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小球藻鉴定基因的筛选及几株高产油微藻的分子鉴定

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Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，１２（６）：７９５—７９８　Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ⑥２０１１，Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　ＨＡＡＳ．Ａｌｌ　ｒｉｇｈｔｓ　ｒｅｓｅｒｖｅｄ　

Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｇｅｎｅ　ｆｏｒ　Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｉｌ－－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　Ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ　

ＨＥ　Ｒｕ’’　，ＬＩＵ　Ｊｕｎ－ｈａｎ’，ＷＡＮＧ　Ｓｈｉ－ａｎ’，ＬＩ　Ｆｕ－ｌｉ’　１．Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｅｎｅｒｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６１０１；２．Ｇｒａｄｕａｔｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１　０００４９　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　『Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｈｅ　ａｉｍ　ｗａｓ　ｔｏ　ｓｅｌｅｃｔ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｇｅｎｅ　ｆｏｒ　Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｔｈｅ　ｏ．Ｉ．ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ．［Ｍｅｔｈｏｄ］　Ｆｏｕｒ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ　ｇｅｎｏ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ｒＤＮＡ　ｏｆ　ｔｈｅ　１８Ｓ　ｒ开』　ｇｅｎｅ，ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　ｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ），ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　ｓｐａ，ｃ－　ｅｒ　ＩＩ（ＩＴＳ　ＩＩ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ　ｒｂｃＬ　ｇｅｎｅ。ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｆｏｒ　Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｌｈｅｓｅ　ｆｏｕｒ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ　ｇｅｎｅｓ，ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｉｎｔｒａ—ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ・ｓｐｅｃｉｅｓ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｔｏ　ｃｈｏｏｓｅ　ｔｈｅ　ｒｉｇｈｔ　ｇｅｎｅｓ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｏｉｌ－　ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｃｈ／ｏｒｅ／／ａ．Ｏｎ　ｔｈｉｓ　ｂａｓｉｓ．ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｇｅｎｅ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｆｏｒ　ｆｉｖｅ　ｆｒｅｓｈ—ｗａｔｅｒ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　Ｃｈ／ｏｒｅ／／ａ，ｗｈｉｃｈ　ｏｉｌ．ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　３ｏ％．ｆ　Ｒｅｓｕｌｔ］，丁ｓ　ｇｅｎｅ　ｗａｓ　ａ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｇｅｎｅ　ｂｅｃａｕｓｅ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｈｉｇｈ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｈｏｒｔ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｌｅｎｇｔｈ，ｍｅａｎｗｈｉｌｅ　ｉｔｓ　ｇｅ－　ｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎｔｒａ—ｓｐｅｃｉｅｓ（０．４３９　６±Ｏ．１３５　９）ＷＥｔＳ　ｌａｒｇｅｒｔｈａｎ　ｉｎｔｅｒ－ｓｐｅｃｉｅｓ（Ｏ．Ｏ４５　７±Ｏ．０８４３）．Ｉｔｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｖａｒｉｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｗｈｅｒｅａｓ　ｈｉｇｈｌｙ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｓｐｅｃｉａｓ．Ｂｙ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，秆ｖｅ　ｈｉｇｈ　ｏｉＩ－ｃｏｎｔｅｎｔ　ｓｔａｉｎｓ　ｗｅｒｅ｛ｄｅｎ－　ｔｉｆｅｄ　ａｓ　ｏｎｅ　ｖｕｌｇａｒｉｓ。ｔｗｏ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆＧ　ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａａｎｄｔｗｏ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ａｌｇａｅＣｈｌｏｒｅｌｌａ　ｓｐ．［Ｃｏｎｄｍｉｅｎ】Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ　ｈａｄ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅ　ｐｏｅｌ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｏｉｌ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｆｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　ｓｐａｃｅｒｓ，１８Ｓ　ｒＲＮＡ　ｇｅｎｅ；Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　

Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｉｓ　ａｎ　ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ　ｂｉｏ—ｅｎｅｒｇＹ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａＩ．ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｗｉｄｅｌｙ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｆａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｔｅ，ｓｔｒｏｎｇ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎ－　ｔａＩ　ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｆａｔ　ｃｏｎｔｅｎｔ…．Ｃｈｌｏｒｅ／ｌａ　ｈａｓ　ｍａｎｙ　ｖａ－　ｒｉｅｔｉｅｓ。ａｎｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｓｈｏｗ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ａｄａｐｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｆｏｒ　ｅｘａｍｐｌｅ，ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖｅ　ｔｅｍＩｐｅｒａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒ－　ａｎｔ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｒａｎｇｅ　ｆｒ０ｍ　２６　ｔＯ４２℃　Ｊ．Ｔｈｅ　ｃｌａｓｓｉ－　ｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｆｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　Ｃｈｌｏｒｅ＃ａ．ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｖａｒｉ・　ｅｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｅ／ｌａ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅｉｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｓｈｏｗ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈ／ｏｒｅ／／ａ　ａｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｉＩ．　Ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｌｇａｅ　ｓｌ０ｅｃｉｅｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｅａｎｓ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｏｐｔｉｃａｌ　ａｎｄ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｉｎｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｌｇａｅ　ｃｅｌｌｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ　ｃｅｌｌｓ　ａｒｅ　ｓｍａｌ１．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｓｈｏｗ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｍｅｎｓｔｒｕａＩ　ｃｙｃｌｅ，　ｔｈｕｓ　ｍａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｏｒｅ　ｄｉｆｉｃｕｌｔ　．　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｍｅａｎ　ｏｆ　ｍｏｄｅｒｎ　ｔａｘｏｎ－　ｏｍｙ．ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｆａｓｔ．ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｂｅ　ｍａｓｔｅｒｅｄ，ｔｈｕｓ　ｂｅｉｎｇ　ａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉ－　ｃａＩｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｌｇａｅ．Ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　ｖａｒｉｅｔｙ　ｏｆ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｄｅｎ－　ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｒａｎｄｏｍ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ　ｐｏｌｙｍｅｒ・　ｐｈｉｓｍ（ＩＳＳＲ）ａｎｄ　ｏｔｈｅｒｓ。ｗｈｅｒｅａｓ　ｇｅｎｅ　ｊｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ。ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ａｎｄ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ａｎａｌ－　Ｖｓｉｓ．Ｉｔ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｉｎｓｅｃｔｓ，ｂｉｒｄｓ，ｆｅｅｄｉｎｇ　ｍａｍ－　ｍａｌｓ　ａｎｄ　ｓｏｍｅ　ｐｌａｎｔｓ．ｂｕｔ　Ｉｅｓｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　Ａｌｇａｅ．Ｍａｎｙ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，　ｆ０ｒ　ｅｘａｍｐｌｅ，ｔｈｅ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｏｘｉｄａｓｅ　Ｉ（Ｃｏｘ　Ｉ）ｉｓ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｉｍａｌｓ　Ｌ　．ｗｈｉｃｈ　ｊｓ　ｎｏｔ　ａｄａｐｔ　Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ｍａｙ　１８，２０１１　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：Ｊｕｎｅ　２１，２０１１　Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｋｅｙ　Ｐｒｏｊｅｃｔ　ｏｆ　Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｊｅｃｔ　ｏｆ　Ｃｈｉ・　ｎａｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＫＧＣＸ２・ＹＷ－３７４－３）；Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｐｒｏｊｅｃｔ　ｏｆ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（２００８ＧＧ２０００７００２）．　￥Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　Ａｕｔｈｏｒ．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｆｔ＠ｑｉｂｅｂｔ．ａｃ．ｃｎ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈｅｒ　ｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ｇｒｅｅｎ　ａｌｇａｅ．１８Ｓ　ｇｅｎｅ（１　８Ｓ），ＩｎｔｅｒｎａＩ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　Ｓｐａｃｅｒｓ（，　）ａｎｄ　ｌｎｔｅｒｎａＩ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　Ｓｐａｃｅｒｓ　２（，　），ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｇａｅ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｍｅｄｉｃｉｎａＩ　ｐｌａｎｔｓ。ｃｈｌａｍｙｄｏ－　ｍｏｎａｓ　ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ．ｄｉａｔｏｍｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ａｌｇａｅ，ａｒｅ　ｈｏｔ　ｇｅｎｅｓ　ｔｈａｔ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｓｔｕｄｉｅｄｕ５－７］．Ｌａｒｇｅ　Ｓｕｂｕｎｉｔ　ｏｆ　Ｒｉｂｕｌｏｓｅ－１．　

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小球藻Chlorella sp. MEM25的分离鉴定及耐受性试验

小球藻Chlorella sp. MEM25的分离鉴定及耐受性试验

标识码( ＯＳＩＤ)
ＬＵ Ｘｉａｎｇｎｉｎｇ １ ꎬ ＺＨＥＮＧ Ｘｉｎｇ １ ꎬ ＬＵ Ｙａｎｄｕ ２
(１.Ｆｕｑｉｎｇ Ｋｉｎｇｄｎａｒｍｓａ Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ Ｃｏ. ＬＴＤꎬ Ｆｕｚｈｏｕꎬ Ｆｕｊｉａｎꎬ ３５０３００ꎻ ２.Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍａｒｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ
Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｈａｉｋｏｕꎬ Ｈａｉｎａｎꎬ ５７０２２８)
７.０ ％组的 Ｆｖ / Ｆｍ.
１.４.２ 光照对藻种生长的影响 将培养一段时间后的 ＭＥＭ２５ 和 ＩＭＥＴ１ 离心收集ꎬ取藻泥接种于无菌 Ｆ２
液体培养基ꎬ置于温度 ２５ ℃ 、每天光照时间为 ２４ ｈ、光强分别为 ５０ 和 ２００ μｍｏｌｍ －２ ｓ －１ 的培养箱中培
养ꎬ于 ２、４、６、８ ｄ 测定各试验组的 Ｄ ７５０ ｎｍ ꎻ于 ０、１、３、６、１２、２４、４８、９６ ｈ 测定 ２００ μｍｏｌｍ －２ ｓ －１ 组的 Ｆｖ / Ｆｍ.
ｍｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＥＭ２５ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ １２.６５×１０７ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｍＬ －１ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｄａｉｌｙ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ ３.３１×１０７ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｍＬ －１
ｉｎ ｏｕｔｄｏｏｒ ｃｕｌｔｕｒｅ. Ｔｏｔａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎ ＭＥＭ２５ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ４９.５％ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａ ｍａｒｉｎｅ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ ＭＥＭ２５ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｂｒｉｎｅ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｐ. ｖｉａ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎａｌｙ￣
小球藻属DNA条形码的鉴定研究

小球藻属DNA条形码的鉴定研究

2021年第2期海洋开发与管理69小球藻属DNA条形码的鉴定研究张稚兰】，邢炳鹏12(1.自然资源部第三海洋研究所厦门361005,2.自然资源部北部湾滨海湿地生态系统野外科学观测研究站北海536015)摘要：为探讨小球藻鉴定的新方法以及评估小球藻属DNA条形码候选序列的鉴定作用，文章对20株小球藻的线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基I(COI)、核基因组rDNA的内转录间隔区(ITS)以及核酮糖1,5-二磷酸竣化酶(rbcL)3个片段进行PCR扩增测序，并对各序列进行生物信息学分析。

研究结果表明：COI、ITS和rbcL序列在20株小球藻中的扩增和测序效率均呈阳性,扩增成功率分别为76%、83%和70%；经评估，COI、ITS和rbcL序列作为DNA条形码在小球藻分类鉴定中均不适合较低的分类单位，但可参考动植物的分类方法，将多个片段组合应用，从而筛选不同进化级别的DNA条形码。

关键词：小球藻；DNA条形码；分类鉴定；物种；基因中图分类号：Q919.21文献标志码：A文章编号：1005—9857(2021)02—0069—08Assessment of Candidate DNA Sequencesfor Barcoding of the Genus ChlorellaZHANG Zhilan1,XING Bingpeng12(1.Third Institute of Oceanography,MNR,Xiamen361005,China;2.Observation and Research Station of Coastal Wetland Ecosystem in Bcibu Gulf MNR,Bcihai536015,China)Abstract：To evaluate the validation of DNA barcoding candidate sequence in identifying Chlorella?to discuss the new ways of identifying,this paper took20individuals sampled for analy­sis?3sequences cytochrome coxidase I(COI)?internal transcribed spacer(ITS)and ribulose-1, 5-bisphosphat.e of carboxylase(rbcL)were amplified and sequenced.These sequences were ana­lyzed by bioinformatics methods.The result,showed both amplifying and sequencing effects of COI9ITS and rbcL towards the sample of chlorella were positive,he amplification success rate was76%,3%and70%,these3sequences were not.suitable for lower taxa level.【n the future the combination of many segments could be considered and tested,o pick out.the different,evolution­ary levels of DNA barcoding.Keywords:Chlorella?DNA barcoding,Identification,Species,Gene收稿日期：2020-03-23；修订日期：2021-01-08基金项目：自然资源部第三海洋研究所基本科研业务费专项资金资助项目（海三科2015012、海三科2019015）.作者简介：张稚兰，助理研究员，硕士，研究方向为海洋生物多样性通信作者：邢炳鹏，助理研究员，硕士，研究方向为海洋生物多样性70海洋开发与管理2021年0引言小球藻(Chlorella)是球形单细胞真核微藻，隶属绿藻门(Chlorophyta),是地球上最早出现的生命之一。

基因讲堂- 小球藻转录组

基因讲堂- 小球藻转录组

Plant Biotechnology Journal
转录组测序
解析小球藻脂质堆积分子机制
研究背景
给微藻提供额外的CO2是一种提高脂质产量的有效途径。但是在CO2 升高时脂质堆积的分子机制并不清楚。本文通过对小球藻LS-2进行转 录组测序研究了从CO2到甘油三酯碳流过程中基因的动态变化揭示了 CO2升高过程中脂质堆积的分子机制。
2、在高剂量CO2下，尽管大部分脂肪酸从头 合成基因下调，但是参与碳水化合物代谢途 径的基因，如碳固定、叶绿体糖酵解、丙酮 酸脱氢酶复合物的成分（PDHC）和叶绿体 膜转运相关的基因，均在长期的脂质积累阶 段上调（图1）。这些数据表明，脂质生产很 大程度上独立于脂肪酸的从头合成。
3、CO2浓度的升高可能会推动细胞将光合碳 前体引入脂肪酸合成途径，从而整体增加甘 油三酯的合成。参与甘油三酯合成的基因大 幅上调就证明了这一观点。因此CO2浓度的 提高会影响动态调控，并导致更多的碳转化 成甘油三酯，从而为提升小球藻脂类产量提 供了可行的办法。方法流程样品取材 类型 测序策略 主要分析 实验验证
10%CO000 PE100 基因拼接注释 差异表达分析 富集分析
qRT-PCR 等
研究结果
1、通过RNA-seq的手段，对高剂量CO2和 正常空气下培养的小球藻进行转录组测序， 通过转录本拼接共得到22,432个unigene， N50长度1,680 bp，并通过基因功能注释鉴 定出了很多与糖代谢和脂质合成途径相关的 基因。
KEGG classification
LS_CO2 vs LS_air
-Log10(q-valueog2(fold change)
图1 KEGG分类（左）和高剂量CO2 VS 空气下小球藻差异表达基因（右）
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产油微藻的筛选及油脂含量测定

产油微藻的筛选及油脂含量测定

产油微藻的筛选及油脂含量测定郭建东;杨宵宵;孙清荣;庄晓辉;沈奕【摘要】为了促进微藻领域研究和微藻生物燃料的生产，从潍坊地区多种生境中分离、筛选产油微藻，并对产油微藻生长情况和油脂积累情况进行研究。

结果表明：共分离出49株微藻，其中产油微藻19株；产油微藻的生物量为1．39~6．36g/L，油脂含量为11．16%~45．62%；6株油脂产率大于90 mg/( L·d)微藻在培养的12~15 d产油能力最高，6株微藻最佳收获时间在培养后的14 d。

%In order to promote the field research and biofuel production of microalgae, the oleaginous mi-croalgae was screened and isolated from different environments in Weifang, and the growth and oil accu-mulation of the oleaginous microalgae were studied. The results showed that 49 strains of microalgal were isolated,and 19 strains of oleaginous microalgal were screened;the biomass and oil content of the oleagi-nous microalgal ranged from 1 . 39 g/L to 6 . 36 g/L and from 11 . 16% to 45 . 62% respectively;6 strains of oleaginous microalgal with oil yield over 90mg/( L·d) had the highest oil production capacity after cultivating for 12-15 d, and their optimal harvest time was the 14th day after cultivation.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】4页(P68-71)【关键词】微藻;生物燃料;油脂积累【作者】郭建东;杨宵宵;孙清荣;庄晓辉;沈奕【作者单位】山东科技职业学院生物与化学工程系，山东潍坊261053;山东华辰生物化学有限公司，山东潍坊261061;山东科技职业学院生物与化学工程系，山东潍坊261053;山东科技职业学院生物与化学工程系，山东潍坊261053;山东科技职业学院生物与化学工程系，山东潍坊261053【正文语种】中文【中图分类】TS222;Q936随着矿物能源消耗和全球气候问题的日益严重，研究、开发和利用可再生能源是人类社会、经济发展的大势所趋。