转基因小鼠鉴定实验

转基因小鼠的鉴定一、剪鼠尾1.剪鼠尾的时间当新生的小鼠年龄达到两到三周耳朵已经长开时剪鼠尾较好,此时鼠尾剪起来比较容易且小鼠的生命力比较强;2.分辨小鼠的年龄a当小鼠整个身体较红且腹部无奶时,此小鼠当天出生或前一晚出生；b当小鼠腹部有奶腹部有一小团白色物质,此小鼠出生2~3天；c当小鼠背部长出皮毛时,此小鼠出生3~4天；d当小鼠毛长全,但眼未开时,此小鼠出生10天左右；e当小鼠眼刚开,耳未开时,此小鼠出生12天左右；f当小鼠耳刚开时,此小鼠出生14天左右;3.剪鼠尾后对小鼠的标记：打耳孔法二、从鼠尾中提取DNA采用鼠尾基因组DNA提取试剂盒康为世纪：cw2094提取DNA,操作如下：1.剪取小鼠长度为的尾巴,放入灭菌后的离心管中,加入180μL Buffer GTT;震荡混匀;2.加入20μL proteinase K,涡旋震荡,彻底混匀;3.置于56℃水浴,直到组织溶液完全清澈,一般需消化6-8h,赋予过程中涡旋震荡,使样品均匀分离;注意：1 如果赋予和涡旋震荡后仍然有胶状物质,必要时过夜消化再加入20μl proteinaseK消化,不会影响后续操作;2 如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100mg/μl的RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10min;4.14000rpm 离心 1min,以消除未消化的类似于鼠毛等组织,将上清转移到一个新的灭过菌的离心管中;5.加入200μl Buffer GL,涡旋震荡,充分混匀,加入200μl 无水乙醇,涡旋振荡,充分混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底;注意：1加入Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀;2 如果多个样品一起操作,Buffer GL 和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品;3加入Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续操作;6.将步骤5中所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若以此不能加完溶液,可分多次转入;10000rpm 离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;7.向吸附柱中加入500μl Buffer GW1使用前检查是否已加无水乙醇,10000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;8.向吸附柱中加入500μl Buffer GW2使用前检查是否已加无水乙醇,10000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8;9.12000rpm 离心 2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干;注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应酶切,PCR等;10.将吸附柱置于一个新的灭过菌的离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5min,10000rpm 离心 1min,收集DNA溶液,-20℃保存DNA;注意：1如果下游实验对PH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱,洗脱液的PH值对洗脱效率有很大影响,若用水作洗脱液应保证其PH值在直接,PH值低于时洗脱效率不高;2离心前室温孵育5min可增加产量;3用另外的50-200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量;4如果需要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10；若洗脱体积小于200μL,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量;三、PCRPCR程序设定：1＝ 94.0℃ for 5:00 2＝ 94.0℃ for 1:00 3＝ 59.0℃ for 0:50 4＝ 72.0℃ for 1:00 5＝ Goto 2 2times6＝ 94℃ for0:507＝ 58℃ for 0:508＝72℃ for 1:009＝Goto 6 2times10＝ 94.0℃ for 0:50 11＝56.0℃ for 0:50 12＝ 72.0℃ for 1:00 13＝ Goto10 32times 14＝ 72.0℃ for 10:00 15＝ 4.0℃ for 5:00 16＝END目前实验室的双转基因小鼠AD体系采用：PCR反应的体系12μl：APPPrimer APP-1 μlPrimer APP-2 μlO 2μlddH2mixCW0682 6μlDNA 1μlPCR反应的体系12μl：PS1Primer PS1-1 μlPrimer PS1-2 μl内参-1 1μl内参-2 1μlmixCW06826μlDNA 1μl先在的EP管中加入总的体系再平均分装入各个PCR管中一般多加两小管的量,将移液器调到总量的1/3到1/2体积在EP管中缓慢抽吸若干次尽量避免产生气泡以便Taq酶混合均匀,最后再在各PCR管中依次加入DNA样品;引物处理方法：引物在安基生物有限公司合成后,EP管上会有标记,一般为x nmol,使用O,涡旋振动混匀,微型离心机离心,即可得前先用12000rpm 离心 1min,加入10x μl ddH2O稀释10倍,即加入90μl,混匀后即可得到到100μM的母液,取10μl 的母液,用ddH210μM的引物工作液;四、电泳1．配胶：鉴定用的胶板有大、中、小3种,分别用的梳子为50、25、11齿;分别用的TBE的量为90ml、45ml、25ml;用%的琼脂糖凝胶;2．点样：12μl的DNA,Marker加5μl;点样时注意逐个点样,不要点错,最好把中间的那个孔留着点Marker,这样可避免点样的出错;Marker的选择依基因片段大小而定;3．跑电泳：打开电源,150v电压,30min左右即可;4．照胶：看是否有目的条带,即可判断对应小鼠是阳性、阴性或是杂合子;5．保存;。

《蛛丝蛋白八聚体转基因小鼠的制备及检测》篇一一、引言随着现代生物医学的不断发展，转基因动物作为一种新型的实验动物模型在科学研究中的应用日益广泛。

转基因小鼠，尤其以其优异的实验特性成为研究者们经常选用的实验对象。

在众多研究领域中，关于蛛丝蛋白的研究更是令人瞩目。

而将蛛丝蛋白八聚体通过基因工程手段导入小鼠体内，并成功制备出转基因小鼠，为进一步研究蛛丝蛋白的功能及其在生物医学领域的应用提供了重要基础。

本文将详细介绍蛛丝蛋白八聚体转基因小鼠的制备过程及检测方法。

二、材料与方法（一）材料1. 蛛丝蛋白八聚体基因：经过基因克隆和修饰，用于转基因实验。

2. 小鼠受精卵：作为转基因的载体。

3. 显微操作设备：用于显微操作受精卵。

4. 转基因小鼠饲养设备及饲料：用于转基因小鼠的饲养和观察。

（二）方法1. 基因构建与修饰：对蛛丝蛋白八聚体基因进行必要的修饰，以适应小鼠基因组。

2. 显微注射：将修饰后的基因注射到小鼠受精卵中。

3. 胚胎移植：将注射后的受精卵移植到代孕母鼠体内。

4. 转基因小鼠筛选：通过PCR、Southern Blot等方法检测转基因小鼠。

5. 转基因小鼠饲养与观察：对成功制备的转基因小鼠进行饲养和观察，记录其生长、发育等数据。

三、制备过程1. 基因构建与修饰：根据蛛丝蛋白八聚体的序列，设计引物并扩增出目的基因片段，然后进行基因修饰，使其适应小鼠基因组。

2. 显微注射：将修饰后的基因片段注射到小鼠受精卵中，使基因整合到小鼠基因组中。

3. 胚胎移植：将注射后的受精卵移植到代孕母鼠体内，待其发育成转基因小鼠。

4. 转基因小鼠筛选：通过PCR、Southern Blot等方法检测整合了蛛丝蛋白八聚体基因的小鼠。

筛选出的转基因小鼠具有较高的纯度和特异性。

四、检测方法（一）PCR检测利用PCR技术对转基因小鼠进行基因型鉴定，以确定是否成功整合了蛛丝蛋白八聚体基因。

通过扩增目的基因片段并对其产物进行电泳分析，可观察到清晰的条带，从而判断出是否为阳性小鼠。

动物转基因细胞鉴定实验报告实验目的：通过转基因细胞鉴定实验，判断某个动物体内是否存在外源DNA，并确定外源DNA的存在形式（整段或片段）及数量。

实验材料：1. 转基因动物组织样本（例如转基因小鼠的皮肤组织）；2. 免疫材料（例如抗体）；3. 实验所需试剂、设备（例如离心机、PCR设备）。

实验步骤：1. 提取转基因动物组织样本的细胞DNA。

可以使用商业化的DNA提取试剂盒进行提取，按照盒内说明书的步骤进行操作。

2. 利用PCR技术对提取到的细胞DNA进行放大。

选择与外源DNA序列互补的引物，设置PCR反应体系，进行PCR扩增。

PCR扩增条件根据引物的具体要求来设置。

3. 将PCR扩增产物进行电泳分析。

将PCR产物与DNA分子量标准品一同加载至琼脂糖凝胶中，接通电源进行电泳。

根据PCR产物的大小，判断是否存在特定长度的 DNA片段，进而得出外源DNA的存在与否。

4. 如有必要，对PCR扩增产物进行进一步的鉴定。

可以利用核酸杂交技术或DNA测序技术，确认扩增产物是否与外源DNA完全匹配。

结果与讨论：根据电泳结果，如果样品在特定长度处出现明显的DNA条带，并且与分子量标准品相匹配，可推断该动物体内存在特定长度的外源DNA片段。

如在其他长度处也观察到DNA条带，可能表示存在其他长度的外源DNA片段或非特异扩增产物。

如果在所有长度处都没有明显的DNA条带出现，说明该动物体内不存在外源DNA。

实验中还需要注意避免污染和假阳性结果的产生，可以采取一系列控制措施，如设立阴性对照、正常动物组织样品对照等。

结论：通过转基因细胞鉴定实验，可以初步判断某个动物体内是否存在外源DNA，并确定外源DNA的存在形式及数量。

这种实验方法在转基因动物监测和转基因动物研究中具有重要的应用价值。

ELISA检测小鼠Cre实验报告本研究采用原核显微注射方法制备受Cre重组酶调控表达的、非免疫耐受的卵清蛋白-HBsAg转基因小鼠，以期为乙肝防治提供更好的动物模型。

试剂及仪器携带目的基因OVA-HBsAg的表达载体pCCALL-Anton由中科院生物物理所王盛典教授惠赠。

在目的基因OVA-HBsAg上游加入CMv增强子及鸡β -actin启动子，并加入两个同向的LoxP位点，以实现后续Cre酶对其表达的调控(图1A)。

目的基因构建成功后，连接入pCCALL2表达质粒(图1B)。

KSOM小鼠胚胎培养基购自Millipore发育良好的CS7BL/6J×DBA母鼠，腹腔注射PMSG10U，48h 后注射HCG 10U促排卵，与CS7BL/6J公鼠按1：1合笼，次日清晨检阴栓阳性有文八体鼠。

取受精卵置于KSOM培养基于37℃培养sh，在显微注射仪上将经内切酶Apa Ⅰ作用线性化的pCCALL-Anton注射入受精卵雄性原核内。

取注射后存活的受精卵移植到假孕KM母鼠的输卵管内，待其怀孕产仔后，进行检测。

转基因小鼠的鉴定剪取约1cm长鼠尾下游引物： 5'-GATACATAGAGGTTCCTTGAGCAGT-3'。

反应条件： 94℃Smin； 94℃ 30s、s2℃ 30s、72℃40s，35个循环；72℃ 5min。

扩增片段318bp。

1.2.3OVA-HBsA转基因小鼠的繁育、传代扩群为尽快扩群,并使子代小鼠背景趋于一以,OvA-HBsAg转基因小鼠首建鼠建成后，与CS7BL/6J小鼠杂交进行传代、培育。

对所得子代小鼠进行PCR 鉴定，并用ELISA法检测HBsAg表达[检测波长450nm，参比波长630nm，吸光度(A)值>0.10s为阳性]。

PCR条件如1.2.2所述。

对PCR阳性鼠，于眼眶后静脉丛采血300u，37℃放置2h后，3000r/min离心10min,取上清，采用ELISA方法检测HBsAg表达。

《利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测》篇一一、引言随着生物医学技术的不断发展，转基因动物模型在生物学、医学等领域的应用越来越广泛。

血管内皮生长因子（VEGF）是一种重要的生长因子，对血管生成具有促进作用。

VEGF164是VEGF家族中的一种亚型，具有较高的生物活性。

本文旨在介绍利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠的方法，并对其检测进行详细阐述，以期为相关研究提供参考。

二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用C57BL/6J小鼠作为转基因实验动物。

（2）质粒：含有VEGF164基因的质粒。

（3）显微操作设备：显微操作仪、显微注射针、显微操作台等。

2. 方法（1）构建转基因载体：将VEGF164基因克隆到适当载体上，构建转基因载体。

（2）显微注射：将构建好的转基因载体显微注射到小鼠受精卵的原核中。

（3）筛选阳性小鼠：通过PCR等方法筛选出阳性小鼠。

（4）繁殖与鉴定：将阳性小鼠进行繁殖，并对后代进行基因型鉴定和表达检测。

三、原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠1. 转基因载体的构建首先，将VEGF164基因克隆到适当的载体上，构建转基因载体。

这一步骤需要使用分子生物学技术，如PCR、酶切、连接等。

2. 显微注射将构建好的转基因载体显微注射到小鼠受精卵的原核中。

这一步骤需要在显微操作仪的辅助下进行，注射针需要精确地定位到受精卵的原核中，将转基因载体注入其中。

3. 筛选阳性小鼠通过PCR等方法筛选出阳性小鼠。

这一步骤需要对注射后的小鼠进行基因组DNA提取，然后进行PCR扩增和检测，以确定是否成功地将VEGF164基因整合到小鼠基因组中。

四、VEGF164转基因小鼠的检测1. 基因型鉴定对繁殖出的后代进行基因型鉴定，确定其是否为转基因阳性小鼠。

这一步骤同样需要进行PCR扩增和检测。

2. 表达检测对转基因阳性小鼠进行表达检测，以确定VEGF164基因在小鼠体内的表达情况。

转基因小鼠的检测一、实验材料：小鼠、BSA、10*PCR缓冲液、蛋白酶K、dNTP溶液、引物、Taq酶、TE、marker二、实验药品准备1、尾缓冲液100ml （称取TRIS 0.6055g EDTA 3.722g Nacl 0.5844g SDS1g 定容至差不多100ml 然后用Hcl 调PH至8.0）2、10*PCR缓冲液10ml (称取Kcl 0.3727g tris 0.2422 Mgcl2 BSA0.5ml 定容至10ml,用Hcl调PH8.4)3、6mol\L Nacl 10ml (称取Nacl 3.506g 容于10ml 水中)4、70%乙醇10ml (量取95%乙醇7.37ml加水到10ml)需要灭菌的：尾缓冲液 1.5ml离心管PCR管、大枪头小枪头三、实验步骤1、切小鼠尾巴1cm ,置于有750ul尾缓冲液的1.5ml离心管中，再补加40ul蛋白酶K，55°温育过夜2、在振动器上剧烈混合2min3、加入250ul 6mol\L Nacl 在振动器上搅拌2min4、在离心机上室温离心5—10min5、取750ul上清液于新的1.5ml离心管中，加入500ul异丙醇6、振动器上混合2min 离心机上离心1min7、弃上清，用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物3次8、乙醇挥发后用200ul TE 溶解9、取5ul进行PCR10、建立PCR体系：100ul95℃ 5min——94℃ 30sec---50℃ 30sec----73℃ 30sec---72℃ 5min---4℃保存30 cycle11、取PCR产物10ul 用1%凝胶电泳120V 30min12、观察条带。

第1篇一、实验背景随着生物技术的飞速发展，转基因技术在医学、农业等领域发挥着越来越重要的作用。

小鼠作为生物医学研究中常用的实验动物，其基因编辑技术的应用为疾病模型构建、药物筛选和基因功能研究提供了有力工具。

本实验旨在通过基因编辑技术构建转基因小鼠模型，研究特定基因在小鼠体内的表达和功能。

二、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雄性，8周龄。

2. 基因构建材料：目的基因（GFP基因）、启动子（CMV启动子）、荧光素酶报告基因（Luc基因）、pEGFP-C1质粒载体、pGL3-Basic质粒载体。

3. 实验试剂：限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、PCR引物、Trizol试剂、RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、细胞培养试剂等。

4. 仪器设备：PCR仪、凝胶成像系统、实时荧光定量PCR仪、细胞培养箱、显微镜等。

三、实验方法1. 目的基因构建：将GFP基因和Luc基因分别插入到pEGFP-C1和pGL3-Basic质粒载体中，构建重组质粒。

2. 重组质粒转染：将构建好的重组质粒通过脂质体转染法转染C57BL/6小鼠胚胎干细胞（ES细胞）。

3. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。

4. 胚胎细胞传代培养：将阳性细胞克隆进行传代培养，筛选出稳定表达的细胞系。

5. 胚胎细胞冻存：将稳定表达的细胞系进行冻存，以备后续实验使用。

6. 胚胎移植：将冻存后的胚胎细胞进行移植，获得转基因小鼠。

7. 转基因小鼠表型鉴定：通过GFP荧光显微镜观察转基因小鼠体内GFP表达情况，并通过实时荧光定量PCR检测GFP基因在转基因小鼠体内的表达水平。

四、实验结果1. 重组质粒构建：成功构建了含有GFP基因和Luc基因的重组质粒。

2. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。

3. 胚胎细胞传代培养：成功传代培养出稳定表达的细胞系。

4. 胚胎移植：成功获得转基因小鼠。

《利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测》篇一一、引言随着生物医学技术的飞速发展，基因编辑技术为科研和医学应用带来了前所未有的机遇。

其中，原核显微注射技术作为基因编辑的一种重要手段，广泛应用于转基因动物模型的制备。

本篇论文将详细介绍如何利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠，并对其检测方法进行探讨。

二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用适宜的野生型小鼠作为实验对象。

（2）质粒：含有VEGF164基因的质粒。

（3）显微操作设备：显微操作仪、显微注射针等。

（4）培养基、试剂及其他辅助材料。

2. 方法（1）构建含有VEGF164基因的质粒。

（2）显微操作仪下，对野生型小鼠进行显微操作，制备受精卵或胚胎。

（3）将构建好的质粒注射到受精卵或胚胎的原核中。

（4）将注射后的受精卵或胚胎移植回代孕母鼠体内，使其发育成转基因小鼠。

（5）对转基因小鼠进行检测，包括基因型鉴定、表达水平检测等。

三、VEGF164转基因小鼠的制备1. 质粒构建首先，通过分子生物学手段构建含有VEGF164基因的质粒。

该质粒应具备在宿主细胞中稳定表达VEGF164基因的能力。

2. 显微操作与注射在显微操作仪下，对野生型小鼠的受精卵或胚胎进行操作。

利用显微注射针将构建好的质粒注射到受精卵或胚胎的原核中。

此过程需要精细的操作技巧和严格的实验条件。

3. 移植与发育将注射后的受精卵或胚胎移植回代孕母鼠体内，使其发育成转基因小鼠。

在此过程中，需要注意母鼠的营养和饲养环境，以确保其正常发育。

四、转基因小鼠的检测1. 基因型鉴定通过对转基因小鼠的基因组进行PCR、Southern Blot等分子生物学手段，鉴定其基因型，确认是否成功转入VEGF164基因。

2. 表达水平检测通过Western Blot、荧光定量PCR等手段，检测转基因小鼠中VEGF164基因的表达水平。

此外，还可通过观察转基因小鼠的表型变化，初步评估VEGF164基因的功能。

pcr鉴定转基因小鼠原理PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，它在转基因小鼠的鉴定和识别中起着重要的作用。

本文将介绍PCR鉴定转基因小鼠的原理和步骤。

转基因小鼠是通过将外源基因导入小鼠基因组中而得到的一种模型动物。

在转基因小鼠的研究中，需要对其进行鉴定和识别，以确认是否成功导入目标基因。

PCR鉴定是一种常用的方法，它可以快速、准确地检测出转基因小鼠中的外源基因。

PCR鉴定转基因小鼠的原理基于DNA的复制和扩增。

PCR反应需要以下三个关键组分：DNA模板、引物和聚合酶。

DNA模板是待检测的转基因小鼠的DNA样本；引物是用于引导PCR反应的两条短链DNA片段，其中一条称为前向引物，另一条称为反向引物；聚合酶是一种酶类物质，能够在一定的温度条件下，将DNA模板和引物结合，引导DNA的复制和扩增。

PCR鉴定的步骤包括三个主要的温度阶段：变性、退火和延伸。

首先，在变性阶段，将PCR反应混合液加热至94-96°C，使DNA模板的双链结构解开，得到两条单链DNA。

然后，在退火阶段，将反应体系温度降至50-65°C，使前向引物和反向引物与DNA模板的特定区域互补结合，形成引物-模板复合体。

最后，在延伸阶段，将温度升高至72°C，聚合酶开始在引物的引导下合成新的DNA链。

这一过程持续多个循环，每个循环都会在DNA的复制和扩增上产生指数级增加。

在PCR反应结束后，可以通过凝胶电泳等方法对PCR产物进行分析。

如果转基因小鼠中存在目标基因，PCR反应将产生与目标基因特异性序列相对应的DNA片段。

通过观察PCR产物的大小和数量，可以判断转基因小鼠是否成功导入目标基因。

PCR鉴定转基因小鼠的优点是快速、准确、灵敏。

它可以在短时间内得到结果，并且对于少量的DNA样本也能进行分析。

此外，PCR 鉴定还可以进行定量分析，用于检测目标基因在转基因小鼠中的表达水平。

然而，PCR鉴定也存在一些限制和注意事项。

Neuritin转基因小鼠的构建与鉴定Neuritin转基因小鼠的构建与鉴定导言：神经发育相关蛋白Neuritin是一种神经张力蛋白，其通过调控突触可塑性在神经系统发育和重塑中起着关键作用。

为深入研究Neuritin在神经系统功能中的具体作用，近年来科研人员利用转基因技术，成功构建了Neuritin转基因小鼠模型，并通过鉴定实现了对该转基因小鼠的详细表征。

本文将对Neuritin转基因小鼠的构建与鉴定进行综述。

一、Neuritin基因克隆与构建表达载体1. Neuritin基因克隆首先，通过PCR技术从小鼠胚胎脑组织中提取总RNA，利用反转录酶将RNA转录为cDNA。

然后，根据Neuritin基因的序列信息设计引物，通过PCR方法扩增出目标基因片段。

最后，将PCR产物进行凝胶电泳，将目标片段切取并提取，得到纯净的Neuritin基因片段。

2. 构建表达载体将纯净的Neuritin基因片段进行酶切，并选择适当的限制酶进行双酶切。

然后，将线性化的表达载体与目标基因片段连接，利用T4 DNA连接酶进行连接反应。

将连接产物转化至E.coli DH5α感受态细胞中并进行蓝白斑筛选。

最后，筛选出Neuritin基因片段正向插入的重组质粒，进行测序确认。

二、Neuritin转基因小鼠模型构建1. 转基因载体构建将已经构建好的表达载体经过酶切得到目标基因片段，并进行混合，得到重组载体。

通过琼脂糖凝胶电泳检测重组载体的完整性和目标片段的大小。

2. 转基因小鼠模型构建将重组载体经过合适的酶切，制备出线性的Neuritin转基因DNA片段。

利用精细胞冲击法或ELECTROJECT转基因技术，将Neuritin转基因DNA片段导入小鼠胚胎干细胞中。

然后，将转基因胚胎干细胞注射到小鼠受体母体中的兔周胚中，并等待发育至小鼠胚胎。

三、转基因小鼠的鉴定1. PCR鉴定从转基因小鼠的尾部组织中提取总DNA，使用PCR方法对Neuritin基因片段进行扩增。

第1篇一、实验背景基因是生物体内控制遗传信息传递的基本单位，基因突变是生物进化的重要驱动力。

为了研究特定基因的功能，我们采用小鼠作为模型生物，通过基因筛选实验，旨在鉴定和验证与特定表型相关的基因。

二、实验目的1. 构建小鼠基因文库。

2. 通过分子生物学技术筛选与特定表型相关的基因。

3. 验证筛选得到的基因的功能。

三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠。

2. 工具酶：限制性内切酶、DNA连接酶、Taq DNA聚合酶等。

3. 试剂：PCR引物、DNA标记物、DNA探针、克隆载体等。

4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等。

四、实验方法1. 构建小鼠基因文库（1）提取小鼠基因组DNA。

（2）使用限制性内切酶切割基因组DNA，获得特定长度的DNA片段。

（3）将切割后的DNA片段连接到克隆载体上，构建小鼠基因文库。

2. 基因筛选（1）根据已知表型，设计特异性引物，用于PCR扩增目的基因。

（2）对小鼠基因文库进行PCR扩增，筛选出与特定表型相关的基因片段。

（3）将筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。

3. 基因功能验证（1）将筛选得到的基因片段克隆到表达载体中，构建重组表达载体。

（2）将重组表达载体转化大肠杆菌，获得表达目的蛋白的菌株。

（3）通过免疫印迹、免疫荧光等技术检测目的蛋白的表达和活性。

五、实验结果1. 成功构建了小鼠基因文库，文库容量达到预期目标。

2. 通过PCR扩增，成功筛选出与特定表型相关的基因片段。

3. 对筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。

4. 通过基因功能验证，成功表达了目的蛋白，并验证了其功能。

六、实验讨论1. 基因筛选实验中，PCR扩增和DNA测序是关键步骤，需要严格控制实验条件，确保结果的准确性。

2. 在基因功能验证过程中，需要选择合适的表达系统和检测方法，以确保目的蛋白的正确表达和活性。

3. 本研究筛选得到的基因可能与特定表型相关，但其具体功能还需进一步研究。

实验名称：基因检测小鼠模型建立及功能研究实验目的：1. 建立基因敲除小鼠模型，验证目标基因的功能；2. 探究目标基因在特定生理或病理过程中的作用；3. 为后续相关疾病的研究和治疗提供实验动物模型。

实验时间：2023年3月1日-2023年6月30日实验地点：XX大学动物实验中心实验材料：1. 实验小鼠：C57BL/6小鼠；2. 基因敲除质粒：含有目标基因的敲除质粒；3. 酶切试剂：DNA酶、T4连接酶等；4. 载体细胞：小鼠胚胎干细胞；5. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清等；6. 实验仪器：PCR仪、凝胶成像系统、显微镜等。

实验方法：1. 基因敲除质粒构建（1）根据目标基因序列设计特异性引物，进行PCR扩增；（2）将扩增得到的DNA片段与载体连接，构建基因敲除质粒；（3）将构建好的质粒进行测序，确保序列正确。

2. 基因敲除小鼠模型建立（1）将基因敲除质粒转染小鼠胚胎干细胞；（2）将转染成功的细胞进行分裂培养，筛选出基因敲除细胞；（3）将基因敲除细胞进行核移植，获得基因敲除小鼠。

3. 功能验证（1）对基因敲除小鼠进行表型分析，观察其生长发育、生理功能等；（2）对基因敲除小鼠进行病理模型建立，观察其病理特征；（3）对基因敲除小鼠进行分子生物学检测，分析目标基因表达水平及蛋白功能。

实验结果：1. 基因敲除质粒构建成功，测序结果显示序列正确。

2. 基因敲除小鼠模型建立成功，经过表型分析，基因敲除小鼠在生长发育、生理功能等方面与野生型小鼠无显著差异。

3. 在病理模型建立过程中，基因敲除小鼠表现出与野生型小鼠相似的病理特征。

4. 分子生物学检测结果显示，基因敲除小鼠目标基因表达水平降低，蛋白功能受到影响。

实验结论：1. 成功构建了基因敲除小鼠模型，为后续相关疾病的研究和治疗提供了实验动物模型；2. 验证了目标基因在特定生理或病理过程中的作用，为进一步研究该基因的功能奠定了基础；3. 本实验结果为相关疾病的发病机制研究提供了参考，有助于寻找新的治疗靶点。

fat1转基因小鼠的构建与鉴定【摘要】目的构建和鉴定携带有外源fat1基因的转基因小鼠。

方式将fat1基因的cDNA与动物表达载体pEF neo连接，构建pEF fat1重组质粒, 酶切、测序鉴定正确后，以显微注射法把线性化重组质粒注射到小鼠受精卵的雄原核中，并将受精卵移植到受体鼠的输卵管中产出转基因小鼠，通过PCR、Southern blot杂交等方式确立阳性整合有目的基因的G0代小鼠。

结果成功构建了pEF fat1重组质粒，将其显微注射到小鼠受精卵中，取得G0代小鼠，PCR、Southern blot杂交确立了4只整合有fat1基因的首建鼠。

结论 fat1基因可整合到小鼠体内，取得的转基因小鼠为研究fat 1基因的生物学功能提供了动物模型。

【关键词】小鼠转基因 DNA 重组 fat1基因［ABSTRACT］ObjectiveTo construct and identify the transgenic mice with extrinsic fat 1 gene. MethodsFat 1 cDNA and animal expression vector pEF neo were conjugated to construct the recombinant plasmid pEF fat 1 which was digested by restrict enzyme and sequenced correctly. The obtained linear recombinant plasmid pEF fat 1 was microinjected into the arsenoblasts of mouse zygote, which was implanted into the uterus to produce transgenic mice. PCR and Southern blot were performed to identify the positive G0 generation of fat 1 transgenic mice. ResultsRecombinantplasmid pEF fat 1 was successfully constructed and four G0 mice with integrated fat 1 gene were identified via PCR and Southern 1 gene can be integrated into mouse to obtain the transgenic mouse that provides an animal model for the study of fat 1 gene.［KEY WORDS］mice, transgenic; DNA, recombinant; fat 1 genefat1基因来源于小秀丽线虫，SPYCHALLA等［1］利用在阿拉伯芥（Arabidopsis）中进行异种表达的方式确认了fat 1 cDNA的序列。

转基因小鼠的鉴定一，剪鼠尾1,剪鼠尾的时间当新生的小鼠年龄达到两到三周（耳朵已经长开）时剪鼠尾较好，此时鼠尾剪起来比较容易且小鼠的生命力比较强。

2,分辨小鼠的年龄a当小鼠整个身体较红且腹部无奶时，此小鼠当天出生或前一晚出生；b当小鼠腹部有奶（腹部有一小团白色物质），此小鼠出生2~3天；c当小鼠背部长出皮毛时，此小鼠出生3~4天；d当小鼠毛长全，但眼未开时，此小鼠出生10天左右；e当小鼠眼刚开，耳未开时，此小鼠出生12天左右；f当小鼠耳刚开时，此小鼠出生14天左右。

3,剪鼠尾后对小鼠的标记一般在小鼠的耳朵或指甲上做标记，如果在用剪指甲来标记的话，时间过长则不易分辨。

所以一般还是选择用左右耳朵上剪的刀数来标记，正常情况下一笼小鼠不会超过10只，依次标记为左1刀，右1刀，左2刀，右2刀，左1右1刀，左2右1刀，左1右2刀，左2右2刀，左3刀，最后一只不剪耳。

二，从鼠尾中提取DNA1,剪0.5cm的鼠尾，放入1.5ml的EP管中。

2,加入500μlSNET,其中蛋白酶K浓度是400μl/ml。

注：SNET鼠尾裂解液配方（100ml）：200mM的Tris-Cl 取1M的Tris-Cl（PH8.0）2ml5mM的EDTA 取0.5M的EDTA（PH8.0）1ml400mM的NaCl 取2.34g1%（m/v）SDS 取10ml 10%SDS加水定容至100ml临用时加蛋白酶K400μg/ml，即100ml的SNET加40mg。

3,放入550C孵育过夜（最好放入摇床550C振荡过夜，也可放入550C烘箱过夜，第2天摇床550C振荡2~3个小时）。

4，消化好后，每只EP管内加入14μl 6M NaCl溶液，涡轮振荡仪上剧烈振荡30s-1min。

5,12000rpm离心10min，取上清400μl 到另一1.5mlEP管内。

注：a离心时EP管对称放置且最好开口处靠近轴部；b取“另一1.5mlEP管”时，选择盖子内部正常无多余部分，以免第6步的絮状沉淀挂在多余部分。

竭诚为您提供优质文档/双击可除转基因筛选实验报告篇一：转基因小鼠鉴定实验转基因小鼠鉴定实验在刚出生产出的鼠仔中，属转基因小鼠者，约占全部仔小鼠的20％-30％。

因此，对转基因小鼠必须进行鉴定筛选。

1．转基因整合检测鉴定转基因小鼠最简单的方法是从小鼠尾尖提取基因组DnA，检测其基因型。

检测方法包括pcR和shouthern杂交。

（1）基因组DnA的提取：1）将离乳期小鼠（>4周龄）麻醉标记。

2）用一只手抓住小鼠，另一只手持消毒剪剪下约1cm 的鼠尾。

（2）pcR检测：转基因的初始筛选通常采用pcR检测技术。

该技术操作简便、快速、费用低而有效，适合大量标本的分析。

由于该技术特别敏感，可能产生假阳性结果。

因此，在操作过程中必须特别小心，避免质粒DnA或其它标本的基因组DnA的污染。

假阳性的产生对转基因小鼠的筛选工作将是致命的。

pcR实验应采用双复管，甚至三复管。

阳性结果最好用southern杂交技术进一步证实。

（3）southernblot分析：该技术虽然没有pcR技术那样敏感，且费力费时，但是避免了因污染导致假阳性结果的麻烦，可以得到目的基因整合后的基因组、整合位点数目、转基因拷贝数等的确切信息。

southernblot的实验操作参见第一章的第八节。

2．转基因表达检测转基因整合检测是确定目的基因是否整合到了小鼠的基因组中，同时可确定整合的位点和拷贝数，这在遗传学上是十分重要的。

而转基因表达检测是确定目的基因在转基因小鼠器官组织中表达的时空分布。

其检测包括RnA分析技术和蛋白质检测技术。

篇二：转基因技术综述动物转基因技术研究进展及其应用前景孙凤俊张佳谊韩广文（北京奶牛中心北京延庆102100）摘要：转基因技术作为生命科学的前沿技术之一，已经逐渐走入了人们的生活。

转基因技术可以认为是在一定程度上通过科学技术手段让其他生物、植物朝着对人类有利方向发展的技术。

本文介绍了转基因技术及其应用研究现状，并预测了未来发展前景，阐述了该技术的利弊关系，指出只有通过正确的引导和规范管理，才能很好地利用该技术，使它为人类服务。

顶端外胚层嵴表达Cre重组酶转基因小鼠的鉴定【摘要】顶端外胚层嵴（AER）是中胚层间质细胞诱导其外侧的外胚层细胞形成突起结构，位于肢芽的远端边缘背腹交界处，是肢体生长发育的主要信号中心。

利用转基因技术构建在AER中表达Cre重组酶的转基因小鼠（Col10a1-Cre），使Cre重组酶在AER中特异性表达，从而可以特异性地在AER中敲除被LoxP 序列锚定的目的基因。

确定此转基因小鼠Cre重组酶的表达的时间和空间特异性。

实验结果证明Cre重组酶在顶端外胚层嵴中能够特异性表达并能介导LoxP 间的重组。

在顶端外胚层嵴发现特异性的蓝染，将Cre重组酶的表达范围限定在此区域。

【关键词】顶端外胚层嵴;Cre重组酶;LoxP;特异性敲除1.实验原理1.1顶端外胚层嵴（apical ectodermal ridge，AER）概述AER是由中胚层细胞诱导其外侧的外胚层形成，它位于肢芽的远端边缘、背腹之交界处，是肢体生长的主要信号中心。

多指症、并指症、无肢症、短指症等先天性肢体畸形的发生与AER发育的异常和功能的失调都有着密切的联系。

1.2 Col10a1-Cre转基因小鼠我们构建了在8.2 kb小鼠X型胶原基因（Col10a1）启动子和3.2 kb小鼠X 型胶原基因第二内含子控制下表达Cre重组酶的转基因小鼠品系（Col10a1-Cre）。

采用显微注射法将14.7 kb的转基因片段导入小鼠基因组，获得了3只在基因组上整合有Cre重组酶基因。

图1-1 Col10a1-Cre转基因载体构建图1.3 条件基因打靶技术运用Cre-LoxP系统与基因打靶技术相结合的条件基因打靶，靶基因或重要功能域片段被两个LoxP序列锚定，经同源重组被引入ES细胞，通过显微注射获得靶基因被两个LoxP序列锚定的条件打靶小鼠，该小鼠只有在与组织或细胞特异性表达Cre的转基因小鼠交配后，Cre介导的重组发生在特定的组织活细胞中，导致这些组织活细胞中靶基因被删除，而其他组织或细胞中由于Cre不表达，靶基因不会被改变[1,2]。

PCR鉴定转基因小鼠一、试剂与仪器：（1）试剂：1、制备DNA样品：Reagents A：500mM EDTA（pH 8.0） 0.02mL in 50mL Milli-Q H2O100mM NaOH 12.5mL in 50mL Milli-Q H2OReagents B：1M Tris-HCl (pH 8.8) 2mL in 50mL Milli-Q H2ONote:1．500mM EDTA（pH 8.0）: 称取18.61 g EDTA-Na2溶于80mL Milli-Q H2O中，用NaOH 粉末调节pH 至8.0，将溶液定容至100 mL（量筒即可），灭菌后4℃保存。

2．1M Tris-HCl (pH 8.8): 称取12.11 g Tris于烧杯中，加入80 mL Milli-Q H2O，加入约4.2 mL 浓盐酸调pH至8.0，将溶液定容至100 mL（量筒即可），灭菌后4℃保存。

3．100mM NaOH: 80mL Milli-Q H2O中加入0.4g NaOH，再稀释至100mL。

二、方法1 取样1.1准备数管装有100µL Reagents A的 0.5mL离心管、一个装有半杯水的140mL烧杯、卷筒纸和眼科剪刀。

1.2剪取老鼠组织（尾巴3mm左右，耳朵米粒大小，手指或脚趾一根），放入装有Reagents A的小管中，溶液没过组织。

每一次取样后需将剪刀刀口在烧杯中震荡几次清洗，然后用干净的卷筒纸擦干表面。

（老鼠出生后即可取样鉴定，这时取四肢组织要适量，取样过多老鼠容易致残；三周以上的老鼠有攻击性，取样时须戴帆布手套固定老鼠；老鼠出生一周后，其耳朵长出，手指脚趾已经分开，而且不咬人，这时取样相对合适）1.3将装有样品的小管插在浮板上，放入97℃水浴中保温1h（水浴温度不宜为100℃，否则水沸腾产生的气泡容易撞开管盖；在煮样品前注意检查样品是否被溶液没过）。

1.4震荡，将煮过的组织分散开。

《利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测》篇一一、引言随着生物医学技术的飞速发展，转基因动物模型在生物学、医学和药理学等领域的应用越来越广泛。

其中，原核显微注射技术作为一种有效的基因编辑手段，被广泛应用于制备转基因小鼠模型。

本文旨在探讨利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测方法，以期为相关研究提供参考。

二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用适合实验的野生型小鼠。

（2）转基因载体：含有VEGF164基因的转基因载体。

（3）显微操作设备：显微操作仪、显微镜、显微注射针等。

2. 方法（1）构建转基因载体：将VEGF164基因插入到合适的载体中，构建转基因载体。

（2）显微注射：将转基因载体显微注射到小鼠原核中。

（3）筛选阳性小鼠：通过PCR、 Southern blot等技术检测小鼠基因组中VEGF164基因的插入情况。

（4）繁殖及传代：将阳性小鼠进行繁殖，传代后得到稳定的VEGF164转基因小鼠。

（5）检测VEGF164表达：通过免疫组化、Western blot等技术检测转基因小鼠中VEGF164的表达情况。

三、实验结果1. 转基因小鼠制备成功：通过原核显微注射技术，成功将VEGF164基因导入小鼠原核中，筛选出阳性小鼠。

2. 阳性小鼠基因检测：通过PCR和Southern blot等技术检测，证实了VEGF164基因成功插入到小鼠基因组中。

3. 稳定传代：将阳性小鼠进行繁殖传代，得到了稳定的VEGF164转基因小鼠。

4. VEGF164表达检测：通过免疫组化和Western blot等技术检测，发现转基因小鼠中VEGF164的表达情况良好。

四、讨论原核显微注射技术是一种有效的基因编辑手段，可以精确地将外源基因导入到动物基因组中。

在本文中，我们利用该技术成功制备了VEGF164转基因小鼠，并对其进行了基因和蛋白水平的检测。

实验结果表明，该技术可以有效地将VEGF164基因导入到小鼠基因组中，并在转基因小鼠中表达良好。