实验样品采集运输保存方法

  • 格式:docx
  • 大小:20.42 KB
  • 文档页数:6

下载文档原格式

  / 6
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

1. RNA实验样品采集、保存方法

1.1 使用范围及样品量

类别:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Array& PCR Service

样本量:

样本样本量

动物组织样品50-100mg

哺乳动物培养细胞样品(悬浮细胞)1*107个

哺乳动物培养细胞样品(贴壁细胞)15cm2

植物组织样品100mg-1g,根据植物不同部位的组织决定组

织需要量,尽可能多些,但不必超过1g

1.2 动物组织样品

1.2.1 新鲜组织样品

A. 使用RNAlater试剂

取新鲜组织(注:动物死亡后尽快在10min内取材),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,所用组织必须切至厚度在0.5cm一下,然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管(或冻存管)中。

4度孵育过夜,此时样品管需要横臵以便组织块充分接触到RNAlater,然后转入-20中保存,样品在-20不会冻结,但溶液中可能会有一些晶体出现,这并不影响后续的RNA抽提。

B. 使用Trizol试剂

取新鲜组织(1min以内),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,最好冰上进行操作。

匀浆的裂解液4度短期保存(1month),-20或者-70度长期保存。

1.2.2 冻存组织

生物体死亡后尽快(10min以内)切取新鲜组织,并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块;培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞,弃去上清液。

细胞沉淀(1*107个)中加入1ml Trizol裂解液

反复吸打几次后,目视可见细胞层溶液完全

-70保存

1.3 贴壁细胞

从培养容器中吸出并弃去培养液

培养瓶直接加入Trizol试剂,Trizol用量与细胞贴壁面积有关,15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。

反复吸打几次后,目视可见细胞层溶解完全。

-70度保存。

1.4 植物组织样品

准确取得所需新鲜组织后,如有必要可用PBS清洗干净,将所用组织切碎,装入冻存管中或者用锡箔包裹好。

立即投入液氮中保存。

2.血液类样品采集、保存方法

2.1 适用范围及样品量

全血/血细胞:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Array& PCR Service

血清/血浆:Microarray Service;PCR Array& PCR Service

样本量

样本样本量

全血1-2ml (即每份样品2-4管)

血浆1-2ml (即每份样品2-4管)

血清1-2ml (即每份样品2-4管)

在样品保存及转移过程中,应避免反复冻融样品

一般建议用新鲜的血液标本进行试验,如果标本已经保存较长时间,请先联系技术部门确认样本是否适合进行实验。

2.2 全血

采集好全血,转移至单独的冻存管中,按照每400-500ul/管分装。

短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。

2.3 血浆

使用抗凝管采集全血,并尽快进行血浆分离:1000g 离心10min,分离血浆和细胞组分(抗凝剂一定不能是肝素)

将采集好的血浆转移至单独的冻存管中,按照每400-500ul/管分装。

短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。

2.4 血清

使用凝血管采集全血,采血后两小时内分离血清;

采血后轻轻倒转采血管混合4-5次,直立臵于室温待血液完全凝固,1000g离心10min,分离血清。

将采集好的血清转移至单独的冻存管,按照每400-500ul/管分装。

短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。

2.5从全血中提取白细胞

2.5.1 抗凝血收集

取无菌的15ml离心管一只,首先用EDTA或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁,使离心管壁完全接触到该溶液,而后在管底留下少许该溶液(200ul左右)收集5ml全血后迅速用枪混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分血液凝固。

2.5.2 全血白细胞分离(以3ml抗凝血为例说明)

向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血,而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖,温柔的颠倒混匀数下,不要剧烈震荡

将离心管臵于室温放臵10min

将离心管以2500g 离心5min

弃上清,尽可能将上清吸净,勿吸到管底白色斑块细胞

弃去上清后在管底出现可见的白色斑块,此斑块为富集的白细胞。如果裂解不完全加入1mlPBS缓冲液重悬,然后重复第一步

充分裂解后,加入1mlPBS缓冲液清洗一次2500g离心5min

弃上清,可获得血液样品中全部白细胞的80%以上,而后可加入适量的Trizol,用移液枪充分吹打,混匀,直至出现清亮不粘稠的液体。

而后可以将以上的Trizol试剂存在生物冰(0-4度)寄送,或者直接干冰寄送。

3.DNA实验样品采集、保存方法

3.1 适用范围及样品量

适用范围:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Service

样品量

样本样本量

细胞1*107个

组织50-100mg

3.2 悬浮细胞

约1*107个细胞,低速离心收集,弃去培养液;

加入2-5ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中;

低速离心沉淀细胞,弃去PBS;

放入-70度冰箱保存。

对于ChIP-chip实验为了获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品取107个悬浮细胞低速离心,用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中;

加入270ul 37%的甲醛,轻轻混匀,室温孵育10min;该步骤最好在通风橱完成

加入1ml 1.25M的甘氨酸,轻轻混匀,室温孵育5min,中和甲醛;

2000g离心5min,弃上清,用预冷的PBS/EDTA 洗细胞两遍

2000g 离心5min,弃上清;

收集到的样品-80度冻存。

3.3 贴壁细胞

约1*107个贴壁细胞,胰酶消化;

加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去液体;

加入2-5 ml PBS 悬浮细胞,转入小离心管中;

低速离心沉淀细胞,弃去PBS

放入-70度冰箱保存。

对于ChIP-chip实验为了获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存贴壁细胞样品3.4组织

采集新鲜组织(生物体死亡后10min内取材并保存好)

组织块以PBS或生理盐水清洗干净,切为小块

放入液氮或-70度冰箱保存

4.蛋白实验样品采集、保存方法