金沙江和长江长薄鳅人工繁殖及胚胎发育
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收稿日期:2017-11-14作者简介:张运海(1988-),男,河南潢川人,助理工程师,硕士,主要从事濒危鱼类保护及水生态修复相关科研工作,(电话)181********(电子信箱)1039980386@。
长薄鳅(Leptobotia elongata )隶属于鲤形目鳅科沙鳅亚科薄鳅属,别名花鱼、花斑鳅、花泥鳅、红沙鳅钻、火军、花鳅等,是中国长江中上游特有珍稀鱼类,也是目前已知的鳅科鱼类中体型最大的一种[1]。
长薄鳅主要摄食底层小型鱼类及底栖动物。
近年来,水生态系统遭受严重威胁,特别是长江上游江段及金沙江江段,由于水电站的梯级开发,使得野生鱼类生境发生剧烈变化;加之过度捕捞,使长薄鳅的野生种群受到严重威胁。
目前长薄鳅在《中国物种红色名录》《中国濒危动物红皮书鱼类》中均被列为易危(VU)等级。
为了对水电影响江段野生鱼类资源进行补偿,中国多个水电站采取人工增殖放流的方式对流域渔业资源进行修复。
2017年分别在四川省乐山的安谷水电站鱼类增殖放流站和四川攀枝花的观音岩水电站鱼类增殖放流站进行长薄鳅的人工繁殖,并取得成功。
1材料与方法1.1材料所用的试验材料为天然水域人工采集的野生亲本,其中观音岩水电站鱼类增殖放流站的长薄鳅亲本采集于金沙江攀枝花江段,采集时间为2016年5金沙江和长江长薄鳅人工繁殖及胚胎发育张运海,丁瑶,顾正选,黄学潇,余泽文,舒敏(武汉中科瑞华生态科技股份有限公司,武汉430083)摘要:2017年6-7月分别对采集于金沙江攀枝花江段和长江泸州江段的长薄鳅(Leptobotia elongata )进行人工繁殖试验,同时对金沙江攀枝花江段的长薄鳅进行胚胎发育的观察。
结果表明,共催产长薄鳅4组,共获得鱼苗1.8万尾,长薄鳅雌性亲本成熟较雄鱼早,雌雄发育同步期在6月底。
在水温24℃条件下对胚胎进行观察,发现受精卵发育为原肠胚的时间为5.0h ,平均出膜时间为31.0h ,出膜仔鱼平均长度为5.2mm ,出膜前鱼体长度与卵膜直径相当,在卵膜内能够伸直鱼体自由游动,这与其他鳅科鱼类以及多数鲤科鱼类有所不同。
关键词:长薄鳅渊Leptobotia elongata );金沙江;长江;人工繁殖;胚胎发育中图分类号:S917文献标识码:A文章编号:0439-8114(2018)08-0104-04DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2018.08.026Artificial Propagation and Embryonic Development Observation of Leptobotia elongatafrom Jinsha River and Yangtze RiverZHANG Yun-hai ,DING Yao ,GU Zheng-xuan ,HUANG Xue-xiao ,YU Ze-wen ,SHU-Min(Wuhan Sinoeco Ecological Science and Technology Co.,Ltd.,Wuhan 430083,China)Abstract :Artificial propagation of Leptobotia elongata collected from the Panzhihua section of Jinsha river and Luzhou section of Yangtze river were studied from June to July in 2017.At the same time the embryonic development of Leptobotia elongata from Panzhihua section of Jinsha River were observed.In the experiment of artificial inducing spawning of 4parents 18000fries were received,the study indicated that the females matured earlier than the males,The time they both reach sexual ma⁃turity may be in the end of June.Gastrula began in 5.0h at 24℃,and the average hatching time was 31.0h,the average length of the larvae was 5.2mm.Before hatching the length of larvae and the diameter of egg membrane was about equal.the fish was able to stretch and swim freely in the egg membrane.This was different from other Cobitidae and most ofCyprinidae.Key words :Leptobotia elongata ;Yangtze river;Jinsha river;artificial propagation;embryonic development第8期亲本采集地点金沙江攀枝花江段长江泸州江段出苗率//%333380催产时间06-149:0006-1415:0007-1118:2007-1123:50水温//℃2524效应时间//h7.07.5获得卵数//万粒3.02.3表1长薄鳅人工催产效果针次第一针第二针第一针第二针药物及剂量:LHRH-A32μg/kg:不注射:LHRH-A315μg/kg+PG8mg/kg+HCG800IU/kg:剂量为雌鱼的1/2:LHRH-A32μg/kg:不注射:LHRH-A315μg/kg+PG8mg/kg+HCG1000IU/kg:剂量为雌鱼的1/3受精率//%第一组50第二组50第一组65第二组95出苗数//万尾1.00.8月27日,采集后对鱼体进行消毒处理,消毒后将亲本暂养于循环水养殖系统中,催产时间为2017年6月14日;安谷水电站鱼类增殖放流站的长薄鳅采集于长江泸州江段,采集时间为2017年7月11日,由于亲本发育良好,采集后立即运回增殖放流站进行人工催产。
1.2方法1.2.1亲本选择选择体表无伤,活力较强的个体作为亲本,通常繁殖季节雌性长薄鳅腹部柔软膨大,可见明显的卵巢轮廓,雄鱼腹部轮廓不明显,生殖孔微红,轻压雌鳅腹部有乳白色精液流出,并且遇水即溶解。
1.2.2人工催产采用PG、HCG、LHRH-A33种催产药物进行催产,其中第一针所用的催产剂为LHRH-A3,注射剂量为2μg/kg,雄鱼不注射。
第二针采用混合催产剂,其中PG用量为8mg/kg,LHRH-A3用量为15μg/kg,HCG用量为800~1000IU/kg,雄鱼视发育情况(精子遇水扩散快则发育好,慢则发育一般)注射剂量为雌鱼的1/3~1/2,针距6h,催产水温23~ 25℃。
注射催产剂后将亲本放入催产池,开流水刺激,密切观察亲本动态,若出现追逐,可将雌鱼捞起,轻轻挤压腹部,若有卵粒流出便可进行人工授精。
1.2.3人工授精由于长薄鳅精子量较少,挤出的精液很容易黏连在体壁上难以落入采卵盆中,因此采集精液时,一人将雄鱼抓起,腹部朝上,一人配合擦干生殖孔周围水分,轻压雄鱼腹部,用干燥的吸管吸取精液,吸取精液后将精液滴入预先配置好的精子保存液中,保存液参照丁淑荃等[2]的精子保存液配方。
将雌鱼抓起,并擦干生殖孔及尾部的水分,一只手从背部抓住雌鱼,一只手从尾部抓住,同时将尾部略朝背侧弯曲,以免造成鱼卵沿尾部流下造成鱼卵损失,注意从头向尾部方向慢慢推压腹部,将鱼卵挤入干燥的白瓷盆中,可连续推压多次,直到挤不出鱼卵为止,避免用力过度造成雌鱼损伤。
精卵采集完成后将保存液中的精子加入鱼卵中,用羽毛沿一个方向轻轻搅拌均匀,加入充分曝气的洁净清水激活精子完成受精,加入的水量为鱼卵量的2倍左右,缓慢搅拌1min让精卵充分结合,然后将用清水将鱼卵带水漂洗干净。
1.2.4人工孵化及胚胎发育观察受精完成后将鱼卵倒入孵化桶进行孵化,刚开始水流适当加大,每隔15~20min取样观察受精卵发育情况,拍照并记录发育时期,待原肠胚中期统计受精率。
鱼苗破膜前期减小孵化桶的水流直到鱼苗完全出膜,观察鱼苗形态并统计出苗率。
发育时期的划分参照文献[3],有一半以上个体达到特定时期发育特征方可记录发育时间。
2结果与分析2.1人工繁殖效果分别于2017年6月14日和2017年7月11日对金沙江攀枝花江段和长江泸州江段采集的长薄鳅亲本进行人工催产(表1)。
催产金沙江攀枝花江段采集的长薄鳅亲本2组,催产水温25℃,效应时间7h,催产率100%,获得鱼卵3万粒,受精率50%左右,出苗1万尾左右,平均出苗率33%;催产长江泸州江段采集的长薄鳅亲本2组,催产水温24℃,效应时间7.5h,催产率100%,其中第一组受精率65%,第二组受精率95%,第一组由于鱼卵过熟没有出苗,第二组出苗率80%,获得鱼苗8000尾左右。
2.2胚胎发育观察长薄鳅卵受精后吸水膨胀,吸水后平均卵径约4.1mm,比重与水相当,鱼卵无黏性,属典型漂流性卵。
受精后约40min动物极逐渐隆起形成胎盘。
此后进入卵裂期,每隔20min左右卵裂一次,3.0h后卵裂期进入尾声,细胞逐渐变得很小以至于难以分辨,逐渐隆起,形成最初的胚层,3.5h后胚层逐渐抬高,形似西洋绅士帽,覆盖于卵黄囊上方,此后胚层逐渐降低并向卵黄囊顶部靠近,随着囊胚层与卵黄张运海等:金沙江和长江长薄鳅人工繁殖及胚胎发育105湖北农业科学2018年发育时期胎盘隆起期2细胞期4细胞期8细胞期16细胞期32细胞期64细胞期多细胞期囊胚期原肠胚早期原肠胚中期原肠胚晚期神经胚期胚孔封闭期肌节出现期眼囊期听囊期尾牙出现期耳石期孵出期积温//(h ·℃)19.226.433.640.848.055.262.472.084.0120.0168.0228.0264.0288.0312.0336.0360.0396.0540.0672.0主要特征动物极隆起形成胎盘胎盘中间凹陷形成分裂沟,胎盘分裂为大小相似的2个分裂球2细胞纵裂形成4个细胞,分裂线与上一次分裂相互垂直4细胞纵裂出现8个细胞细胞呈4×4的形状,细胞个体大小开始出现差异细胞呈4×8排列,每排细胞排列并不规则,呈现错开排列细胞分裂不同时进行,细胞排列不规则,细胞大小没有规律,细胞间隙逐渐模糊卵裂速度逐渐增加,细胞逐渐变小,细胞多至难以分清胚层高高隆起,形似西洋绅士帽,并随着时间的推移,胚层逐渐下降,很难分清细胞界限胚层下包至卵黄囊正中部胚盾显现雏形,卵黄囊被胚层包被约2/3胚层下包距卵黄囊底部约1/4,胚层不对称,胚体分化开始卵黄囊几乎完全被胚层包住,胚体逐渐形成,似一条粗线,神经板开始发育胚层完全包裹卵黄囊,胚孔封闭,胚体清晰可见胚体中部开始出现肌节胚体近脑端开始出现椭圆形眼囊眼囊后方出现一卵圆形的耳囊,脊索已经非常明显胚体末端逐渐脱离卵黄囊,形成独立的尾牙耳石出现卵膜逐渐塌陷,鱼苗通过头部撞击和摆动尾部破膜而出表2长薄鳅胚胎不同发育时期特征发育时间//h0.71.11.41.72.02.32.63.03.55.07.09.511.012.013.014.015.016.522.528.0图序1234567891011121314151617181920囊的界限逐渐模糊,胚层下包开始意味着囊胚期的结束。