急性肾功能衰竭动物模型的复制

桃仁承气汤对急性肾功能衰竭大鼠肾功能及电解质的影响朱虹;王灿晖;杨进;张庆宏【期刊名称】《中国中医药科技》【年(卷),期】2006(013)006【摘要】动物：普通级（CL）SD大鼠71只，雌雄各半，体重（221．49±18．345）g，由南京中医药大学动物实验中心提供。

药物及试剂：桃仁承气汤，参照《温病条辨》原方剂量，即大黄18g、芒硝8g（冲服）、桃仁10g、当归10卧赤芍10g、丹皮10g。

攻下组参照《温病条辨》及前人用药经验，即大黄18g、芒硝12g（冲服）。

活血化瘀组参照《温病条辨》剂量，即桃仁10g、赤芍10g、丹皮10g。

以上药材均由南京巾医药大学国医堂提供。

各纽药物水提浓缩成含生药1g/ml口服液．置于250ml盐水瓶中，4℃保存备用。

速尿由常州康普药业有限公司生产，批号：0410028。

【总页数】1页(P415)【作者】朱虹;王灿晖;杨进;张庆宏【作者单位】南京中医药大学,南京,210029;南京中医药大学,南京,210029;南京中医药大学,南京,210029;南京中医药大学,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.桃仁承气汤对大鼠急性肾功能衰竭模型血液流变性及肾指数的影响 [J], 朱虹;王灿晖;杨进;张庆宏2.血液透析的不同模式治疗急性肾功能衰竭患者的有效性及对肾功能、电解质的影响 [J], 林正均;罗昭强;金仙勇3.不同血液透析模式对急性肾功能衰竭患者电解质、肾功能指标的影响 [J], 黄勇进;4.血液透析的不同模式治疗急性肾功能衰竭患者的有效性及对肾功能、电解质的影响 [J], 王欣5.连续性肾脏替代治疗急性肾功能衰竭疗效及对T淋巴细胞炎症因子和血清电解质水平的影响 [J], 韩瑞萍;袁光新;陈慰;苏清;朱梦莉;王智超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

慢性心衰动物模型的制备及指标评定慢性心衰是一种心血管疾病，其主要特征是心脏功能逐渐衰竭。

为了深入研究慢性心衰的发生机制及治疗方法，科学家们广泛应用动物模型进行实验研究。

下面将介绍慢性心衰动物模型的制备方法以及常用的指标评定方法。

一、慢性心衰动物模型的制备方法：1.高盐饮食法：将小鼠或大鼠的日常饮食中的盐分含量提高，例如增加食盐的含量。

高盐饮食会引起血压升高，从而导致心脏负荷增加，进而发生心衰。

2.高胆固醇饮食法：给小鼠或大鼠注射或灌胃高胆固醇的食物，例如高脂食品。

高胆固醇饮食会引起血液中胆固醇水平升高，导致动脉粥样硬化，心脏供血不足，最终发生心衰。

3.慢性心肌梗塞法：在小鼠或大鼠的冠状动脉中注射致命的微球或通过手术结扎冠状动脉，造成心肌梗塞，进而诱发心衰。

4.肾脏疾病法：通过手术切除小鼠或大鼠的一个或两个肾脏，或者给予肾脏毒素如丙酮酸来诱发肾脏疾病，进而导致心衰的发生。

二、慢性心衰动物模型的指标评定方法：1.心脏形态学指标：通过心脏组织切片染色法，观察心脏组织的肥大程度和纤维化情况。

常用的染色方法有hematoxylin-eosin (HE)染色和Masson's trichrome 染色，通过显微镜观察心脏细胞形态、胶原纤维沉积情况等。

2.心脏生理学指标：使用心电图（ECG）记录动物的心电活动，评估心脏的电生理状态。

常用的心电图参数包括心率、QRS波群、QT间期等。

超声心动图是另一种评估心脏功能的重要工具，可以测量心腔内径、心肌收缩力等参数，来评估心脏的收缩和舒张功能。

3.血液学指标：采集动物的血液样本，常见的指标包括血红蛋白浓度、红细胞计数、白细胞计数、血小板计数等。

这些指标可以反映动物的贫血情况、炎症反应以及凝血功能等情况。

4.生物化学指标：测定动物血液中的心肌损伤标志物，如肌钙蛋白、心钙蛋白等。

这些标志物在心肌损伤时释放到血液中，可以反映心肌细胞的损伤程度。

5.心脏基因表达：通过转录组学方法，分析心脏细胞内基因的表达变化。

２０２０年１２月第２８卷㊀第６期中国实验动物学报ＡＣＴＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭＡＮＩＭＡＬＩＳＳＣＩＥＮＴＩＡＳＩＮＩＣＡＤｅｃｅｍｂｅｒ２０２０Ｖｏｌ.２８㊀Ｎｏ.６庄子锐ꎬ王明亮ꎬ张婷ꎬ等.肝肾纤维化动物模型的研究进展及评价[Ｊ].中国实验动物学报ꎬ２０２０ꎬ２８(６):８４５－８５２.ＺｈｕａｎｇＺＲꎬＷａｎｇＭＬꎬＺｈａｎｇＴꎬｅｔａｌ.Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｈｅｐａｔｏｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＡｃｔａＬａｂＡｎｉｍＳｃｉＳｉｎꎬ２０２０ꎬ２８(６):８４５－８５２.Ｄｏｉ:１０ ３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００５－４８４７ ２０２０ ０６ ０１６[基金项目]国家自然科学基金资助项目(８１７７４１７８ꎬ８１３７３８８８)ꎬ江苏省研究生实践创新计划资助项目(ＳＪＣＸ２０＿０５７２)ꎮＦｕｎｄｅｄｂｙＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ(８１７７４１７８ꎬ８１３７３８８８)ꎬＰｒａｃｔｉｃｅａｎｄＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＰｒｏｇｒａｍｏｆＰｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅｓｉｎＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ(ＳＪＣＸ２０＿０５７２).[作者简介]庄子锐(１９９５ )ꎬ女ꎬ在读研究生ꎬ研究方向:中药药理学研究ꎮＥｍａｉｌ:５４２０６５１８６＠ｑｑ.ｃｏｍ[通信作者]彭蕴茹ꎬ女ꎬ研究员ꎬ硕士研究生导师ꎬ研究方向:中药药理学ꎮＥｍａｉｌ:ｐｅｎｇｙｕｎｒｕ＠１２６.ｃｏｍꎻ沈明勤ꎬ研究员ꎬ硕士研究生导师ꎬ研究方向:中药药理学ꎮＥｍａｉｌ:ｍｑｓｈｅｎ＠１６３.ｃｏｍꎮ∗共同通信作者肝肾纤维化动物模型的研究进展及评价庄子锐１ꎬ２ꎬ王明亮１ꎬ２ꎬ张婷１ꎬ２ꎬ苏鹏亮１ꎬ２ꎬ邵久针１ꎬ２ꎬ印鑫１ꎬ２ꎬ彭蕴茹１ꎬ２∗ꎬ沈明勤１ꎬ２∗(１.南京中医药大学ꎬ南京㊀２１００２８ꎻ２.江苏省中西医结合医院ꎬ南京㊀２１００２８)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀肝㊁肾纤维化是由持续的肝㊁肾组织细胞损伤导致细胞外基质(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘꎬＥＣＭ)过度沉积㊁实质细胞减少的病理过程ꎬ肝肾纤维化是慢性肝肾疾病持续进展的必经过程ꎮ除了器官移植ꎬ早期纤维化阶段现在被认为是治疗整个慢性疾病的关键阶段ꎮ目前有很多肝纤维化或肾纤维化的啮齿动物模型以及少量肝肾纤维化的复合模型可供疾病研究和药物筛选ꎮ本文对常用的肝㊁肾纤维化及其复合模型的造模方法与机制进行综述ꎬ并比较不同方法间的优势与不足ꎬ为日后不断建立和完善更加贴合临床的肝肾纤维化复合动物模型提供参考ꎮʌ关键词ɔ㊀肝纤维化ꎻ肾纤维化ꎻ肝肾纤维化复合模型ʌ中图分类号ɔＱ９５－３３㊀㊀ʌ文献标识码ɔＡ㊀㊀ʌ文章编号ɔ１００５￣４８４７(２０２０)０６￣０８４５￣０８ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｈｅｐａｔｏｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓＺＨＵＡＮＧＺｉｒｕｉ１ꎬ２ꎬＷＡＮＧＭｉｎｇｌｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＺＨＡＮＧＴｉｎｇ１ꎬ２ꎬＳＵＰｅｎｇｌｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＳＨＡＯＪｉｕｚｈｅｎ１ꎬ２ꎬＹＩＮＸｉｎ１ꎬ２ꎬＰＥＮＧＹｕｎｒｕ１ꎬ２∗ꎬＳＨＥＮＭｉｎｇｑｉｎ１ꎬ２∗(１.ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｊｉｎｇ２１００２８ꎬＣｈｉｎａ.２.ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｊｉｎｇ２１００２８)Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ:ＰＥＮＧＹｕｎｒｕ.Ｅ￣ｍａｉｌ:ｐｅｎｇｙｕｎｒｕ＠１２６.ｃｏｍꎻＳＨＥＮＭｉｎｇｑｉｎ.Ｅ￣ｍａｉｌ:ｍｑｓｈｅｎ＠１６３.ｃｏｍʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｆｉｂｒｏｓｉｓｏｆｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｓｉｓａｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｗｈｉｃｈｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ(ＥＣＭ)ｉｓｏｖｅｒｄｅｐｏｓｉｔｅｄａｎｄｐａｒｅｎｃｈｙｍａｃｅｌｌｓａｒｅｒｅｄｕｃｅｄｂｙｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｄａｍａｇｅｔｏｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｃｅｌｌｓ.Ｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｓａｎｉｎｅｖｉｔａｂｌｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅｓ.Ｅｘｃｅｐｔｆｏｒｏｒｇａｎｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎬｔｈｅｅａｒｌｙｓｔａｇｅｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓｉｓｎｏｗｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｈｅｋｅｙｐａｒｔｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｃｈｒｏｎｉｃｄｉｓｅａｓｅ.Ｔｈｅｒｅａｒｅｃｕｒｒｅｎｔｌｙｍａｎｙｒｏｄｅｎｔｍｏｄｅｌｓｏｆｌｉｖｅｒｏｒｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎬｂｕｔｏｎｌｙａｆｅｗｍｏｄｅｌｓｗｉｔｈｃｏｍｂｉｎｅｄｌｉｖｅｒａｎｄｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓａｒｅａｖａｉｌａｂｌｅｆｏｒｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇ.Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｍｏｄｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｃｏｍｍｏｎｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎬａｎｄｃｏｍｐｏｓｉｔｅｍｏｄｅｌｓ.Ｗｅａｌｓｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｍｅｒｉｔｓａｎｄｄｅｍｅｒｉｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｆｕｔｕｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｍｏｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｌｙｒｅｌｅｖａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓ.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓꎻｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎻｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓｍｏｄｅｌＣｏｎｆｌｉｃｔｓｏｆＩｎｔｅｒｅｓｔ:Ｔｈｅａｕｔｈｏｒｓｄｅｃｌａｒｅｎｏｃｏｎｆｌｉｃｔｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔ.㊀㊀纤维化可发于多器官ꎬ其实质是慢性损伤长时间超出实质细胞修复能力ꎬ导致器官结构破坏㊁功能减退ꎬ最终脏器硬化和衰竭ꎬ目前有效疗法只有疾病晚期器官移植[１]ꎮ而肝㊁肾作为人体的两大免疫和代谢器官ꎬ更加容易遭受各种原因的损伤ꎬ使得肝肾处于慢性损伤的状态ꎮ在亚太地区ꎬ每年经由纤维化发展的肝硬化㊁肾硬化及其并发症成为亚太地区的主要死亡原因之一ꎮ因此ꎬ慢性肝病和慢性肾病一直都是研究的热点ꎬ对慢性肝病和慢性肾病的部分机制㊁药物筛选也有详尽的研究和说明ꎬ但在实际临床中以及在肝㊁肾纤维化实验模型的建立过程中ꎬ肝肾总是在功能和血液动力学方面体现紧密联系ꎮ除此之外ꎬ由于一些传统中药的肝肾同治功效需要适宜的动物模型来用进行现代科学研究与阐释ꎮ因此ꎬ近年来逐渐有人尝试建立一种肝肾纤维化的新复合模型以适应当代需求ꎮ作为慢性疾病的早期阶段ꎬ早期纤维化阶段被普遍认为具有可逆性ꎬ并非不可逆的 疤痕组织 [２]ꎮ因此ꎬ阻断早期肝肾纤维化进程可以成为治疗慢性肝肾疾病新的切入点ꎬ使慢性肝肾病在早期阶段就有治愈的可能性ꎮ目前针对肝肾纤维化有效的药物非常有限ꎬ因此ꎬ能成功建立更加贴近临床的疾病模型ꎬ成为突破阻断纤维化㊁逆转肝肾硬化的关键点之一ꎮ本文总结了肝纤维化㊁肾纤维化和肝肾纤维化复合模型常用的建立方法ꎬ初步探讨了模型机制㊁对比了不同方法间的优缺点ꎬ旨在为建立更贴近人类临床肝肾纤维化的模型提供参考(见图１)ꎮ１㊀肝纤维化模型１ １㊀化学试剂法多采用四氯化碳㊁硫代乙酰胺㊁Ｎ￣亚硝基化合物等ꎮ四氯化碳模型主要以脂肪变性为主ꎬ适合于一般肝纤维化的机制和药物研究ꎻ硫代乙酰胺在体内与肝细胞化学反应致其坏死ꎬ此模型更适合于肝硬化初期阶段的研究ꎻＮ￣亚硝基化合物在机体内更依赖于氧化应激反应造成损伤ꎮ１ １ １㊀四氯化碳(ｃａｒｂｏｎｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅꎬＣＣｌ４)四氯化碳(ＣＣｌ４)为无色有毒的挥发性液体ꎬ具有令人愉快的气味ꎬ使用过程中实验人员应注意防止吸入ＣＣｌ４ꎮ因其诱导肝纤维化模型的高复制性㊁与人类纤维化病理变化的高相似性成为目前应用最为广泛的化学药物ꎮＣＣｌ４诱导肝纤维化的分子机制现在还尚不完全清楚ꎬ但Ｄｏｎｇ等[３]联合利用转录㊁蛋白质组学分析和生物网络技术ꎬ证实ＣＣｌ４毒性主要涉及氧化还原㊁氧化应激反应ꎬ途径主要包括视黄醇代谢㊁花生四烯酸代谢等ꎮ注:损伤反应可使肝㊁肾分泌炎症因子ꎬ活化肝星状细胞㊁促进肾上皮－间质转化ꎬ相反肝星状细胞的活化和上皮－间质的转化又可促进炎症因子的分泌ꎬ使损伤持续进行ꎬ从而导致细胞外基质过度沉积ꎬ脏器纤维化产生ꎮ图１㊀肝肾纤维化的形成Ｎｏｔｅ.Ｔｈｅｉｎｊｕｒｙｒｅａｃｔｉｏｎｃａｎｍａｋｅｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｓｅｃｒｅｔｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓꎬａｃｔｉｖａｔｅｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｒｅｎａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ.Ｏｎｔｈｅｃｏｎｔｒａｒｙꎬａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓꎬｓｏｔｈａｔｔｈｅｉｎｊｕｒｙｃｏｎｔｉｎｕｅｓꎬｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎｅｘｃｅｓｓｉｖｅｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘａｎｄｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓ.Ｆｉｇｕｒｅ１㊀ＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓＣＣｌ４通常与玉米油㊁花生油㊁橄榄油等按比例混合ꎬ通过灌胃㊁腹腔注射㊁吸入㊁皮下注射等方式给药ꎮ腹腔注射会造成更高的死亡率ꎬ但因建模快㊁稳定性好㊁成功率高得到更广泛的应用ꎮ一般根据不同实验动物品系ꎬ使用不同剂量ＣＣｌ４均可在６~８周表现出炎症因子浸润㊁肝脂肪变性和坏死的明显的纤维化阶段特征ꎮ雌性啮齿类动物对ＣＣｌ４表现出耐受难成模倾向ꎬ所以多数选取雄性大鼠进行造模ꎮ此模型具有缓慢形成肝纤维化的变化过程ꎬ形态学㊁病理学及血清生化指标的明显变化都具有类似人类肝纤维化的典型特征ꎬ适用于肝纤维化形成的动态研究和药物筛选ꎮ１ １ ２㊀硫代乙酰胺(ｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅꎬＴＡＡ)硫代乙酰胺是无色或白色结晶ꎬ１９４８年被报导具有肝毒性[４]ꎬ２０１７年ＷＨＯ将其纳入２Ｂ类致癌物ꎮＴＡＡ在体内和体外均可被ＣＹＰ２Ｅ１酶激活ꎬ代谢为不稳定的反应物ＴＡＳＯ２与肝大分子共价结合而引发坏死ꎮＢａｓｈａｎｄｙ等[５]人用ＴＡＡ诱导肝纤维化时ꎬ肾同时表现出肾小球缩小㊁肾小管上皮变性㊁间质淋巴细胞浸润等损伤ꎮＴＡＡ可用蒸馏水或生理盐水配制ꎬ通过饮用水㊁腹腔注射等途径给药ꎻ饮用水给药可建立比较温和的肝纤维化模型ꎬ但饮用水给药会因为个体摄入差异造成剂量偏差ꎬ因此常采用腹腔注射ꎬ剂量范围１５０~２５０ｍＬ/ｋｇꎬ最常用剂量２００ｍｇ/ｋｇꎬ大概４~６周即可成功建立肝纤维化模型[５－８]ꎮＴＡＡ相比ＣＣｌ４表现出更强肝毒性ꎬ造模过程中更高的死亡率要求实验人员扩大啮齿类动物数量ꎬ而集中在中央门静脉的病变㊁与人类肝纤维化血流动力学和代谢改变的相似性使其更适合肝纤维化向肝硬化发展的阶段研究ꎮ１ １ ３㊀Ｎ￣亚硝基化合物二甲基亚硝胺/二乙基亚硝胺(ｄｉｍｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ/ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅꎬＤＭＮ/ＤＥＮ)均属Ｎ￣亚硝基化合物ꎬ在２０世纪３０年代先后报道具有强致癌性与肝毒性ꎮＮ￣亚硝基化合物在各器官主要依靠细胞色素Ｐ４５０代谢激活ꎬ转变为更具活性的代谢产物ꎬ导致烷基化ＤＮＡ和活性氧产生ꎬ从而对器官产生氧化损伤[９－１０]ꎮ虽然Ｎ￣亚硝基化合物的主要损伤靶向器官除肝外还有肾ꎬ但其对肾的损伤研究较为缺乏ꎬ研究主要集中于肝毒性ꎮ以肝萎缩㊁脾肿大㊁血小板减少和血清总胆红素水平显著升高为典型特征的Ｎ￣亚硝基化合物模型是研究肝纤维化和肝硬化发展相关的生化㊁病理生理以及分子改变的优秀动物模型ꎮＤａｐｉｔｏ等[１１]认为将ＤＥＮ与ＣＣｌ４合用ꎬ会促使肠道产生更多内毒素ꎬ可更好的模拟人类肝癌的微环境ꎮＤｉｎｇ等[１２]利用ＳＤ大鼠建立了完整的肝炎－肝纤维化－肝癌模型轴ꎬ为不同阶段疾病模型的准确建立提供了参考ꎬ此研究显示每周两次注射ＤＥＮ(３０ｍｇ/ｋｇ)ꎬ８~１２周肝即处在明显肝纤维化阶段ꎮ１ ２㊀手术法肝纤维化手术法是通过手术将胆管暴露并结扎ꎬ直接人为造成胆汁淤积ꎬ是一种以胆管增生为病变特点的胆汁淤积型肝纤维化模型ꎮ胆管结扎可通过手术在动物体内结扎胆总管ꎬ也可在体外对细胞使用抑制剂ꎬ造成胆汁阻塞性病变ꎮ胆管结扎一定程度上可较好的模拟人类因长期胆汁淤积而引起的肝细胞增殖和凋亡㊁门静脉纤维化及肝硬化过程ꎬ以及伴有常见的胆汁性急性肾损伤并发症[１３－１４]ꎮ但手术结扎会阻断所有的胆汁流通ꎬ因此ꎬ无法更完全复制人类临床具有一定胆汁通量的原发性硬化性胆管炎和原发性胆源性胆管炎的病理过程ꎮＧｈａｌｌａｂ等[１５]利用荧光胆汁盐和非胆汁盐有机阴离子的双光子成像技术对胆管结扎的病理机制进行研究ꎬ结扎胆总管后ꎬ肝内和胆内胆汁酸水平急剧升高损伤细胞ꎮ氧化应激和炎症反应在胆管结扎损伤肝中起重要作用[１６]ꎮＹａｎｇ等[１７]用ＳＤ大鼠结扎总胆管不同位置进行研究发现ꎬ胆总管上端结扎比胆总管中部结扎可用更小的死亡率诱导更严重的胆汁淤积性肝纤维化ꎮ胆管结扎建模周期大概在２~４周ꎬ在７ｄ左右开始看见病理变化ꎬ结扎时间不宜过长ꎬ否则啮齿类动物死亡率会大幅度升高以致数据缺失ꎻ手术法在所有方法中建模最快ꎬ但其病变也近似于急性损伤的变化ꎬ而纤维化是一种慢性疾病的过程ꎬ因此胆管结扎可能对于慢性疾病模型来说不够典型ꎮ１ ３㊀免疫诱导法免疫反应本是机体免疫系统对抗外侵的正常反应ꎬ但大量免疫细胞和蛋白的堆积又会损伤正常组织细胞ꎮ免疫诱导法正是利用此原理在啮齿类动物体内模拟人类的免疫性纤维化病变ꎬ因此ꎬ免疫诱导应用的前提是作为模型的动物源要具有正常免疫系统ꎮ１ ３ １㊀刀豆蛋白(ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡꎬＣｏｎＡ)刀豆蛋白是从植物中提取的凝集素ꎬ具有强烈的促有丝分裂和促淋巴转化反应作用ꎬ是重要的生化和免疫研究试剂ꎮＣｏｎＡ诱导的免疫性肝炎模型可用于人类免疫性肝炎㊁急性病毒性肝炎等疾病或药物筛选的研究ꎮＣｏｎＡ的肝毒性依赖于激活体内Ｔ淋巴细胞和巨噬细胞ꎬ和内皮细胞表面糖蛋白结合ꎬ激活自身免疫系统分泌ＴＮＦ￣α㊁ＩＦＮ￣γ㊁ＴＧＦ￣β１等炎症因子ꎬ从而损伤肝细胞ꎮ因此ꎬ造模时不能选用免疫缺陷无Ｔ细胞应答的啮齿类动物[１８－１９]ꎮ本方法建模采用小鼠居多ꎬ造模周期约４~８周ꎮ造模时ＣｏｎＡ可用生理盐水或ＰＢＳ配制ꎬ通过尾静脉或腹腔注射给药ꎬ关于剂量Ｈｅｙｍａｎｎ等[２０]建议具有更多Ｔｈ１亚系的Ｔ细胞免疫反应的啮齿类动物ꎬ例如Ｃ５７ＢＬ/６㊁Ｃ３Ｈ小鼠对刀豆蛋白更加敏感ꎬ只需要１５~２０ｍｇ/ｋｇ体重ꎻ而具有更多Ｔｈ２亚系的免疫应答啮齿类动物ꎬ例如ＢＡＬＢ/ｃ品系的近交或杂交ＮＭＲＩ小鼠对刀豆蛋白不敏感则至少需要３０ｍｇ/ｋｇ体重的量ꎮ１ ３ ２㊀猪/牛血清蛋白血清蛋白是凭借引起自身过激免疫反应产生全身性的损伤ꎬ因此本模型更适合于免疫性纤维化病理学研究ꎬ但本模型存在自愈的问题ꎮ其所致免疫性肝纤维化模型是研究细胞水平上纤维化隔膜形成的模型ꎬ以及肝纤维化后的结构变化ꎬ例如毛细血管化和静脉化ꎻ但目前未见血清蛋白诱导肝肾纤维化复合模型的诱导研究ꎮ猪/牛血清蛋白无法在免疫缺陷或免疫耐受啮齿类动物中诱导肝纤维化ꎬ因其免疫性损伤依赖于一定周期的激活巨噬细胞㊁Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞ꎬ释放炎症因子ꎬ进而激活星状细胞和成纤维细胞纤维化[２１]ꎮ用猪血清蛋白诱导的免疫性纤维化程度与血清蛋白剂量并无依赖关系ꎬ只会随时间不同呈现不同病理变化[２２]ꎮＹｏｕ等[２３]用牛血清蛋白(ＢＳＡ)致ＳＤ大鼠肝小叶结构严重受损ꎬ炎性细胞浸润ꎬ广泛的纤维组织增生ꎬ纤维组织通过中央小叶增生并扩展为肝实质ꎮ２㊀肾纤维化模型２ １㊀化学试剂法重金属化合物㊁腺嘌呤和手术法在国内建立慢性肾病模型的应用属最为广泛ꎮ建立肾纤维化模型的几种化学物质相较肝纤维化模型的几种物质ꎬ明显缺少对肾损伤的高度靶向性ꎬ且研究多集中于肾的急性损伤研究ꎮ２ １ １㊀氯化汞(ｍｅｒｃｕｒｙｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅꎬＨｇＣｌ２)重金属汞是主要以金属汞㊁无机汞㊁有机汞三种形式普遍存在于自然环境中的污染物ꎬ对环境和人体有极大的伤害ꎮ肾是受无机汞毒性影响的主要器官之一ꎬ因为无机汞更容易在肾中累计ꎬ使肾成为受伤最严重的器官ꎮＺａｌｕｐｓ[２４]发现ＨｇＣｌ２静脉注射０ ５μｍｏｌ/ｋｇ或２ ０μｍｏｌ/ｋｇ后３ｈꎬ超过总剂量５５％的Ｈｇ２＋都集中在肾近段小管上皮细胞中ꎮＨｇＣｌ２可诱导Ｔ细胞死亡和破坏细胞中线粒体膜ꎬ当线粒体电子传输链功能受损会产生过量活性氧自由基(ＲＯＳ)ꎬ氧化应激反应可激活细胞死亡程序ꎮＨｇＣｌ２造模时多选取大鼠进行实验ꎬ原因是小鼠对ＨｇＣｌ２显示出一定的耐药性ꎬ难成模ꎮ本方法可通过皮下注射㊁静脉注射㊁灌胃等途径给药ꎮ造模中ＨｇＣｌ２剂量非常关键ꎬ过小难成模ꎬ剂量稍大啮齿类动物容易大批死亡ꎬ因此ꎬ预实验时ꎬ对于大鼠的剂量ꎬ应多进行尝试或采取梯度给药ꎮ在国内多采用每日８ｍｇ/ｋｇＨｇＣｌ２水溶液灌胃给药ꎬ８周左右即可建立肾小管间质纤维化模型[２５]ꎮ２ １ ２㊀腺嘌呤腺嘌呤可在体内代谢为２ꎬ８－二羟基腺嘌呤(ＤＨＡ)ꎬＤＨＡ在肾小管积累ꎬ形成晶体(结石)堵塞肾小管造成肾损伤ꎬ虽然ＤＨＡ的致病机理还尚未完全清楚ꎬ但已知ＴＧＦ￣β在其中起到重要作用[２６]ꎮ用腺嘌呤诱导的慢性肾病(ｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅꎬＣＫＤ)模型会增加增加尿酸的排泄ꎬ形成蛋白尿ꎬ游离氨基酸减少ꎬ肾外表颗粒化且伴有肾纤维化ꎬ同时还会出现心血管系统的结构和功能损伤ꎬ无论是缓慢变化的慢性肾病还是并发症均与临床人类ＣＫＤ表现高度一致ꎮ腺嘌呤诱导肾纤维化多采用大鼠进行含有０ ７５％腺嘌呤的饲料喂食ꎬ可引起肾迅速且严重的变化ꎬ伴随肾小管损伤㊁肾小球㊁肾间质纤维化及炎症ꎮ但Ｔａｍｕｒａ等[２６]和Ｉｍａｍｕｒａ等[２７]仅用含有０ ２％和０ ２５％腺嘌呤饲料喂食Ｃ５７ＢＬ/６小鼠ꎬ也成功诱导肾纤维化ꎬ可能说明小鼠比大鼠对腺嘌呤更敏感ꎮ２ １ ３㊀硝酸铀酰(ｕｒａｎｙｌｎｉｔｒａｔｅ)硝酸铀酰目前在国外诱导急性肾损伤模型应用较多ꎬ其急性肾毒性和急性肾衰竭的病理机制有很多深入的研究和详细的描述ꎮ向啮齿类动物注射硝酸铀酰之后ꎬ５０％的铀化合物通过肾排出ꎬ铀化合物在肾中又集中在肾皮质部分ꎬ在其他器官分布的数量微不足道ꎬ具有较好的肾靶向性[２８]ꎮ硝酸铀酰可使啮齿类动物尿量和肾小球过滤率减少ꎬ近端肾小管萎缩ꎻ其慢性肾毒性多与重金属汞㊁锌等对肾损伤的机理类似ꎬ硝酸铀酰同样可以破坏线粒体电子传输链功能ꎬ产生的氧化应激反应损伤肾[２９]ꎮ在国内不仅对硝酸铀酰的慢性肾毒性研究不多ꎬ应用都非常少ꎬ但基于硝酸铀酰对肾的靶向性ꎬ我们应尝试扩大对硝酸铀酰的慢性肾毒性研究ꎬ也许可以建立良好的慢性肾纤维化模型ꎮ在为数不多的硝酸铀酰诱导纤维化模型文章中ꎬ多采用雌性啮齿类动物ꎬ硝酸铀酰的给药方式和剂量都比较统一ꎬ多采用单次腹腔注射５ｍｇ硝酸铀酰/ｋｇ体重ꎬ大约８~１０周即可见肾间质纤维化ꎮ２ ２㊀手术法对肾纤维化的研究中更多会采取手术法建立模型ꎬ一般手术法有单侧输尿管结扎㊁５/６肾切除手术和缺血再灌注法ꎻ其中结扎单侧输尿管最经典ꎬ应用也是最为广泛ꎬ而缺血再灌注法则因其临床实际应用的高度需求性同样被研究的较多ꎮ５/６肾切除法虽然也能快速建立肾的损伤ꎬ但因其需要切除大部分肾ꎬ对机体产生过大的损伤且并不是很符合临床需求的研究ꎮ２ ２ １㊀单侧输尿管结扎(ｕｎｉｌａｔｅｒａｌｕｒｅｔｅｒａｌｌｉｇａｔｉｏｎꎬＵＵＯ)本方法适用于大鼠和小鼠ꎬ输尿管结扎后阻碍尿液正常排泄ꎬ短时间便可造成尿潴留ꎬ肾肿大ꎬ肾小管细胞坏死ꎬ肾组织结构完全被破坏从而导致肾功能不全ꎮ此模型已经成为了研究尿路梗阻肾小管间质纤维化原因和机制的标准模型ꎮ但ＵＵＯ模型同样存在慢性病变特点不够典型的问题ꎬ并且伴随结扎时间延长ꎬ啮齿类动物死亡率会加速提升ꎮ此模型病变只发生在结扎输尿管一侧ꎬ对侧肾功能依旧正常ꎮ单侧输尿管结扎后ꎬ从第３天起有肾髓质和皮质减少的病理变化ꎬ且有少量纤维化出现ꎬ随时间推移ꎬ结扎７ｄ后血清肌酐和尿素氮成倍增长ꎬ单核巨噬细胞浸润ꎬ间质水肿ꎬ部分近端小管上皮空泡变性[３０]ꎬ两周后即可形成以小管细胞坏死和萎缩㊁炎症细胞渗透㊁细胞外基质和Ｉ型胶原蛋白大量沉积为特点的严重的结构破坏[３１]ꎮ刘克剑等[３２]等发现从侧腹开口结扎单侧输尿管两端后ꎬ不离断输尿管ꎬ可保证不影响造模效果的同时大幅提升啮齿类动物的存活率ꎮ２ ２ ２㊀缺血再灌注在临床的外科手术㊁器官移植㊁烧伤等过程均可出现缺血再灌注损伤ꎬ然而短暂缺血并不足以引起器官细胞损伤ꎬ反而缺血后的血液再灌注可造成微血管和实质细胞更严重的损伤ꎮ因此缺血再灌注模型具有高度应用局限性ꎬ基本全部用于缺血再灌注引起肾损伤的相关研究ꎮ缺血再灌注引起的肾损伤主要与活性氧自由基和Ｃａ２＋超载有关ꎬ在缺血组织中清除自由基的酶类合成能力受损ꎬ并且缺血再灌注可以直接损伤肾小球内毛细血管内皮细胞ꎬ引起炎症级联反应ꎮ因此ꎬ抑制ＴＬＲ４通路和增强清除自由基能力可减少缺血再灌注造成的损伤[３３]ꎮ张蕊[３４]利用动态对比增强ＭＲＩ监测大鼠缺血再灌注后的肾损伤ꎬ发现当大鼠肾缺血３０~４５ｍｉｎ时可在保证大鼠存活率的条件下对肾造成不可逆转的伤害ꎮ３㊀肝肾纤维化复合模型作为人体两大免疫器官ꎬ肝肾总是有千丝万缕的联系ꎬ不仅临床上的肝肾综合征㊁乙肝相关性肾病㊁胆汁性肾病等ꎬ中医的肾病从肝论治ꎬ肝病从肾论治等均体现着肝肾协作㊁互滋的能力ꎻ此外ꎬ为了深入研究一些传统中药对肝肾的异病同治功效ꎬ开始尝试建立肝肾纤维化复合模型ꎮ基于以往建立肝纤维化和肾纤维化模型的经验之上ꎬ几乎所有肝损伤药物和手术法都具有高度肝靶向性的同时可轻损肾ꎬ而致肾损伤的化学药物往往肾靶向性较低ꎬ因此在建立肝肾纤维化复合模型时多采用肝靶向性损伤药物结合肾损伤药物或直接采用能造成全身损伤的化学试剂㊁药物ꎮ３ １㊀四氯化碳和牛血清Ｍａｎｏｊ[３５]联合四氯化碳和牛血清蛋白腹腔注射ꎮ在本研究中ꎬ四氯化碳主要造成肝损伤ꎬ牛血清蛋白主要通过免疫复合物形成蛋白尿造成肾损伤ꎻ１０周后肝病理切片可见明显的纤维化ꎬ肾仅见结缔组织增生和炎症细胞浸润ꎮ四氯化碳具有较高肝靶向性的同时对肾也有损伤ꎬ牛血清蛋白作为免疫性损伤药物配合四氯化碳ꎬ使肝肾损伤程度均大致处于纤维化阶段ꎬ但本试验最终并未显示严重的肾纤维化结果ꎻ反而发现牛血清蛋白对四氯化碳的肝损伤有拮抗作用ꎬ为日后造模方法提供了新发现ꎮ３ ２㊀ＤＭＮ和汞姜哲浩等[３６]在研究扶正化瘀方对大鼠肝肾纤维化的影响时采用了腹腔注射ＤＭＮ和喂食含有重金属汞的饲料建立肝肾纤维化复合模型ꎮ８周之后ꎬ肝组织坏死㊁肝细胞肿胀㊁大量炎症细胞浸润㊁假小叶形成ꎻ肾间质水肿伴炎细胞浸润㊁肾间质中大量胶原纤维ꎮ汞在诱导肾纤维化单独使用时ꎬ剂量难以控制ꎬ但配合对肝肾都有损伤的ＤＭＮ使用大大提高了成功诱导肝肾纤维化的几率ꎮ３ ３㊀酪氨酸氧化产物酪氨酸是常见的食品添加剂和药原料ꎬ容易被氧化修饰[３７]ꎻ因此在售卖的牛奶㊁奶粉㊁动物饲料中等均可检测到酪氨酸及其氧化产物的存在ꎮ因此ꎬ酪氨酸及其氧化产物对人体的影响成为了研究热点ꎮ李竹青[３８]发现短期２８ｄ喂食酪氨酸氧化产物可对肝肾均产生损伤ꎬ随喂食时间增长ꎬ会引起肝肾炎症因子大量分泌ꎬ产生氧化应激反应ꎬ紧接着激活肝星状细胞与内质网应激反应ꎬ促进肾小球内皮细胞－间质转化反应ꎬ引起肝肾纤维化ꎮ３ ４㊀环孢菌素Ａ(ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅꎬＣｓＡ)从２０世纪８０年代ＣｓＡ作为免疫抑制剂应用于临床ꎬ主要用于器官移植手术后的排异反应ꎬ但由于较严重的肝㊁肾毒性副作用ꎬ使其应用受限ꎮ短期注射ＣｓＡ可使肾血流减少ꎬ长期注射会导致具有广泛的肾小管纤维化的肾衰竭ꎮＣｓＡ的急性肾毒性与激活肾素－血管紧张素系统有关ꎬ慢性肾毒性是因为可触发机体分泌ＴＧＦ￣βꎬ大量的ＴＧＦ￣β是触发上皮间质转化的关键因素ꎮＣｓＡ可破坏肾近端管状细胞的形态㊁连接结构㊁细胞骨架ꎬ并且在上皮－间质转化后ꎬ成肌纤维细胞可以自由迁移到间质中ꎬ并释放出大量的细胞外基质(ＥＣＭ)ꎬ促进纤维化发展[３０－４０]ꎮ程根阳[４１]先建立低盐饮食(ｌｏｗｓａｌｔｄｉｅｔꎬＬＳＤ)喂养ꎬ然后每日皮下注射ＣｓＡꎬ１４ｄ后即显示肝肾功能受损㊁炎症细胞浸润ꎬ３５ｄ试验结束时ꎬ间质炎性细胞浸润减少ꎬ纤维化程度明显ꎮ４㊀总结与展望４ １㊀总结现有建立肝㊁肾纤维化模型的方法在建模难易程度㊁临床相似性㊁重复程度都各有千秋ꎮ化学诱导法建模耗时较长ꎬ但比较符合慢性疾病病变过程ꎬ个别毒性化学物质ꎬ如氯化汞㊁ＤＭＮ等由于安全管控原因难以购买ꎬ因此模型出现空缺ꎬ丞待开发新的模型ꎻ手术法虽然建模过程耗时短ꎬ但对于慢性疾病的慢性病变过程来讲不够典型ꎬ同时术后感染㊁啮齿类动物撕咬造成刀口撕裂㊁结扎时间过长等使死亡率升高ꎻ免疫法虽能引起全身性的炎症ꎬ但却存在停药后可自愈的问题ꎬ这并不利于肝肾纤维化的治疗药物筛选ꎮ现有造模方法基本可以实现从不同发病原因来模拟人类临床中出现的肝㊁肾纤维化的一些病理变化ꎬ可以适用于不同科研目的ꎮ相对来讲肝肾纤维化复合模型现在处于较空白的阶段ꎬ由于胆管结扎㊁注射硫代乙酰胺等方法能同时引起肝肾的损伤ꎬ是对肝肾同时的直接毒性还是基于肝肾功能交互的损伤ꎬ对其潜在机制及诱导复合模型的潜力还有待深入研究ꎮ近年仅有两篇报道称酪氨酸氧化产物和环孢菌素Ａ均可同时引起肝肾纤维化ꎬ但在大鼠体内引起的病理变化及模型特点还需进行大量且深入的研究ꎻ而能够引起全身性损伤的阿霉素和免疫性血清可能成为诱导肝肾纤维化复合模型的潜力物质ꎻ同时也可以尝试分别选取建立肝纤维化和肾纤维化模型的经典方法ꎬ结合使用建立肝肾纤维化复合模型ꎬ例如经典四氯化碳模型㊁硫代乙酰胺模型结合单侧输尿管结扎法等ꎮ４ ２㊀展望人类慢性肝病和慢性肾病作为全球健康问题ꎬ其药物研究日益迫切ꎮ而实验性动物模型不仅可以从群体数量上满足疾病实验和药物筛选实验的要求ꎬ还可以在实验中各个环节实现条件控制ꎬ可以人为的剔除一些干扰因素ꎬ从而实现对发病机制㊁疾病进程㊁药物筛选等进行深入的研究ꎮ但现有的肝㊁肾纤维化动物模型依旧存在问题:(１)对动物模型本身的发病机制尚未完全清楚ꎻ(２)肝肾纤维化动物模型大多在大㊁小鼠身上建立ꎬ模型的动物种类较少ꎻ(３)无法完全模拟人类肝㊁肾纤维化进展所引起的所有变化ꎻ(４)造模过程中死亡的啮齿类动物无法确认死因ꎬ且可能会在啮齿类动物体内引发并发症或其他变化我们也无法详尽得知ꎻ(５)造模过程至今并未有统一化的规范操作标准ꎬ会因为啮齿类动物品种㊁实验人员操作㊁药品配置等方面造成成模差异ꎮ因此ꎬ对现有建模方法继续优化以及对所有动物模型进行发病机制的探讨ꎬ都将是日后重点研究的领域ꎮ参㊀考㊀文㊀献(Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ)[１]㊀ＬｕｏＭꎬＰｅｎｇＨꎬＣｈｅｎＰꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣３５ｉｎｆｉｂｒｏｔｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１９ꎬ１５(４):４３１－４３９.[２]㊀ＫｉｓｓｅｌｅｖａＴꎬＢｒｅｎｎｅｒＤＡ.Ａｎｔｉ￣ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃｓｔｒａｔｅｇｉｅｓａｎｄｔｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＢｅｓｔＰｒａｃｔＲｅｓＣｌｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌꎬ２０１１ꎬ２５(２):３０５－３１７.[３]㊀ＤｏｎｇＳꎬＣｈｅｎＱＬꎬＳｏｎｇＹＮꎬｅｔａｌ.ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＣＣｌ４￣ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｗｉｔｈｃｏｍｂｉｎｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃａｎｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ].ＪＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉꎬ２０１６ꎬ４１(４):５６１－５７２.[４]㊀ＦｉｔｚｈｕｇｈＯＧꎬＮｅｌｓｏｎＡＡ.Ｌｉｖｅｒｔｕｍｏｒｓｉｎｒａｔｓｆｅｄｔｈｉｏｕｒｅａｏｒｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ１９４８ꎬ１０８(２８１４):６２６－６２８. [５]㊀ＢａｓｈａｎｄｙＳＡꎬＡｌａａｍｅｒＡꎬＭｏｕｓｓａＳＡꎬｅｔａｌ.Ｒｏｌｅｏｆｚｉｎｃｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｎａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅｉｎｒａｔｓ[Ｊ].ＣａｎＪＰｈｙｓｉｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１７ꎬ９６(４):３３７－３４４.[６]㊀ＳａｉｄＥꎬＳａｉｄＳＡꎬＧａｍｅｉｌＮＭꎬｅｔａｌ.Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ/ｃｉｒｒｈｏｓｉｓｂｙｓｉｌｄｅｎａｆｉｌｔｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].ＣａｎＪＰｈｙｓｉｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１３ꎬ９１(１２):１０５５－１０６３.。

保肾宁胶囊对甘油造成的急性肾功能衰竭少尿模型的影响作者：贾宁郑晶王汉来源：《中国医学创新》2011年第24期【摘要】目的采用甘油造成急性肾功能衰竭少尿模型，观察保肾宁胶囊对急性肾功能衰竭的影响。

方法 SD大鼠随机分为对照组、尿毒清阳性对照组、模型组和不同剂量保肾宁胶囊干预组，观察保肾宁胶囊对ARF大鼠一般情况、肾功能及电解质的影响。

结果保肾宁胶囊11.0 g生药/kg能增高甘油所致急性肾衰大鼠的尿量，改善少尿症状，能显著降低血Cr水平，使肾功能得到一定程度的改善；5.5、2.8g生药/kg剂量可纠正急性肾衰大鼠的电解质紊乱，使血钠异常得到明显改善。

结论保肾宁胶囊对甘油引起的急性肾功能衰竭具有一定的改善作用。

【关键词】急性肾功能衰竭；保肾宁胶囊；肾功能The effect of Baoshenning capsules on acute renal failure rat model induced by glycerine JIA Ning, ZHENG Jing,WANG Han.The Fifth Affiliated Hospital of Zhongshan University,Zhuhai 519000,China【Abstract】 Objective To explore the effect of baoshenning capsules on acute renal failure （ARF）rat model by intramuscular injection of glycerine.Methods SD rats were invided into seven groups randomly:normal groups,positive control groups treated by niaoduqing,model groups and treated groups with baoshenning capsule,observe the effect of baoshenning capsule on acute renal rat's general condition,renal function and electrolyte.Results Baoshenning capsule could raise urine volume and decreased the level of serum creatinine of ARF rats;5.5、2.8 crude drug/kg dose could correct electrolyte disturbance of ARF rats.Conclusion Baoshennin capsule had good curative effect of ARF rat model.【Key words】 Acute renal failure（ARF）； Baoshenning capsules； Renal function近四十年来，虽然随着血液透析的应用和内科支持疗法的改进，急性肾功能衰竭（ARF）的死亡率仍居高不下［1，2］。

急性肾功能衰竭的实验室及辅助检查（一）血液检查急性肾功能衰竭患者可出现轻、中度贫血，部分和体液潴留，血液稀释有关。

BUN和SCr可进行性上升，高分解代谢者上升速度较快，横纹肌溶解引起的肌酐上升较快；血钾浓度可升高（>5．5mmol／L），部分正常，少数偏低；血pH常低于7．35，碳酸氢根离子浓度多低于20mmol／L，甚至低于13．5mmol／L；血清钠浓度可正常或偏低；血钙可降低，血磷升高。

自身抗体阳性（抗核抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体、抗GBM抗体和抗“O”），补体水平降低，常提示可能为急性感染后肾小球肾炎和狼疮性肾炎等肾实质性疾病。

如果患者有感染，应行血培养，排除急性肾功能衰竭伴发脓毒症。

（二）尿液检查1．尿常规尿液外观多呈浑浊，尿色深。

根据病情不同，可分别为尿蛋白定性-～（表14-1-12）。

2．尿沉渣检查可以发现肾小管上皮细胞、上皮细胞管型、颗粒管型、红细胞、白细胞和晶体存在，有助于急性肾功能衰竭的鉴别诊断，对区分肾前性、肾性和肾后性具有重要价值。

（1）肾前性：典型表现为尿沉渣阴性，或仅有透明管型。

透明管型可能由正常尿液成分浓缩而成，通常以髓襻上皮细胞分泌的Tamm-Horsfall蛋白为主要成分。

（2）肾性：棕色颗粒状管型和小管上皮细胞管型，是缺血和肾毒性急性肾小管坏死的特征，但20％～30％的缺血或中毒性急性肾小管坏死患者可无管型尿。

多形性红细胞管型，常提示为急性肾小球损伤和肾脏微血管疾病，也可见于急性间质性肾炎。

白细胞管型和颗粒状管型，提示为间质性肾炎。

粗大颗粒状管型是慢性肾脏疾病的特征，可能反映间质纤维化和肾小管扩张。

90％药物过敏性间质性肾炎，可见嗜酸细胞尿（占总细胞数1％～50％）。

尿酸盐结晶多见于尿酸性肾病患者。

草酸盐（膜型）和马尿酸盐（针型）结晶的出现，可提示为乙二醇中毒。

（3）肾后性：尿沉渣可为阴性，均一型血尿和脓尿，提示有尿路腔内梗阻（结石，脱落的肾乳头、血凝块）或前列腺疾病。

二十种常见实验动物模型一、缺铁性贫血动物模型缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）是体用来合成血红蛋白（HGB）的贮存铁缺乏，HGB合成减少而导致的小细胞低色素性贫血，主要发生于以下情况：（1）铁需求增加而摄入不足，见于饮食中缺铁的婴幼儿、青少年、孕妇和哺乳期妇女。

（2）铁吸收不良，见于胃酸缺乏、小肠粘膜病变、肠道功能紊乱、胃空肠吻合术后以及服用抗酸和H2受体及抗剂等药物等情况。

（3）铁丢失过多，见于反复多次小量失血，如钩虫病、月经量过多等。

IDA是一种多发性疾病，据报道，在多数发展中国家，约2/3的儿童和育龄妇女缺铁，其中1/3患IDA，因此，研究IDA的预防和治疗具有重要的意义。

在这些研究中，缺铁性贫血的动物模型（Animal model of IDA），又是实施研究的基础工具。

常见的IDA动物模型的构建技术如下：实验动物：一般选用SD大鼠，4周龄，雌雄不拘，体重65g左右，HGB≥130g/L。

建模方法：低铁饲料加多次少量放血法。

低铁饲料一般参照AOAC 配方配制，采用EDTA浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导SD大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，现有研究表明，饲喂含铁量<15.63mg/Kg的饲料35天，SD大鼠出现典型IDA表现，而饲喂含铁40.30mg/Kg的饲料SD大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。

建模时一般采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。

少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。

放血一般在低铁饲料饲喂2周后进行，常用尾静脉放血法，1～1.5ml/次，2次/周。

模型指标：（1）HGB≤100g/L；（2）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，MCV减小、MCHC降低；（3）血清铁（SI）降低，常小于10μmol/L，血清总铁结合力（TIBC）增高，常大于60μmol/L。

肾茶水提取物对大鼠腺嘌呤肾功能衰竭模型的肾功能影响张少贵;黄荣桂;郑兴中【摘要】目的：探讨肾茶水提取物对腺嘌呤致慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠的肾脏保护作用及其可能的机制。

方法采用腺嘌呤灌胃法建立大鼠CRF模型，同时用肾茶灌胃治疗。

治疗第17 d测定尿液尿酸含量；4周后，采血测血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）含量，并测定菊粉清除率代表肾小球滤过功能。

取大鼠肾脏进行H‐E染色病理组织学观察和肾组织免疫组织化学染色检测碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。

结果与模型对照组比较，肾茶治疗组肾脏病理改变轻，尿液尿酸含量增加，血清Cr、BUN、MDA含量降低，菊粉清除率升高，bFGF表达减少（均为P＜0．05）。

结论肾茶对CRF大鼠的肾脏有保护作用，其主要作用机制可能与肾茶增加尿液尿酸排泄、抗氧化作用和抑制肾小管及肾间质bFGF表达有关。

%Objective To investigate the renal protective effect and possible mechanism of aqueous extract from a herb C .Spicatus on chronic renal failure rats induced by adenine . Methods The animal model of CRF was established by the adenine gastric infusion method . The rats were treated with ig&nbsp;C .Spicatus daily . The contents of urine uric acid were detected on the 17 d of treatment . BUN ,Cr , MDA of blood serum were respectively detected ,as well as determined GFR after 4 weeks . The kidneys were obse rved for the histopathology by H‐E dyeing and detected the level of bFGF by immuhistochemis‐try dyeing . ResuIts The pathology changes of the C .Spicatus groups were lighter than those of the model control group . The contents of urine uric acid of C .Spicatus group were significantly higher than those of model control group(P<0 .05) .BUN ,Scr ,MDA were lower than those of model control group (P<0 .05) . The inulin clearance rate of C .Spicatus group were higher than those of model control group (P<0 .05) . The expression of bFGF in C .Spicatus group was significantly less than it in model control group(P<0 .05) . ConcIusion C .Spicatus had protective and promoted function on CRF in rat kidney induced by adenine . For the performance of C .Spicatus couldre duce serum Cr ,BUN and increased glo‐merular filtration rate ,reduce the renal pathological changes . T he effective mechanism may be associated with the its accrescence of uric acid evacuation ,improvement of glomerular filtration rate and anti‐oxyda‐tion activity . In addition ,it might relate to inhibitory effect of renal tubule and interstitium of bFGF expression .【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】5页(P362-366)【关键词】腺嘌呤;肾功能衰竭,慢性;成纤维细胞生长因子-2【作者】张少贵;黄荣桂;郑兴中【作者单位】莆田市第一医院肾内科，莆田 351100;福建医科大学附属第二医院肾脏病研究室，泉州362000;福建医科大学附属第二医院肾脏病研究室，泉州362000【正文语种】中文【中图分类】R-332;R285.5;R334.1;R692.5;R916.4慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是一组进行性肾单位毁损，从而使肾脏的排泄功能、内环境稳定功能和内分泌功能紊乱为特征的临床综合群。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

毛冬青预防大鼠甘油致急性肾功能衰竭的初步实验研究陈少刚;陈爱云【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】1990(006)004【摘要】本实验用雄性SD大鼠20只,随机等分为毛冬青预防组和单纯甘油致急性肾衰对照组。

实验结果初步表明毛冬青对甘油所致大鼠急性肾功能衰竭(ARF)有预防作用:能明显提高动物存活率,降低血BUN浓度;增加尿量;减轻肾脏病理改变。

提示毛冬青具有对抗甘油所致急性缺血性肾衰的作用。

毛冬青预防ARF尚未见报道,本文对可能作用机制作了初步探讨。

急性肾功能衰竭(ARF)一旦形成,治疗被动,疗效不佳。

目前虽然临床上治疗ARF使用透析疗法在防治并发症方面取得了较好的疗效,但死亡率仍高达25～65％。

因此探索有关ARF的防治措施仍是目前一项重要的课题。

ARF的发病机制可分为肾缺血及肾中毒两种类型。

甘油性肾衰发病机制主要属于缺血性,此型肾衰按中医辨证属“血瘀”范畴,故作者采用对外周血管具有较强扩张作用和抗凝作用的“活血通脉”中草药毛冬青,作预防大鼠甘油性ARF的研究。

【总页数】4页(P5-8)【作者】陈少刚;陈爱云【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】R692.501【相关文献】1.内皮源性舒张因子在甘油致大鼠急性肾功能衰竭中的作用 [J], 夏晓红2.复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型的影响 [J], 林波;向丽;刘宇;石金凤;张桂;曾勇;孟宪丽;陈小睿3.川芎及黄芪预防庆大霉素致大鼠急性肾功能衰竭的实验研究 [J], 樊文广;袁亚光;杨盛4.黄芪预防庆大霉素致大鼠急性肾功能衰竭的实验研究 [J], 孟祥艳;林海泓5.甘油致急性肾功能衰竭大鼠模型 [J], 郭德玉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

第1篇一、实验背景心衰，即心力衰竭，是指心脏无法有效泵血，导致心脏供血不足，从而引起全身血液循环障碍的临床综合征。

为了研究心衰的发生机制和病理生理变化，本实验采用家兔作为实验动物，通过人为方法复制实验性心衰模型，观察心衰时的心血管动力学变化，以及心衰对组织器官功能的影响。

二、实验目的1. 复制家兔实验性心衰模型。

2. 观察心衰时的心血管动力学变化。

3. 分析心衰对组织器官功能的影响。

4. 探讨心衰的发生机制。

三、实验材料1. 实验动物：健康家兔6只，体重2.0-2.5kg。

2. 实验仪器：电子体重秤、血压计、心电图仪、超声心动图仪、生理信号采集系统、手术器械、输液器等。

3. 实验试剂：氯化钠、葡萄糖、肝素钠、肾上腺素、心得安等。

四、实验方法1. 实验分组：将家兔随机分为两组，每组3只。

对照组给予正常饲养，实验组给予复制心衰模型。

2. 心衰模型复制：实验组家兔采用心脏按压法复制心衰模型。

首先，采用心电图检测家兔心脏功能，确定心脏功能正常。

然后，将家兔麻醉后，进行心脏按压，每次按压30秒，间隔2分钟，重复3次。

心脏按压后，观察家兔的心脏功能变化，记录心率和血压。

3. 心血管动力学检测：采用血压计和心电图仪检测心衰组家兔的心率和血压，采用超声心动图仪检测心衰组家兔的心脏结构和功能。

4. 组织器官功能检测：采用生理信号采集系统检测心衰组家兔的心脏、肝脏、肾脏等器官的功能。

5. 数据分析：采用统计学方法对实验数据进行统计分析。

五、实验结果1. 心衰模型复制成功：实验组家兔在心脏按压后，出现心率减慢、血压下降、心电图异常等心衰症状。

2. 心血管动力学变化：心衰组家兔的心率和血压明显低于对照组，心输出量降低。

3. 心脏结构和功能变化：心衰组家兔的心脏大小、重量明显增加，心室壁厚度增加，心脏射血分数降低。

4. 组织器官功能变化：心衰组家兔的心脏、肝脏、肾脏等器官功能明显受损。

六、讨论与分析1. 心衰模型复制成功：本实验采用心脏按压法成功复制了家兔实验性心衰模型，为后续研究心衰的发生机制和病理生理变化提供了基础。

第十五章人类疾病动物模型复制第一节概述由于人类疾病的复杂性，医学研究中必须对疾病过程进行各种观察、分析和实验。

这些工作大多不可能在人体上进行，必须借助于适当的动物及其器官、组织和细胞进行研究。

供医学研究用的这些动物具有与所研究的人类疾病相似的特点，故称之为人类疾病动物模型(animal models of human diseases)。

人类疾病动物模型通常可以通过人工诱发，或选择具有相应特点的自然动物而获得。

人类疾病动物模型通常依照研究目的而设计，不同的研究选用的动物模型可有很大差别，所以人类疾病动物模型很多，也很复杂。

许多人类疾病的动物模型可以自然获得，即利用动物自发性的遗传特性或通过育种手段培育遗传特性建立而成，如裸鼠、肥胖症小鼠、自发性高血压鼠、自发性高胆固醇血症鼠等。

更多的人类疾病实验动物模型是用人工方法，将致病因素作用于动物，诱发动物特定器官、组织、细胞或全身的损害，造成与所研究的人类疾病相似的机能、代谢和形态学的改变。

可用于诱发疾病模型的方法和因素很多，包括物理因素、化学因素、微生物因素以及基因工程技术等。

近年随着生物技术的发展，越来越多地应用生物工程技术方法制作动物模型，包括利用动物卵或胚胎移植、胚胎嵌合、细胞核移植、转基因或基因敲除和克隆等技术制作人类疾病的动物模型。

复制的人类疾病动物模型是否能真正地、客观地反映人类疾病是能否作为研究对象而用于医学研究的关键。

但动物与人类之间存在着很大的差异，任何一种人类疾病的动物模型不可能与人类疾病完全相同，而且影响因素很多，所以在选择和设计动物模型时要尽可能力求全面周密，在分析实验结果时要充分考虑动物模型的局限性。

复制人类疾病动物模型有三点最基本的要求：一是复制模型选用的动物应尽可能接近人类，建立的模型必须尽可能地与所研究的人类疾病有相同的或相近的机能、代谢和形态学变化特点，病变发生机理应尽量与相应的人类疾病相同；二是选用的方法要保证疾病动物模型复制有较高的成功率，具有较好的可重复性和一定的稳定性，以供他人应用和验证；三是复制成功的动物模型应有明确而可靠的测量或观察的指标，以供判断病变的轻重程度和病程的缓急。