵控制，溶剂选择受检 测器限制，固定相需再生。
? 样品处理
?TLC要求没有HPLC严格。
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? 色谱分离 TLC可同时分离多个样品 ，并可采用相同或 不同溶剂进行同向或双相 多次展开，通常采 用正相色谱，色谱后 衍生化方便 。
? HPLC一次只能分离一个样品，通常采用 反相色谱，色谱后衍生化受限制。
? 对污染物抗受力强
?TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不 可逆吸附物质均无影响。
W1 ? W2
W
4 Rf
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R ? 2L0? Rf ? L0? Rf ? n ? Rf
W1 ? W2
W
4 Rf
R 1.00 0.75 0.5 0.25 0
0.1 0.3
Rf=0.3,R 最高 Rf在0.2-0.5,R 变化不大 Rf﹤0.1或﹥ 0.7,R下降
0.5 0.7 0.9 Rf
?含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示，
并以下标注明其激发光波长。例 硅胶
HF254
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4.薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例：
? 硅胶板（粒度10～40um）
?硅胶G—将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)， 迅速研磨均匀，立即涂铺。

一、 实 验 目 的
❖ 了解薄层色谱的应用原理 ❖ 掌握薄层色谱的应用方法
二、实 验 原 理
二、实 验 原 理
应用薄层色谱检验、鉴定化合物的原理：
图1 365 nm下观察的结果
图2 硫酸乙醇显色结果
注：两边的是标准品，中间的是样品
二、实 验 原 理
➢ 固定相：硅胶，氧化铝，等。 ➢ 支持板：玻璃板，涤纶布，等。 ➢ 展开剂：根据样品的极性及溶解度选择，可采用单一溶剂，但更常用的
四、实 验 过 程
比移值（ Rf 值）的计算：
五、 注 意 事 项
1. 制作薄层所用玻璃板要平滑、干净。 研磨要充分，保证所制的薄层面应平整均匀 存放薄层板时要注意保持干燥及避免污染。
五、 注 意 事 项
2. 样品浓度（浓度为0.01-0.1%）： 太大，容易出现拖尾；
太小则会导致斑点不明显，难以观察。
五、 注 意 事 项
5. 标记斑点时：要轻轻勾画，避免铅笔将斑点处的硅胶碰掉，从而 影响后续显色结果的观察。
是混合溶剂。
三、实 验 试 剂 与 仪 器
点样样品 香草醛
间苯二酚
展开剂 石油醚 丙酮
四、实 验 过 程
薄层板 的制备
点样
展开
显色、定位
UV灯、显色剂
测定比移值
（Rf 值）
四、实 验 过 程
显色和定位 一般包括：一看、二照、三碘和四显四步。
❖ 一看：指先在自然光下观察 ❖ 二照：指分别在 254 nm 和 365 nm 下观察有无暗斑或荧光斑点 ❖ 三碘：对在自然光和紫外下均无斑点的物质可以用碘蒸汽显色 ❖ 四显：用显色剂显色 ➢ 实际操作中根据需要选择其中的两到三步。
五、 注 意 事 项

薄层色谱法用于药物成分的分析和鉴别， 可分离和鉴定药物中的有效成分和杂质。
食品安全
环境监测
薄层色谱法用于食品中农药残留、添加剂 、毒素等的检测和鉴定，保障食品安全。
薄层色谱法用于环境样品中污染物的分离 和鉴定，如水体、土壤、空气中的有害物 质等。
02
薄层色谱法的实验操作
实验材料准备
薄层板
选择合适规格的薄层板 ，确保其质量可靠且无
定量分析
通过测量斑点的大小或使用紫 外可见光谱等方法，计算待测
物质的质量或浓度。
03
薄层色谱法的优缺点
优点
快速分离
薄层色谱法可以在短时间内完成样品的分离 ，特别适合于大量样品的快速分析。
操作简便
薄层色谱法的操作相对简单，不需要复杂的 设备，容易掌握。
高分离效能
薄层色谱法具有较高的分离效能，可以分离 复杂混合物中的各个组分。
改进方向
提高重现性和定量精度
联用技术
通过改进操作方法和技术手段，提高 薄层色谱法的重现性和定量精度。
将薄层色谱法与其他分析技术联用， 如质谱、光谱等，以提高分析效果和 分离效能。
拓展应用范围
研究和发展适用于大分子和极性物质 分离的薄层色谱技术，谱法的实际应用 案例
绿色环保
采用环保型溶剂和低毒性的分离 材料，降低对环境的负面影响。
感谢您的观看
THANKS
薄层色谱鉴别介绍课件
目录 CONTENT
• 薄层色谱法简介 • 薄层色谱法的实验操作 • 薄层色谱法的优缺点 • 薄层色谱法的实际应用案例 • 薄层色谱法的未来发展与展望
01
薄层色谱法简介
定义与原理
定义
薄层色谱法是一种常用的分离和 分析技术，用于分离和鉴定混合 物中的化合物。

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3、试剂显色法分离后的化合物在紫外光或可见光下不能显示斑点，可根据被检出化合物的理化性质选择适当的显 色剂使之生成颜色或荧光稳定、轮廓清楚、灵敏度 高、专属性强的斑点。这种方法是通过一种或几种试剂与被检物质产生化学反应，生成有色物质，是平面色谱广泛应用的 定位方法。
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喷雾显色法务必在通风柜中进行。自动喷雾器适用于定 量。手动喷雾器用于定量 分析时可能因喷雾不均匀 而产生较大误差。
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三、薄层色谱法的基本操作
薄层板的准备
定性与定量
样品处理
定位
展开
6Leabharlann ( 一) 薄层板 制备薄层板的载板包括有：玻璃板、塑 为制了薄使层薄板 定附相着有在在：： 上化便铝 素素，，、需聚要酰时胺 凝定胶相等中中，， 色的谱粘法 需在固定相中加入某些添加剂。
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薄层色谱
高效液相色谱
色谱系统
开放式
闭路
展开方式
展开
洗脱
流速控制
吸附剂的毛细管作用
由泵调节
平衡时间
短
不定
分析样品
可同时分析多个样品
每次一个样品
样品量
高
低
板高 ( μm)
30
2~5
有效板数
<600
~5000
检测方式
静态
动态
溶剂用量
少
多
溶剂更换
易
难
固定相
一次弃去
反复使用
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(二) 薄层色谱与高效液相色谱的比较
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溶剂分成6类：第Ⅰ类为电子授受体溶剂；第Ⅱ类为质子给予体溶剂；第Ⅲ类为强质子给予体溶剂；第Ⅳ类为质子受体溶剂；第Ⅴ类为偶极作用力溶剂；第Ⅵ类为惰性溶剂 (即非极性溶剂)。

薄层板的制备
注意点 1.沿同一方向研磨混合，避免产生气泡 2.厚度为0.2－0.3mm，涂层薄，点样容易过 载；涂层厚，显色不那么明显 3.室温下在水平位置放置，待薄层发白近干
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薄层板的制备
注意点 5.研磨时间 6.铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容
易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸 发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶 G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶 液=1:2。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也 影响板涂层的厚度，进一步影响上样量 。
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薄层板的制备
❖ 硅胶 1、什么是硅胶 2、硅胶适合酸性和碱性等化合物的分离
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薄层板的制备
3、实验室硅胶有哪些型号
硅胶
硅胶S 硅胶G 硅胶H/硅胶N 硅胶GF245 硅胶HF254
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薄层板的制备
❖ 硅胶G和硅胶S 1.硅胶G是指硅胶粉+15%煅石膏。 2.硅胶S是指硅胶粉+15%淀粉。
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薄层板的制备
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薄层色谱的点样
❖ 点样的距离
自制板
高效板
直径不大于 4mm
宽度5－10mm
>8mm
10－15mm
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直径不大于 2mm
宽度4－8mm
>5mm
8－10mm
薄层色谱的点样
❖ 点样的注意点
1.不要弄破薄层板 2.点样量大时，少量多次， 3.点好样的薄层板用电吹风吹干或 放入干燥器里晾干
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薄层色谱的展开
❖ 展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开 剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为 宜，密封
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薄层色谱的展开
❖ 展开剂配制
1.把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混 合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大 的一层作为展开剂。最好不要把各组成溶液倒

氧化铝呈碱性，适用于碱性和中性物质的分离。
硅胶和氧化铝1：1量掺和使用，得中性吸附剂，或在制板 时加入稀酸或稀碱使其变性，或用酸性或碱性展开剂展开， 以改变硅胶或氧化铝原来的性质。
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（Ⅲ）样品的极性
物质的极性愈大，氧化铝和硅胶吸附愈牢，物质极性大小 如下：
饱和烃 < 不饱和烃 < 醚 < 酯 < 醛 < 酮 < 胺< 羟基化合物 < 酸和碱
性炭因吸附性太强和黑色，使应用受到限制。
（2）分配色谱对载体的要求
（Ⅰ）表面积大
（Ⅱ）在展开剂中不溶，与展开剂和样品组分不起化学反应或 分解作用
（Ⅲ）对样品组分无吸附性或吸附性弱
（Ⅳ）对固定液是惰性的
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常用的有纤维素和硅藻土。
实际工作中，吸附剂、载体等的选择，首先决定于样品成
（c）酸碱薄层板和pH缓冲薄层板：有些化合物在普通板上分 离不好时，可通过改变原来吸附剂的酸碱性，改善分离效果。 如在铺层时用稀酸（一般用1～4%的盐酸或0.1～0.25mol/L草 酸溶液）代替水制成酸性板，使生物碱形成离子对而分离。
（d）混合薄层板：两种不同吸附剂按一定比例混合，制板， 也可分段铺板，前段预处理，以吸附杂质，后段分离。
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（e）径向薄层板：径向板铺法与一般板不同，点样前按下法 处理：
刮去
刮去
用此板展开，可使Rf值相近的化合物得到较好的分离，且 灵敏度高。 （f）梯度薄层板：梯度是指由一种性质到另一种性质的变化。 梯度薄层与常规薄层不同，它显示出具有渐变的分离性能，如

3.2 黏合剂
在吸附剂中加入黏合剂，可使吸附剂牢固吸附在薄层 板上不脱落。黏合剂有以下几种：
机械强度 煅石膏 淀粉 羧甲基纤维素 低 高 高 耐腐蚀性 强 中 差 其他 展开时脱落 不能在I2中源自聚乙烯醇高强
易软化
3.3 展开剂 在选用展开剂时，要考虑到被分离物质的极性、吸
附剂的活性以及展开剂的极性。本着以下原则:
4. 薄层色谱分离法实验方法
4.1 点样
样品质量分数为0.1-1%，浓度太高易引起斑点拖尾；溶度 太低造成斑点扩散。根据色谱板的厚度选择合适的滴加量。
4.2 展开
展开方法：上行法、下行法、近水平法。
若固定相中没有添加粘合剂，采用近水平法，干燥后显色。
4.3 显色
（1）物理显色法 灵敏度高，不破坏斑点的化学组成。 a. 汞弧灯照射，分离物有吸收显示斑点。 b. 荧光显色法，展开后喷射荧光物质，有些组分可以使荧光猝 灭，斑点处变暗。 （2）蒸汽熏法 将固体碘升华为碘蒸气，多数有机物遇碘后显黄色或黄棕色斑。 也可用浓氨水或液溴。 （3）显色剂法 通用显色剂： 50% （体积分数） H2SO4 ，喷洒在薄板上，加热 到110-120℃，有机物被腐蚀，显出斑点。
3.薄层色谱中的吸附剂、粘合剂、展开剂
3.1 吸附剂
（1）氧化铝 氧化铝的吸附活性大于硅胶，因此氧化铝一般用于吸附薄层 层析。铺层时不加粘合剂，直接用干粉铺层。但也可以加 5%20%的煅石膏作粘合剂。 （2）硅胶 硅胶的力学性能差，必须加入粘合剂。硅胶G是由硅胶和5%15%石膏混合而成。硅胶GF254是硅胶中既含有煅石膏，又在254 紫外光照射下呈黄绿色荧光的荧光指示剂。一般选用硅胶的颗粒 为 200-250目，加入适量水，调成糊状，用涂布器涂于玻璃板上 使用。