酒类中氨基甲酸乙酯检测技术

老白酒等几种低度酒中有害物质的研究
崇明老白酒等低度酒是中国传统的发酵酒,其酿造工艺历史悠久,也是人们日常喜爱饮用的酒精饮料。

但是,低度酒中存在一定的有害物质,长期大量摄入会影响健康,尤其是氨基甲酸乙酯(EC),近年来对其关注度越来越高。

本文以崇明老白酒为主,对几种低度酒进行研究,建立有害物质的检测方法,对老白酒进行过程分析。

具体内容如下：(1)能够准确测定EC的含量是控制其含量的前提,实验通过优化萃取条件、色谱条件和质谱条件,建立氨基甲酸乙酯的内标定量测定方法。

分析时间为35min,定量限为5μg/L,能有效检测低度酒中的痕量EC。

(2)根据建立的EC检测方法,分析老白酒酿造储存过程中EC的变化,研究发现,老白酒发酵过程中EC含量低,高温灭菌、贮藏时间和贮藏温度对EC增长影响较大,因此要尽量采用快速灭菌和低温贮藏。

(3)运用HPLC检测方法,优化甲醛检测的衍生条件和色谱条件,快速、有效地检测酒中的痕量甲醛,研究老白酒酿造、加工及储存过程中甲醛的含量变化。

(4)建立同时检测甲醇和杂醇油的气相色谱法,快速测定低度酒中甲醇和杂醇油的含量,该方法直接进样,无需预处理,方便快速。

食品安全国家标准食品中氨基甲酸乙酯的测定1.范围本标准规定了啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯的气相色谱质谱法测定。

本标准适用于啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯的测定。

2.原理试样加D5-氨基甲酸乙酯内标后，经过碱性硅藻土固相萃取柱净化、洗脱，洗脱液浓缩后，用气相色谱质谱仪进行测定，内标法定量。

3.试剂和材料注：除非另有说明，所有试剂均为分析纯。

3.1试剂3.1.1无水硫酸钠。

3.1.2氯化钠。

3.1.3正己烷：色谱纯。

3.1.4乙酸乙酯：色谱纯。

3.1.5乙醚：色谱纯。

3.1.6甲醇：色谱纯。

3.1.7 碱性硅藻土固相萃取柱：4000 mg、12mL。

3.2试剂配制3.2.1无水硫酸钠：450℃烘烤4 h，冷却后贮于干燥器中备用。

3.2.2 5%乙酸乙酯/乙醚溶液:取5 mL乙酸乙酯，用乙醚定容到100 mL，混匀待用。

3.3标准品3.3.1氨基甲酸乙酯标准品（C3H7O2N）：纯度大于99.0％。

3.3.2 D5-氨基甲酸乙酯标准品。

3.4标准溶液配制3.4.1 D5-氨基甲酸乙酯贮备液（1.0 mg/mL）：准确称取0.01g （精确到0.0001 g）D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL，4℃保存。

3.4.2 2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL，4℃保存。

3.4.3 1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.05 g（精确到0.0001 g）氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL, 4℃保存。

3.4.4 10.0 μg/mL氨基甲酸乙酯中间液：准确吸取1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯标准贮备液1.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4℃保存。

3.4.5 0.5 μg/mL氨基甲酸乙酯中间液：准确吸取10.0 μg/mL氨基甲酸乙酯中间液5.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4℃保存。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定白酒中氨基甲酸乙酯和8种甜味剂柯润辉;王丽娟;安红梅;黄新望;尹建军;宋全厚【摘要】建立了超高效液相色谱-串联质谱仪(ultra performance liguid chromatograph-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)同时测定白酒中氨基甲酸乙酯和8种甜味剂(安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜、阿力甜和甜菊糖苷)含量的新方法.样品经超纯水稀释2倍,微孔滤膜过滤后直接进样,用液相色谱-串联质谱(liguid chromatograph-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行定量分析.Waters HSS T3色谱柱为分析柱,甲醇-0.1％乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾电离源正负离子切换多反应监测模式检测.结果表明:氨基甲酸乙酯和8种甜味剂在3～500 μg/L的范围内线性关系良好(相关系数r＞0.998),方法检出限在1 ～3 μg/L,基质加标回收率在89％～106％,相对标准偏差≤9％,完全满足日常检测的要求.该方法前处理简单,测定快速、准确、灵敏度高,非常适合白酒中氨基甲酸乙酯和多种甜味剂的快速筛查和定量分析.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2016(042)004【总页数】5页(P174-178)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱仪;白酒;氨基甲酸乙酯;甜味剂【作者】柯润辉;王丽娟;安红梅;黄新望;尹建军;宋全厚【作者单位】中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015【正文语种】中文氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate，EC)是发酵食品在发酵和贮存过程中天然产生的化学污染物[1]。

葡萄酒中氨基甲酸乙酯检测方法的研究的开题报告一、选题背景葡萄酒是一种非常受欢迎的酒类饮品，其质量和安全性已经成为全球餐饮市场所关注的问题。

其中，氨基甲酸乙酯是一种常见的葡萄酒污染物之一，它可能产生毒性反应，对人体健康造成潜在危害。

因此，如何准确、高效地检测葡萄酒中的氨基甲酸乙酯，已成为重要的研究方向。

二、选题目的本课题旨在通过系统研究葡萄酒中氨基甲酸乙酯的检测方法，为餐饮市场提供一种高效、准确、经济的检测技术，保障葡萄酒的质量与安全。

三、选题意义1、提高葡萄酒的质量和安全性2、为生产企业提供技术支持与指导3、为葡萄酒市场的稳定发展提供保障四、研究内容1、文献综述：对国内外葡萄酒中氨基甲酸乙酯的检测方法进行全面调研和分析。

2、实验设计：选取适合的样品处理和分析方法，确定优化的反应条件和测定参数。

3、分析和验证：对选定的样品进行分析和验证，并对分析结果进行解释和评估。

五、研究方法1、样品制备：对样品进行前处理，包括去除杂质、分离和富集有关目标物等工序，以获得稳定、准确的检测结果。

2、液/气相色谱分析法：利用色谱分离技术进行样品的分离、富集与检测，结合质谱、红外等分析技术进行分子结构的解析和识别。

3、计量学方法：包括建立标准品浓度曲线、贝叶斯分类、人工神经网络等技术，提高检测结果的准确性和可靠性。

六、研究计划1、月份和时间节点第1-2个月：文献调研和综述第3-6个月：实验设计和方案制定第7-12个月：样品分析和鉴定，数据处理和测试结果分析2、预期进展第1-2个月：对国内外葡萄酒中氨基甲酸乙酯检测方法的调研完成，并完成文献综述报告。

第3-6个月：实验设计和样品处理方法优化完成，并建立分析方法。

第7-12个月：对样品进行分析和验证，并对数据进行处理和结果分析，完成论文撰写和答辩准备。

七、参考文献[1] 王志科，葡萄酒中氨基甲酸乙酯的检测与控制技术，食品安全质量检测，2016.[2] 聂明，葡萄酒中有害物质的检测与分析方法，中国食品学报，2018.[3] 王涛，液相色谱-二极管阵列检测氨基甲酸乙酯的研究，食品科学，2019.[4] 李伟，光电化学传感器用于葡萄酒中氨基甲酸乙酯的检测，分析测试技术与仪器，2017.[5] 周怀坤，葡萄酒中氨基甲酸乙酯的检测研究，广东食品与药品监督局，2015.。

稳定同位素稀释-液相色谱-串联质谱法直接测定酒类中氨基甲酸乙酯赵依芃;王宗义;李德美;夏晓楠;姜怀玺;韩涛【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2015(036)008【摘要】建立稳定同位素稀释-液相色谱-串联质谱直接测定酒类中氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)新方法.酒样加入EC-d5内标,微孔滤膜后直接进样,经Waters XSELECT HSS T3 (2.1 mm×150 mm,3.5pm)色谱柱,80％的水(含0.1％乙酸)和20％的乙腈为流动相,0.2 mL/min等度洗脱分离,电喷雾正离子(ESI+)多重反应监测模式质谱检测(EC-d5:m/z 94.9/63、94.9/44; EC:m/z 89.9/62、89.9/44).结果表明,EC的检出限和定量限分别不大于2 ng/mL和5 ng/mL,验证质量浓度(5～500 ng/mL)范围内保持线性,r2=0.999 8.回收率为92.4％～108.5％,相对标准偏差为3.12％～8.65％(n=6).实际应用显示,与冷藏(4℃)相比,葡萄酒置于室温(21～28℃)长期贮藏可导致EC显著升高;烫酒(95℃)可导致蒸馏酒和配制酒EC显著升高.【总页数】5页(P220-224)【作者】赵依芃;王宗义;李德美;夏晓楠;姜怀玺;韩涛【作者单位】北京农学院食品科学与工程学院,食品质量安全北京实验室,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室,北京北农葡萄酒工程技术中心,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,食品质量安全北京实验室,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室,北京北农葡萄酒工程技术中心,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,食品质量安全北京实验室,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室,北京北农葡萄酒工程技术中心,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,食品质量安全北京实验室,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室,北京北农葡萄酒工程技术中心,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,食品质量安全北京实验室,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室,北京北农葡萄酒工程技术中心,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,食品质量安全北京实验室,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室,北京北农葡萄酒工程技术中心,北京 102206【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.稳定同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定r植物油中16种真菌毒素 [J], 吴宇;王松雪;李小明;叶金;张冰;王松山;李丽;黎睿;李森;崔华;谢刚2.稳定同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中24种禁用兽药含量 [J], 周鹏;林钦;黄红霞;杨旺火;戴明;刘飞;王瑛3.稳定同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中氟虫腈及其代谢物 [J], 周鹏;黄芊;欧阳立群;王征;孟鹏;戴明;王瑛4.超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法直接测定黄酒和葡萄酒中氨基甲酸乙酯 [J], 王丽娟;柯润辉;王冰;尹建军;宋全厚5.稳定同位素稀释-液相色谱串联质谱法测定血清中的25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3含量 [J], 刘艳琴;张璇;彭莹莹;刘圆圆;赵少志;张欣文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

固相萃取-高效液相色谱法测定黄酒中氨基甲酸乙酯诸葛庆;李博斌;江涛;寿谦;葛乐勇;曾红艳【摘要】建立一种反相高效液相色谱法测定黄酒中氨基甲酸乙酯的方法。

样品经固相萃取柱净化后衍生，采用反相C18色谱柱XB—Cfsf4．6mm×250mm,5μm），以乙腈-0．02moL／L乙酸纳水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为lmL／min；设定荧光检测器中激发波长为233nm，发射波长为600nm，对黄酒中的氨基甲酸乙酯进行检测。

结果表明，在50．0-250．0μg／L添加量范围内，平均回收率为92．9％，相对标准偏差为4．5％（n=6）。

方法的检出限为10μg／L，线性范围为100～1500μg／L（R=0．9995），测定结果与标准气相色谱一质谱法基本相同。

所建立的方法可以作为黄酒中氨基甲酸乙酯的检测方法。

%A reverse phase HPLC method for the determination of ethyl carbamate in yellow rice wine had been developed. Wine samples were firstly pretreated by solid-phase extraction,ethyl carbamate was separated on a XB- CL8 （4.6mm×250 mm,5 μm） by using gradient elution （acetonitrile and 0.02 moL/L sodium acetate as the mobile phase） at a flow rate of lmL/min and detected by a fluorescence detector （kex=233 nm, hem=600 nm）. At the spike levels of 50.0,100.0 and 250.0μg/L, the average recovery for ethyl carbamate was 92.9% with RSD as 4.5 % （n = 6）, the detection limit was 10 μg/L, and the linear range was from 100-500μg/L（R=0.9995.The determination results by this method were almost the same as those by GCMS. Therefore, this method could be use to determine ethyl carbamate in yellow rice wine.【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)001【总页数】4页(P112-115)【关键词】分析方法;高效液相色谱法;黄酒;氨基甲酸乙酯;固相萃取【作者】诸葛庆;李博斌;江涛;寿谦;葛乐勇;曾红艳【作者单位】国家黄酒产品质量监督检验中心,浙江绍兴312071;国家黄酒产品质量监督检验中心,浙江绍兴312071;国家黄酒产品质量监督检验中心,浙江绍兴312071;国家黄酒产品质量监督检验中心,浙江绍兴312071;国家黄酒产品质量监督检验中心,浙江绍兴312071;国家黄酒产品质量监督检验中心,浙江绍兴312071【正文语种】中文【中图分类】TS262.4;O657.72大多数发酵饮料中存在含量为μg/kg级的氨基甲酸乙酯(简称EC)。

黄酒中氨基甲酸乙酯的分析与控制耿予欢1，吕芬2，黄伟雄2，李国基1（1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）(2.广东省疾病预防控制中心，广东广州 510300）摘要：氨基甲酸乙酯是一种存在于黄酒中的致癌物质。

本文采用气质联用法检测了广东市场上42种黄酒样品中氨基甲酸乙酯含量，28个样品中EC含量超过30 μg/kg，占66.67%，其中7个样品中EC含量超过了100 μg/kg（日本清酒中EC的限量标准），最高的高达1210 μg/kg。

研究了脲酶对黄酒处理的效果，结果发现，一定条件下添加脲酶能够去除酒里的尿素，破坏产生氨基甲酸乙酯的主要途径，从而控制氨基甲酸乙酯含量不再剧增。

并在单因素试验结果的基础上，进行正交实验，得出脲酶最佳的处理条件为酶浓度150 mg/L、处理温度为25 ℃，pH值为3.5，处理时间10 d。

该条件下进行处理，可使酒中氨基甲酸乙酯含量降低45.83%。

关键词：黄酒；氨基甲酸乙酯；脲酶；气质联用法文章篇号：1673-9078(2013)9-2271-2274Analysis and Control of Ethyl Carbamate in Chinese Rice WineGENG Yu-huan1, LV Fen2, HUANG Wei-xiong2, LI Guo-ji1(1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, Chi na)(2.Centers for disease control and prevention of guangdong province, Guangzhou 510300, Chi na.)Abstract: Ethyl carbamate (EC) is one of the carcinogenic substances in rice wine. The content of ethyl carbamate in 42 yellow rice wines from Guangdong market were analyzed by GC/MS in this paper. 28 samples contained EC of more t han 30 μg/kg, being 66.67% of the total sample tested, 7 samples showed high EC content of more than 100 μg/kg (standard for EC content in Japanese sake), with the maximum value of up to 1210 μg/kg. The effect of urease on con tent of EC was studied. It was found that that adding urease into the yellow rice wine can reduce the content of urea and break the main pathway for the production of EC. So the content of EC can be reduced. Based on the single element experiment, the conditions for urease treatment in wine were optimized by orthogonal experiment as follows: urease concentration 150 mg/L, treatment temperature 25 ℃, pH 3.5 and treatment time 10 days. Under these conditions, the content of ethyl carbamate could reduce by 45.83%.Key words: yellow rice wine ; ethyl carbamate; urease; GC/MS早在1943年，Nettleshi证实氨基甲酸乙酯（Ethyl carbamate，EC）是致癌物质，可导致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌等疾病[1]。

_Manager'JournalSeptember 10,2019引言氨基甲酸乙酯（Ethyl carbamate ，EC ）是一种发酵食品（如烈酒、啤酒、面包、酱油和酸奶）中普遍存在的代谢污染物[1]。

1943年，Nettleship 等人首次报道EC 具有致癌作用[2]。

进一步研究表明，高残留的EC 可诱导肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌的发生，而乙醇对EC 的致癌性具有明显的促进作用[3-5]。

近年来，世界各国学者先后在蒸馏酒、黄酒和葡萄酒中检测出EC 。

其中，蒸馏酒和黄酒中的EC 含量较高，葡萄酒中EC 含量较低。

基于以上发现，世界卫生组织建议制定酒类饮料中EC 的限量标准。

其中，美国、法国、英国及日本等国家规定了含酒精的饮料中EC 限量标准，而我国目前还没有相关限量标准。

四川省是中国的产酒大省，素有川酒三分天下之美誉。

四川省的白酒主要有浓香型和酱香型两种类型，而浓香型白酒生产厂家占据比例较大。

浓香型固态白酒一般采用传统的酿造方法进行酿造，通过泥窖固态发酵，续糟配料，混蒸混烧，量质摘酒，原酒贮存及勾兑等工艺即可获得浓香型固态白酒。

本文测定了160份不同厂家生产的四川浓香型原酒中EC 含量，进一步分析不同原酒中EC 含量分布，探讨了浓香型原酒生产过程EC 可能生成的机制并提出了减控氨基甲酸乙酯的主要策略。

料材与方法材料与试剂160份浓香型原酒取自四川宜宾、泸州、成都和德阳等地大中型原酒生产企业生产的原酒（贮存期约半年）。

碱性硅藻土固相萃取柱（填料4000mg,柱容量12mL ）购自天津博纳艾杰尔科技有限公司。

D5-氨基甲酸乙酯购自上海安谱实验科技股份有限公司。

其他化学试剂如氨基甲酸乙酯、无水硫酸钠、氯化钠、正己烷、乙酸乙酯、乙醚及甲醇等购自上海麦克林生化科技有限公司。

仪器与设备GC-MS （7890B ，5977A ，带电子轰击源）为美国Aglient 公司产品；电子天平为德国RADWAG 公司生产；漩涡混合器为美国ThermoFisher 公司产品；氮吹仪及固相萃取装置为天津奥特赛恩斯仪器有限公司产品。

GC-MS法测定白酒中氨基甲酸乙酯周韵;寸宇智;李长寿;李颖;杨卫花【期刊名称】《云南化工》【年(卷),期】2018(045)008【摘要】改进检测白酒中氨基甲酸乙酯含量的气相色谱-质谱法(GC-MS).样品经二氯甲烷提取,用旋转蒸发仪浓缩至近干,乙腈溶解,正已烷去除杂质,然后用气相色谱-质谱联用法检测.氨基甲酸乙酯标准浓度在0.1～1 mg/L范围内,线性关系良好,相关系数r达0.999.添加浓度为0.01～0.1 mg/kg时,回收率为77.7％～95.2％,相对标准偏差(RSD)在4.0％～6.3％之间,定量检出限低于0.01 mg/kg.改良后的GC-MS法操作简单快速、经济节约、灵敏度高.【总页数】3页(P68-70)【作者】周韵;寸宇智;李长寿;李颖;杨卫花【作者单位】大理大学农学与生物科学学院,云南大理 671003;大理大学农学与生物科学学院,云南大理 671003;大理州质量技术监督综合检测中心,云南大理671000;大理州质量技术监督综合检测中心,云南大理 671000;大理州质量技术监督综合检测中心,云南大理 671000【正文语种】中文【中图分类】TS261.7【相关文献】1.气相色谱与质谱法(GC-MS)测定白酒中的氨基甲酸乙酯 [J], 谭文渊;袁东;付大友;何婵娟;黄凤2.旋转蒸发结合GC-MS/MS测定白酒中氨基甲酸乙酯 [J], 冯向东;蔡开云;周丹3.SPE结合GC-MS法测定白酒中的氨基甲酸乙酯 [J], 李安军;刘国英;汤有宏;张严;高江婧;姜利;张培龙4.基于GC-MS测定白酒中氨基甲酸乙酯的探讨 [J], 刘楚楚;陈二芳;刘倩倩5.GC-MS检测白酒中氨基甲酸乙酯方法的优化 [J], 刘艳;周玉;刘莎;唐艳荣;陆瑶;孙莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。