Purification of Taq DNA Polymerase - for 1 Liter culture Modified from the protocol presented in F.G. Pluthero (1993) Rapid purification of high-activity Taq DNA polymerase. Nucleic Acids Research 21 no.20: 4850-4851.
Day 1
Start 3ml overnight culture of taq from glycerol stock in LB/amp (75ng/ul) Day 2
Add 1ml of overnight culture to 1L of LB/amp. Incubate at 37C and 220rpm for 11 hours, or until A600 of 0.800.
Add 125mg/L pf IPTG and incubate an additional 12 hours
Day 3
Pre-heat a water bath to 75C
Transfer culture to 2-500ml centrifuge bottles and spin at 4800rpm, 5 minutes at 4C in Beckman JA10 rotor.
Discard supernatant and resuspend pellet in 100ml Buffer A
(50ml/bottle)Resuspend very well with a pipet, but do not vortex.
Spin at 4800rpm, 5 minutes at 4C. Resuspend pellet in 50ml pre-lysis buffer (25ml/bottle). Combine in a 250ml flask and incubate at room temp for 15 minutes.
Add 50ml of lysis buffer,mix well and incubate at 75C for one hour.
Transfer to 50ml centrifuge tubes and spin at 15,000rpm for 10minutes at 4C in Beckman JA-20 rotor.
Pour supernatant into sterile 250ml flask with a stirring bar and add ammonium sulfate at a rate of 30g/100ml lysate. Add slowly – over about 15 minutes- Stir well to precipitate protein (at least another 10-15 minutes). **It is very important to do this slowly and will make a difference in your yield.**
Transfer to 50ml centrifuge tubes and spin at 15,000rpm for 10minutes at 4C. Protein pellet will form on surface and walls of tube. Remove it from all tubes with sterile pasteur pipet and resuspend in a total of 20ml of Buffer A Note: it is not easy to get the protein out – it kind of floats around and/or sticks to the walls. You can try to pick it up or suck it up. Sometimes I find it easiest to try to remove all of the liquid and leave the pellet and resuspend it in that tube.
Transfer suspension to dialysis tubing and dialyze at 4C for 12 hours with gentle stirring in 450ml of storage buffer.
Day 4
Drain storage buffer off and replace with 450ml of fresh storage buffer. Dialyze for 12 hours longer under same conditions
Add equal amount of storage buffer and aliquot into 1.5ml tubes and store at -80C.
Always thaw aliquots of taq and dilution buffer on ice.
BUFFERS
Needs for 1 L of culture
Stock Add
Buffer A (200ml)
50mM Tris-HCl pH8.01M10ml
50mM Dextrose (D-glucose)9g
1mM EDTA pH8.00.25M800ul
ddH2O up to 200ml
Pre-Lysis Buffer
50ml bufferA
200mg lysozyme
Lysis Buffer(50ml)
10mM Tris-HCl pH7.91M500ul
50mM KCl1M 2.5ml
1mM EDTA pH 8.00.25M200ul
1mM Pefabloc SC (do not autoclave)100mM500ul
0.5% Tween 20250ul
0.5% Igepal CA650250ul
ddH2O up to 50ml
Storage/Dilution Buffer (1000ml) 50mM Tris-HCl pH7.91M50ml
50mM KCl1M50ml
0.1mM EDTA0.25M400ul
*1mM DTT(not autoclavable)1M1ml
*0.5mM Pefabloc SC (do not autoclave)100mM5ml
50% glycerol100%500ml
ddH2O up to 1L
*add right before use.
Store this buffer in freezer while not in use. Save out a little of this buffer to use as dilution buffer which should be stored in small aliquots at –80C.
Supplies (sterile) per 1L of starting culture:
4 centrifuge bottles (500ml and 50ml)
4 oakridge centrifuge tubes (50ml)
2-200ml flasks with stir bar, covered with aluminum foil
dialysis tubing [from Gibco/BRL (now Invitrogen)#15961-022] and clamps
500ml beaker w/ stir bar
Pasteur pipettes
STERILIZE ALL GLASS AND PLASTICWARE
Check concentration by making a dilution series and using the dilutions in PCR. Results usually vary between 1:5 dilution and 1:30 dilution.
自动螺丝机说明书 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT
自动锁螺丝机 （SCREW-160/180II/320 ） 目录 一、自动锁螺丝机功能简介 (01) 二、主画面概要 (01) 三、主界面功能介绍 (02) 四、参数设置界面介绍··················-03～04- 五、螺丝规格界面介绍 (05) 六、教导（模拟手柄）界面介绍 (06) 七、步骤镜像界面介绍 (07) 八、参数复制界面介绍 (08) 九、其他设置界面介绍 (09) 十、坐标校正界面介绍 (10) 十一、文件管理界面介绍 (11) 十二、产量报表界面介绍 (12) 十三、USB复制界面介绍 (13) 十四、螺丝供给器和电批调节 (14) 十五、程序制作简易流程 (15) 十六、故障排除 (16)
十七、维护与保养 (17) 十八、技术参数 (17) 十九、售后服务 (18) 二十、注意事项 (18) 二十一、易损伤配件表···················-19～22- 一、自动锁螺丝机功能简介 1.全中文界面，动态显示运行状态，直观可见的参数 2.密码保护功能、保护系统参数不被随意更改 3.程序之间有阵列复制、参数复制功能 4.程序具有坐标部分校正、整体校正功能、节省手动调试程序的时间 5.具备插入、手动输入坐标、删除功能、方便快速修改及制作程序 6.单步自动定位功能，极大的方便程序的制作确认及坐标修复等 7.大容量储存数据程序使用时可随意切换调用 8.自动防呆感应、流水式作业平台高效、节省人工、节约成本 二、主要面概要 人机界面由以下供13界面组成： 1.主界面 2.参数设置 3.螺丝规格 4.教导 5.步骤镜像 6.参数复制
实验9 聚合酶链式反应（PCR）技术 【实验目的】 掌握PCR反应的原理及操作技术。 【实验原理】 PCR 技术实际上是在模板DNA、引物和4 种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于耐高温DNA 聚合酶的体外酶促合成反应。PCR 技术的特异性取决于引物和模板DNA 结合的特异性。反应分为三步：1 热变性：在高温条件下，DNA 双链解离形成单链DNA；2 退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链；3 延伸：在DNA 聚合酶、dNTPs 和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA 链延伸反应。以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA 片段得到了大量复制，数量可达到10 6~7个拷贝。 【器材与试剂】 1．器材 DNA 扩增仪（PCR 仪）、台式离心机、微量取液器、硅烷化的PCR 小管、琼脂糖凝胶电泳系统 2．材料 模板DNA，单、双链DNA均可作为PCR的样品。 3．试剂 (1) 10×PCR 缓冲液 (2) MgCl2 15mmol/L (3) dNTP 混合物：每种2.5mmol/L (4) Taq DNA 聚合酶：5U/μl (5) 引物1和引物2：2 μmol/L (6) 琼脂糖凝胶电泳试剂 【操作步骤】 1. 在0.2ml Eppendorf 管内依次混匀下列试剂，配制20μl 反应体系。
ddH2O 7.8 μl 10×PCR 缓冲液 2 μl MgCl2（15mmol/L） 2 μl dNTP（2.5mmol/L） 2 μl 引物1 (2μmol/L) 2 μl 引物2 (2μmol/L) 2 μl 模板DNA 2 μl Taq DNA 聚合酶（5U/μL）0.2 μl 总体积20 μl 2．按下述循环程序进行扩增 程序阶段程序名称温度时间循环数 1 预变性94℃ 3 min 1 变性94℃30 sec 2 退火52℃30 sec 30 延伸72℃30 sec 3 保温4℃∞ 1 3．扩增结束后，取10μl 扩增产物进行电泳检测。 【要点提示】 1．在90~95℃下可使整个基因组的DNA变性为单链。一般94~95℃下30~60sec。时间过长使TaqDNA聚合酶失活。 2．退火温度一般在45~55℃。退火温度低，PCR特异性差；退火温度高，PCR特异性高，但扩增产量低。。 3．延伸温度一般在70~75℃。此温度下TaqDNA聚合酶活性最高。一般扩增产物长度小于1 kb，延伸时间30 sec即可。当扩增产物长度大于1 kb时，可适当延长延伸时间。
自动打螺丝机是通过各类电动、气动元器件实现螺丝的自动输送、拧紧、检测等工序，通过设备来简化螺丝紧固工序，达到减少人工数量及减少人工误操作带来的不良因素。是一种典型的非标自动化设备。 自动锁螺丝机主要分为：手持式锁螺丝机、多轴式自动锁螺丝机、坐标式自动锁螺丝机。 自动锁螺丝机主要应用于M1-M8螺丝的锁付。由于其属于非标自动化设备，具有可定制的特性，涉及螺丝紧固的产品都能获得相应的解决方案，应用领域较为广泛。 一、工作基本原理 家电自动打螺丝机是通过各类电动气动元器件实现螺丝的自动输送、拧紧、检测等工序，通过设备来简化螺丝紧固工序，达到减少人工数量及减少人工误操作带来的不良因素。是一种典型的非标自动化设备。 自动送钉机 自动送钉机主要负责螺丝的筛选、排列、检测、分料、输送等工序，是替代人工取螺丝的重要环节。 锁付机构 锁付机构通过配置的电批、风批或伺服电机，按照程序设定来执行拧螺丝动作，彻底替代人工作业。 二、自动打螺丝机的分类
多轴式：多轴同时拧螺丝，一次可拧好产品所有螺丝，效率较高； 坐标式：通过程序设定的坐标点位来逐个（或多个）拧螺丝，可储存编辑多套方案，适用范围广； 手持式：手持式同样配有自动送钉机，由人工找螺丝孔位拧螺丝，可锁付产品任何部位螺丝，灵活性较好。 三、自动打螺丝机使用方法 自动锁螺丝机的使用相对比较简单，简单的说就是员工放置产品即可，设备自动执行送螺丝、拧螺丝、检测等工序。一般有以下步骤：1：检查通气通电情况,打开电源开关和通气阀； 2：检查所有零部件驱动行程，坐标式还需要预先对不同的产品进行编程控制设定锁付路径； 3：放入待拧螺丝的产品，进行逐个流程的点动或寸动，从而达到检视所有工作的准确性和行程的到位； 4：开机试运行，并检查成品的效果，质量，但一切进入稳定后，方可放心使用生产； 5：定期进行质量检查，性能判定； 四、家电自动打螺丝机保养维修
楷徽自动锁螺丝机操作规程 一、自动锁螺丝机操作规程 1、开启电源，接通气源，调节好扭力和气压; 2、将螺丝倒入螺丝料仓内，螺丝量以不超过螺丝输送轨道高度为宜; 3、检查拨码开关是否对应产品型号; 4、第一次索螺丝前，需检查电批夹嘴内是否有一粒螺丝待锁; 5、如无一粒螺丝在电批夹嘴上待锁，需按测试按钮，使机器运动两次，保证电批夹嘴上有一粒螺丝在电批夹嘴上待锁; 6、检查供料机振动器调整开关是否在指定的位置上; 7、检查完毕，按复位开关，开始生产。 二、自动锁螺丝机操作规定 使用设备安全最重要，操作先进自动化设备没有规范和管理，且不能发挥它带来的效益，自动螺丝机也是一种。虽然自动锁螺丝机安全系数没那么严禁，但正常使用发挥其基本功能，更多的节省时间，提高生产效率，所以对自动锁螺丝机使用及维修管理说明还是有必要知道的。 1、严格执行以岗位责任制、安全操作规程、常规检查、维修保养等安全使用和运营的管理制度。 2、使用操作人员必须经过相应的安全技术培训。 3、制定自动锁螺丝机安全技术性能定期检验制度，根据自动锁螺丝机的安全性能和技术参数，对自动锁螺丝机定期检验，确保自动锁螺丝机运行过程的安全。 4、自动锁螺丝机的使用人员，负责自动锁螺丝机的日常检查和保养，并做好日常的检查保养记录。 5、针对自动锁螺丝机的使用性质制定交接班制度。分班轮换使用或集体使用的自动锁螺丝机，由当班负责人全面负责。 6、大型精密气动工具要严格实行定人、定机的管理办法。 7、对特种自动锁螺丝机严格按照国家有关规定，实行持证上岗。 8、自动锁螺丝机必须严格按照使用说明和安装技术规程的要求进行安装、调试后使用。
自动锁螺丝机 （SCREW-160/180II/320 V4.0） 目录 一、自动锁螺丝机功能简 介 (01) 二、主画面概 要 (01) 三、主界面功能介 绍 (02) 四、参数设置界面介 绍 (03) 04- 五、螺丝规格界面介 绍 (05)
六、教导（模拟手柄）界面介绍··········- 06- 七、步骤镜像界面介 绍 (07) 八、参数复制界面介 绍 (08) 九、其他设置界面介 绍 (09) 十、坐标校正界面介 绍 (10) 十一、文件管理界面介绍 (11) 十二、产量报表界面介绍 (12) 十三、USB复制界面介绍 (13) 十四、螺丝供给器和电批调节 (14) 十五、程序制作简易流程 (15) 十六、故障排除·····················
··-16- 十七、维护与保养·····················- 17- 十八、技术参数····················· ··-17- 十九、售后服务····················· ··-18- 二十、注意事项····················· ··-18- 二十一、易损伤配件表 (19) 22- 一、自动锁螺丝机功能简介 1.全中文界面，动态显示运行状态，直观可见的参数 2.密码保护功能、保护系统参数不被随意更改 3.程序之间有阵列复制、参数复制功能 4.程序具有坐标部分校正、整体校正功能、节省手动调试程序的时间 5.具备插入、手动输入坐标、删除功能、方便快速修改及制作程序
6.单步自动定位功能，极大的方便程序的制作确认及坐标修复等 7.大容量储存数据程序使用时可随意切换调用 8.自动防呆感应、流水式作业平台高效、节省人工、节约成本 二、主要面概要 人机界面由以下供13界面组成： 1.主界面 2.参数设置 3.螺丝规格 4.教导 5.步骤镜像 6.参数复制 7.其他设置 8.坐标校正 9.文件管理 10.产量报表 https://www.doczj.com/doc/b6295234.html,B复制 -1- 三、主界面功能介绍
非标自动化设备的应用 非标自动化设备概述 非标自动化设备的制作不像普通标准设备那么简单,普通的自动化设备研发设计成熟之后,可根据具体的流程来制作,而非标自动化设备这需要根据生产场所,产品加工特性来独立设计,所以非标自动化设备没有一个具体的模型可以参考,必须根据生产的要求来设计. 非标自动化设备的前景 自动化设备的主要作用就是提高生产效率,和产品质量,节约劳动成本,使企业的发展从粗犷型转向集约型,由于各种因素,一些生产部门无法使用自动化设备来实现生产.非标自动化设备应用广泛,能够满足企业生产的不同需求,是实现工业自动化不可缺少的一股力量. 非标自动化设备在装配行业的应用 加工制造业是劳动力相对密集的行业,尤其是装配行业,由于很多厂家的产品各有不同,这就要求生产生产装配工序也有差异,市场竞争促使企业不断追求创新,新产品新工艺,这些都是生产要求不是一个普通的自动化设备能够适应的. 目前应用广泛的非标设备属于自动锁螺丝机,我们日常接触到的商品,如:手机,电脑,电视,玩具等这类产品一般都需要螺丝锁付,每种这样的产品样式各不相同,同一种产品也有不同型号,这些螺丝锁付的工作没有一件设备能够适
应所有产品.下面我们来看几个案例就明白了 五轴自动拧螺丝机的应用案例 五轴自动拧螺丝机是多轴式的一个分支,这里的五轴自动拧螺丝机采用的是固定式的设计方案,产品需要锁付的螺丝孔位排列极不规律.如下图所示: 这个是多轴自动拧螺丝机的一个优势,多轴自动拧螺丝机的轴位可以根据,产品的生产要求来设计,可以看到该产品铜线圈需要锁付3颗螺丝,右侧的散热
风扇需要锁付2颗螺丝, 采用多轴式自动拧螺丝机的好处在于,5颗螺丝可以同时锁付,保证的力矩的平衡性, 螺丝孔位较小,传统锁螺丝机不能保证质量,尤其是对散热风扇的两个螺丝锁付. 多轴自动锁螺丝机可提高产品质量 一次即可完成5颗螺丝的锁付,大大提高的工作效率, 一人操作即可,减少工位,节省人工成本, 操作简单,作业员只需将带锁付产品组装放入夹具.按下启动按钮即可. 电饭煲生产线的八轴自动拧螺丝机 这款八轴自动拧螺丝机是根据该产品的特点和要求设计的,电饭煲作为生活必需品,关于饮食方面的产品,消费者在选购的时候是比较细心的,电饭煲在生产加工过程中是比较讲究的,要保证品质,清洁卫生,不能有划痕,该厂生产电饭煲盖采用的是传统的锁螺丝机方式,面对消费者对品质细节越来越高的要求.开始让厂家有些困惑. 提高产品的质量和生产效率,当然要靠自动化设备,设备的好处在于能够精确定位,质量易控制,效率能快速提高.
双工位自动锁螺丝机设备使用说明书 产品型号：JFT-S02 版本：V2015.04 申明 感谢使用巨丰泰自动锁螺丝机产品。为了更好的发挥本设备作用，在节省人力的同时提高生产效率，更为了保障使用者的安全和健康，请务必在使用前阅读本说明书。 对于未接触过自动化设备的使用者，初次使用本设备时，难免会有一段学习和熟悉过程。我司除了在交付现场对客户进行操作培训外，也会在其后给予各种技术支持。同时本设备已充分考虑了防呆及易操作性，使用者遇到故障时无需焦虑，严格按照使用说明操作，即可避免和解决大部分问题。 机器操作时切记注意安全！正常工作时严禁将手或其它任何物品伸进机械手及 Z轴工作区间。应学会正确使用急停按钮。 本设备内含多种精密传感器，虽有一定防护，但无法阻止粗暴操作带来的破坏。例如螺丝供料器上的光电传感器，其与吸嘴距离很近，关机时如随意推动Z轴，螺丝吸嘴就有可能与之碰撞而导致其失效。因此类不当操作而造成的设备故障，我司将依照售后条款收取维修费用。 自动化设备的稳定工作与日常保养维护密切相关。我司已尽可能将维护项目简化，并编写了《自动锁螺丝机保养及操作说明》。请认真执行。 本设备含有消耗材料，详见《自动锁螺丝机常备耗材清单》。耗材会随着使用 时间而逐渐失效。耗材的失效不属于机器质量问题，请根据使用说明定期检查及更换。部分耗材必须使用我司原厂正品（详见清单）。 使用过程如有疑问和建议，欢迎致电，我们将竭诚为您服务。 设备说明 1：设备介绍： 巨丰泰自动锁螺丝机系列，广泛应用于手机，U盘，遥控器，PCB板等电子 行业。包含人工取料型、机械手取料型、加大工位型、双种螺丝型等多种型号。 可以根据不同的产品编写程序进行螺丝的锁附。 2 ：主要技术参数：
聚合酶链式反应及其在基因诊断中的应用 聚合酶链式反应于1983年由美国Cetus公司的发明，并和定点突变的发明者一起荣获1993年度诺贝尔化学奖，为生命科学领域的研究开创了崭新时代。 一、PCR反应原理和反应过程 DNA的体外复制包括3个步骤： 变性（denaturation）:94 ?C ~95 ?C 退火（annealing）:40 ?C ~70 ?C 延伸（extension）:72 ?C 3个步骤作为PCR的一个循环，每当完成一个循环，一个分子的模板被复制为二个，产物量以指数形式增长。 二、PCR的反应体系和反应条件 （一）PCR反应体系 参与PCR反应的主要成份: 模板、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶和缓冲液等。 1 模板 包括基因组DNA、RNA、质粒DNA、线粒体DNA等。RNA作为模板时，须先将RNA 逆转录为cDNA，再以 cDNA作为扩增的模板。模板量：1000ng、500ng、100ng、50ng? 2、引物（Primers） 引物决定PCR扩增产物的特异性和长度，是化学合成的寡核苷酸片段。引物的 合成可以采用化学方法。引物设计时必须遵循一些原则。 设计引物的原则： 1）二条引物分别位于被扩增片段的两端，与模板正负链序列互补 2）长度为18 ~ 25个核苷酸 3）二条引物之间避免形成引物二聚体 4）引物的碱基组成应平衡 5）引物退火温度计算：Tm=2（A+T）+（C+G）
6）引物的5`端可被修饰（引入酶切位点、引入突变位点、生物素等标记） 3、脱氧核苷三磷酸（dNTP） 是dATP、dCTP、dGTP和dTTP4种脱氧核苷三磷酸的混合物。反应体系中各种核苷酸的浓度必须一致，浓度过高虽能加快反应速度，但非特异性扩增也随之增加 dNTP浓度：20 ~ 200umol/L,浓度升高增加非特异性扩增。 4、DNA聚合酶 从一种生活在热泉（80℃~90℃）中的水栖噬热菌（Thermus aquaticus, Taq）中提取，有很高的耐热稳定性。 Taq 酶的作用:模板指导下，以dNTP为原料，在引物3’-OH末端加上脱氧单核苷酸，形成3’, 5’ -磷酸二酯键，使DNA链沿5’→3’方向延伸，催化DNA合成。 最适酶量：（酶量过多，导致非特异性扩增） Taq DNA聚合酶复制的保真性，Taq DNA聚合酶无3’→5’外切酶活性，因而无校正功能，在复制新链的过程中会发生碱基错配。Taq DNA聚合酶在每次循环中产生的移码突变率为1/30000，碱基替换率为1/8000，故扩增的片段越长，错配的机率越高。 耐热的 DNA多聚酶有Pwo DNA polymerase、Tth DNA polymerase、Pfu DNA polymerase具有较高的热稳定性，较高的保真性，降低碱基错配率2 ~ 10倍。 5、镁离子浓度 镁离子浓度是一个至为关键的因素，对于反应系统本身、稳定核苷酸和提高Taq 酶的活性有直接影响。虽然Taq 酶的活性只与游离的Mg2+浓度有关，但PCR反应体系中dNTP、引物、模板DNA及鳌合剂的存在均可与Mg2+结合而降低游离Mg2+的浓度从而影响酶的活性。 当dNTP浓度为200umol/L时，MgCl2的浓度为L较宜。 6、其它反应因素 pH：调节至酶反应所需的最适pH（ pH =左右） 盐：合适的盐浓度有利于稳定杂交体，有利于引物与模板杂交 基质：BSA、gelatin 、Tween20、DTT等（牛血清白蛋白或明胶等基质可以保护Taq 酶的活性） （二）PCR的反应条件 反应温度（变性、退火、延伸） 反应时间（变性、退火、延伸）
东莞市领航者自动化设备有限公司 当使用一台自动锁螺丝机时，过程中如出现因振动造成零部件位置变化或者所使用螺丝规格不同，需要调试的。需要先把设备调试完成才能确保自动打螺丝机的正常运行。以下内容是针对市场上常见的锁螺丝机所总结出来的一些调试方法。 希望能帮助每位客户合理的使用螺丝机。 工具/原料 自动锁螺丝机一台 方法/步骤 1.调节螺丝通过板 观察及调节螺丝通过板高度使其略高于螺帽0.2-0.3MM。 2.传感器调节 当螺丝位于传感器发射端与接收端中间时，机器感应到螺丝，分料起停止转动，LED灯亮；当没有感应到螺丝时，分料转盘持续转动，LED灯灭。要观察及调节感应器高度（传感器调整螺丝）。 3.I/O调试 1. 首先确保所有感应开关输入与电磁阀输出都按照系统提供商提供的系统输 入输出列表上的顺序接入控制器的输入输出口。 2. 确保气缸能够在行程内安全运作的情况下手动按照系统提供商提供的配线 IO列表点动操作电磁阀，观察电磁阀的开闭与气缸运动状态是否正常，如果
电磁阀输出状态与气缸状态不相符请调换相应气缸上的气管，如点动电磁阀气缸没相应则检查是否有气输入且总气阀是否已经打开。 3. 断掉总气，进入系统的I/O操作界面，手动移动气缸，将气缸从原位与动 位两个状态之间来回切换，观察该气缸相应的原位、动位输入到位信号是否正确输入（灯亮即为有输入），如果原位与动位的到位信号相反则更换接入到两个输入口上面的信号线即可，如果其中一个输入口始终没有信号输入则排查感应开关是否正确接入相应的输口或感应开关是否为低电平输出形式。 4. 进入系统的I/O操作界面，在确保气缸能够在行程内安全运作的情况下按 顺序逐个点击界面上的输出口控制按键，观察其相应的到位信号是否正确输入。 4.轨道及分料模块调节 轨道与分料盘之间保持有一定的间隙，如轨道与分料盘撞击，将会出现分料盘反复正反转的现象；若该间隙过大，螺丝则可能卡在间隙初或落入机器内部； 若轨道与分料板有接触，则摩擦增大即使调大振动，螺丝亦输送不畅。调节方法：松开轨道固定螺丝（轨道调节孔处），将轨道推拉至合适位置，固定轨道，松开分料模块固定螺丝，将分料模块左右、上下移动，使分料板不与轨道有接触，同时分料盘面与轨道面相平或略低，且轨道出口正对分料盘缺口，最后固定分料模块。 5.轴运动调试 1. 进入参数设置界面，确保各种参数已经设置并且正确设置。如出厂设置里 的步数/转、传动比设置，速度参数设置里的回零速度、加速时间、减速时间
螺丝机控制器-手持版说明书V.汇总
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双Y轴智能螺丝机控制系统QZ－LS0３（手持盒版） V６．4说明书 东莞市领航自动化有限公司
目录 1.产品介 绍.．....................................................................................................．．3 1.1产品概述....． (3) 1.2功能简介 (3) 1.3功能特性 (3) １.4产品列表．． (4) 2.接线说明图.．． (5) ２.１控制器接线引脚定义．...．..…………………………………………………………………………………．５2.2 控制器接线说明……. ....．.…………………………………………………………………………………. ６ 2.3系统连接示意图..........． (7) 2.４转接板接线说明...．. (8) 2.5 转接板接线示意图.………………………………………………………………………………．………. ９ 2.６安装尺寸....．.．．.. (10) ３．按键说明．.．.． (11) ３.1手持盒按键图...........．....．.............................................................................................1１3.2手持盒按键说明......．.．．．．．..............................................................................................１1 4.手持盒操作说明.．....．.. (13) 4．1开机画面介绍..........．..．..．．. (13) 4.2主菜单功能介绍．.........．....．.． (15) 4.3新增功能操作.........．.．...．.. (19) 4．４插入指令操作..............．.．..........................................................................................．20 4．５删除指令操作............．．. (20) 4.6复制指令操作……….....．．.……………………………………………………………………………….２0４.7阵列复制操
聚合酶链式反应技术 引言：聚合酶链式反应（PCR）是20世纪80年代后期由K.Mullis 等建立的一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物，以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。由于反应循环可进行一定次数，所以在短时间内即可扩增获得大量目的基因。PCR技术具有灵敏度高、特异性性强、操作简便等特点。虽然PCR技术也存在出错倾向高、产物大小受到限制和必须预先有目标DNA序列等缺点，但仍被誉为20世纪分子生物学研究领域最重大的发明之一。Mullis也因贡献卓著而获得1993年度诺贝尔奖。目前，PCR技术已广泛应用于分子生物学的各个领域，在分子克隆、法医学鉴定、DNA序列分析、致病基因的检测及考古学等方面都发挥着重要作用。 操作过程： 聚合酶链式反应用于扩增一小段已知的DNA片断，可能是单个基因，或者仅仅是某个基因的一部分。与活体生物不同的是，PCR 只能复制很短的DNA片断，通常不超过10kbp。DNA是双链分子，因此用互补DNA双链的构造单位（核苷酸）来度量其大小，单位为碱基对（base pair, bp）。某些特定的方法可以扩增40kbp左右的片断，但是这种大小与真核细胞的染色体DNA相比仍然是很少的。例如，人的体细胞DNA含有大约30亿个碱基对。目前应用的聚合酶链式反应需要几个基本组成： 1、DNA模板（template），含有需要扩增的DNA片断。
2、2个引物（primer），决定了需要扩增的起始和终止位置。（见下面引物一节） 3、DNA聚合酶（polymerase），复制需要扩增的区域。 4、脱氧核苷三磷酸（dNTP），用于构造新的互补链。 5、缓冲体系，提供适合聚合酶行使功能的化学环境。 聚合酶链式反应在热循环设备中进行。PCR仪可以将反应管加热或冷却到每步反应所需的精确的温度。为防止反应体系中液体产生蒸气，通常在反应管上加盖加热的盖子（比加热板温度来的高），或者在反应体系表面加入一层石蜡油。 引物 特定的引物决定了所扩增的DNA片断。引物是人工合成的短DNA片断，一般不超过50个碱基（通常18－25个），它们与所要扩增的DNA片断的起始和终止区域完全互补。在“黏合”时引物结合于DNA模板的起始和终止点，DNA聚合酶结合到这两个位置，开始合成新的DNA链。 选择引物的长度和熔点（Tm）要考虑许多条件。引物的熔点与聚合酶链式反应第一步中DNA的熔点不同，是指50％的引物与模板结合的温度，高于这个温度引物与模板就不能有效结合。这个温度随着引物长度的增加而升高。如果引物长度太短，就有可能与DNA模板的几个位置结合，造成非特异性复制。另一方面，引物长度也受限于Tm。如果Tm太高，即高于80℃，也会导致问题，因为DNA聚合酶在此温度下活性较低。引物最优长度通常为20到40个碱基，熔
自动锁螺丝机(GSCD-AT)使用手册 本手册版权归深圳市港晟机电有限公司所有，未经港晟机电有限公司书面许可，任何人不得翻印、翻译和抄袭本手册中的任何内容。涉及GSSA-AT软件的详尽资料以及介绍和程序制作范例，请参阅GSSA-AT 软件使用手册。本手册中的信息资料仅供参考。由于改进设计和功能等原因，港晟机电有限公司保留对本资料的最终解释权！内容如有更改，恕不另行通知！ 调试机器要注意安全！软件中已加入出错处理程序及提示，用户必须在机器中设计的安全保护装置有效时进行操作。否则所造成的损失，港晟机电有限公司将不对此负责。 产品简介 GSSA-1AT是港晟机电有限公司自主研发制造的自动锁螺丝机器。它可以提高生产效率，产品合格率，降低工人的劳动强度。本机采用三轴步进电机、精密丝杆作为运动组件，PC软件控制。具有操作简便，高速、高精度、程式制作简单、方便、快洁，同时多机互换程序不用调试，系统的高稳定性等特点。 第一章硬件概述 第二章软件概述
第三障：信号灯定义与故障处理 第一章硬件概述 (2) 1.1 产品特点 (2) 1.2机器参数 (2) 1.3硬件介绍 (2) 1.1 产品特点 ●高速----------移动速度(MAX—1M/S),锁螺丝速度(均值1.2~1.4秒/颗。●高精度--------300MM内行程定位精度(+/-0.04MM), 300MM重复定位精度(+/-0.01MM) ●操件简单------从程式制作到生产,按作业指导步骤进行，所有程式不用调试，可直接生产。 ●多机互换程序不用调试-----同一产品，在不同机器间可以随意更换，不用调试，可直接生产。 ●高智能,出错处理程序及提示------PC软件介面出错提示，机器在安全装置有效时自动处理。 ● PC软件控制----方便序程序及备份。程序名称可自定义，方便管控。 ●对产品质量控制考虑细微,最大化提高产品质量-----用户可在软件中自定义每颗螺丝中螺丝夹头距工件表面的高度，(夹头与批头电机驱动)机器会自动精确控制高度。防止工件表面画伤。 ●机器硬件,通用性良好 ----多种类螺丝转换只需更换螺丝夹头及螺丝批头即可。方便且快洁，三到五分钟即可完成更换。 ●人性化设计----- 从操作上到所有设计的出发点，就是降低人的劳动强度及减小人对生产的影响。 1.2 机器参数: 工作温度：-10℃～40℃ 贮存温度：-20℃～80℃
实验二聚合酶链式反应（PCR） 一、实验原理 聚合酶链式反应（PCR）是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异DNA片段的技术。它应用热稳定的聚合酶，通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，DNA片段以指数方式增加了百万倍。从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起始，可产生ug量的PCR产物。 二、器材与试剂 1.器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪 2.试剂：引物，模板，Taq DNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与Mg2+，H2O, 2*PCRmix 溶液，DNA染料 三、实验步骤 PCR反应体系的建立 取离心管，依次加入试剂混匀 1．H2O 12μl 2．模板 1μl 3．引物T7 1μl 4．引物 sp6 1μl 5．2*PCRmix 15μl PCR仪的热循环反应 把离心管放入PCR仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成 1.模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链 或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 2.模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至56℃ 左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； 3.引物的延伸：经加热至72℃左右DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的 作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复该循环30次，每次需要2-3分钟。 电泳检测结果 扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示加入的为1号样，出现在500bp左右条带，而预算结果为扩增出492bp条带，故实验成功。
吹气式螺丝机操作说明
额定电压：AC 220V，50/60HZ 最大电流：6A 工作气压：0.6Mpa – 0.7Mpa 备注：电源线请可靠接地
一．吹气式锁螺丝机机台参数：
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本机台专为自动锁螺丝设计制造，使用可编程序控制器 PLC 和 HMI 触摸屏做主控核心，提供 了强大的系统稳定性和可定制维护性。操作简便的直接控制界面，调试人员不需要具备任何专业 知识。可根据客户产品需求（如尺寸，产品存储数，产品锁付量等），提供相适应的机台。调试 人员对产品进行调试后，操作工人只需进行定时加螺丝，放上产品，按启动按钮，取下产品，即 可完成生产。
三．吹气式锁螺丝机开机画面
二．吹气式锁螺丝机机台功能简述：
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四、螺丝机菜单页面
手动画面：进入分解动作手动控制页面
下拉菜单 2.各轴手动调试：分解动作手动控制 3. 轴回原点：每次开机或异常停止后，在进行自动运行前需要进行一次对三轴原点坐标确认寻 找动作。
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五．螺丝坐标参数设定
自动界面：自动启停、生产统计与清除。
控制系统单轴提供 8 颗螺丝容量，可以根据需要进行定制设定 2.螺丝数量：此产品锁付螺丝颗数 3.左放位为左 Y 轴坐标点设置；中放位为横移轴座标点。
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聚合酶链式反应 聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。 PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物和单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。 PCR原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参和下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶 耐热DNA聚合酶--Taq酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于和靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它和引物结合，为下轮反应作准备； ②模板DNA和引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物和模板DNA单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对和半保留复制原理，合成一条新的和模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 反应准备 聚合酶链式反应PCR反应体系 10×扩增缓冲液10μl P-F 0.5ul 4种dNTP混合物（终浓度）各100～250μmol/L P-R 0.5ul 引物（终浓度）各5～20μmol/L Go Taq 酶5ul 模板DNA0.1～2μg模板DNA 0.5ul Taq DNA聚合酶5～10 U H2O 3.5ul Mg2+（终浓度）1～3mmol/L 补加双蒸水100 μl 其中dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶以及Mg2+的加量（或浓度）可根据实验调整。 PCR反应五要素： 引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。 PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。 模板即扩增用的DNA，可以是任何来源，但有两个原则，第一纯度必须较高，第二浓度不能太高以免抑制
高中生物聚合酶链式反应技术2019年3月21日 （考试总分：100 分考试时长： 120 分钟） 一、单选题（本题共计 20 小题，共计 100 分） 1、（5分）下列对于相关实验共性的叙述，错误的是 A．“分离绿叶中的色素”和“胡萝卜素粗品的鉴定”都要用到纸层析法 B．“分离土壤中分解尿素的细菌”和“菊花的组织培养”都要使用琼脂 C．“果酒制作”和“探究酵母菌细胞呼吸方式”都用重铬酸钾检测酒精 D．“分离纯化大肠杆菌”和“分离纯化血红蛋白”都要使用差速离心法 2、（5分）下列关于生物技术应用的叙述，正确的是 A．从酶的固定方式看，物理吸附法比化学结合法对酶活性影响小 B．作为消化酶使用时，蛋白酶制剂只能以注射的方式给药 C．加酶洗衣粉中酶制剂可以被重复利用，提高了酶的利用率 D．将海藻酸钠凝胶珠用自来水冲洗，可洗去多余的CaCl2和杂菌 3、（5分）下列关于PCR技术的叙述，错误 ．．的是 A．PCR技术的基本原理是DNA双链复制 B．每次循环可分为变性、复性和延伸三步 C．参与PCR的物质有引物、酶、脱氧核糖、模板等 D．一个模板DNA分子第n次循环需要2n-1对引物 4、（5分）平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是 A．采用平板计数法获得的菌落数往往多于实际的活菌数 B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环连续划在固体培养基表面 C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基中进行培养 D．与平板划线法相比，稀释涂布平板法形成单菌落的效果更好 5、（5分）关于电泳的说法不．正确的是 A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C．蛋白质在醋酸纤维薄膜上的移动速度取决于它所带净电荷的多少 D．电泳后需经染色、漂洗和脱色，才可长期保存 6、（5分）下列关于“DNA粗提取和鉴定”实验的叙述，正确的是 A．酵母菌、菜花和猪的成熟红细胞都可作为提取DNA的材料 B．在酒精溶液中，某些蛋白质的溶解度比DNA大 C．在研磨植物细胞时加入洗涤剂是为了溶解DNA D．在50～60 ℃的水浴中，DNA遇二苯胺试剂后即呈蓝色 7、（5分）PCR(多聚酶链式反应)技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，如图表示合成过程。下列说法错误的是 A．甲过程高温使DNA变性解旋，该过程不需要解旋酶的作用 B．丙过程用到的酶在高温下失活，因此在PCR扩增时需要再添加 C．如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，循环3次后，在形成的子代DNA 中含有15N标记的DNA占25% D．PCR中由碱基错配引起的变异属于基因突变 8、（5分）下列哪些是进行PCR扩增所必需的条件 A．限制酶 B．DNA连接酶 C．Taq酶 D．解旋酶 9、（5分）下列关于生物工程中常见的几种酶的叙述，正确的是 A．DNA连接酶可把目的基因与载体的黏性末端的碱基黏合，形成重组DNA B．纤维素酶是细胞工程中常用的工具酶，可获得单个动物细胞 C．Taq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA聚合酶 D．纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体，便于植物杂交育种 10、（5分）“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在P CR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示，其中第⑤种DNA分子有几个： A．2 B．4 C．6 D．8 11、（5分）生物产品的分离、纯化是现代生物技术中一种常见的技术。下列关于物质提取、纯化原理的叙述中，不正确的是 A．采用凝胶色谱法分离果胶酶的原理是蛋白质分子的相对分子质量不同，在色谱柱中的移动速度不同B．使用透析法可以去除样品中相对分子质量较大的杂质 C．电泳法是利用样品中各种分子带电性质和数量以及样品分子大小不同，产生的迁移速度不同而实现样品中各种分子的分离 D．离心法分离蛋白质的依据是不同大小的分子离心时沉降速度不同 12、（5分）要将菊花茎段细胞培养成完整的植株，无需 A．选用生长旺盛的嫩枝 B．离体状态并且具有完整细胞核的细胞 C．导入外源基因
WS/T 230-2002 临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 Guidelines for use of polymerase chain reaction (PCR) technique in clinical diagnosis 1范围 本标准规定了临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用准则。 本标准适用于各级，各类的医疗、卫生、保健机构应用PCR技术进行临床诊断。 2定义 本标准采用下列定义。 2.1引物primer 与待扩增靶DNA片段两端互补的寡核昔酸，其本质是单链DNA(ssDNA)，在DNA聚合酶的作用下能进行延伸，从而合成新的互补链。 2.2模板template 待扩增的靶DNA或RNA链，包括人类基因组DNA、质粒DNA、噬菌体DNA、eDNA和mRNA、 扩增后的DNA产物等几乎所有形式的DNA或RNA。 2.3变性denaturation DNA或RNA由双链转变为单链状态，加热、提高pH或加入甲酰胺、脲等试剂都可使双链DNA或RNA发生变性。 2.4 退火annealing 引物与互补的核苷酸序列在合适的温度下通过氢键形式相互结合的过程。 2.5 延伸 extension 在合适的条件下，由DNA聚合酶（如：Taq酶）催化引导引物DNA链延伸的合成过程。 2.6 污染 contamination 由来源子非待测样品的核酸所引起的一个样品、一系列样品或试剂的非特异性扩增或扩增后在产物分析过程中造成的样品之间的污染，污染通常引起假阳性结果。 2.7 遗留污染 carry-over contamination 同一类靶序列上一次PCR扩增产物对以后扩增反应的后续污染。 2.8 内对照 internal control 在同一反应混合物体系中与待测靶核酸同时进行扩增反应的已知对照物。 2.9 Taq DNA聚合酶 Taq DNA polymerase
多工位螺丝成型机电气控制系统使用说明书 安装、使用产品前，请阅读 南京诺灵斯电气有限公司
思进螺丝机SJBF-83S电气操作说明书前言 目录 一、二、三、四、 1、 2、 3、 4、 5、 6、五、注意事项 主要技术参数 电气安装 电器操作说明 控制箱 操作程序 指示面板 计数器使用说明 电流表使用说明 转速表使用说明 附：电路图 1
思进螺丝机SJBF-83S电气操作说明书一、注意事项 1、必须熟读本说明书，了解说明书的内容后方可操作设备，否则 会有设备及人身事故隐患； 2、用户连接电源线及电机线时必须注意按技术要求选用导线并 要与接线端子直接紧固； 3、设备必须在有可靠接地后才能通电，零线与保护接地线不能混 接； 4、只有电气专业人员才可开门通电工作，正常生产时柜门必须关 闭，以防有害物质浸入； 5、热继电器出厂时已经设定，不能超标设定，否则不能起保护作 用而烧毁电动机； 6、调换的电器元器件规格应符合图纸要求，否则容易损坏设备； 7、机床及其模具检修、以及人的身体任何部位进入模腔前，机床 必须停机，以防出现人身安全事故！ 2
思进螺丝机SJBF-83S电气操作说明书二、主要技术参数 1、电源参数： 总容量：≥27KVA 额定电压：AC380V±10% 频率：50Hz ±5% 额定电流：≥ 50A 2、环境要求 工作环境温度：5-40℃ 工作环境湿度：＜85%RH（不结露） 海拔高度：≤1000m 工作环境：无腐蚀性、可燃性气体，无大量导电性尘埃（灰尘） 3、防护等级：IP54 3
思进螺丝机SJBF-83S电气操作说明书三、电气安装 1、该电气柜安装在机床的正面，置于高出地面100mm的水泥平台 上，按柜内四个安装孔配四个膨胀螺丝进行固定。 2、该机采用三相五线制供电（L1,L2,L3,N,PE），进线请采用10mm2 以上动力线。机床的电机线按线号接入电气柜内，另将三根连接 电缆的航空插头插上，（一只为61芯，一只为53芯，一只为10 芯，不可错位）。这样就完成了该机器的接线工作。 注意：可靠接地。 3、本电气柜上装有开门断电装置。 4