・４７０・ 旦 王壁痘盘查 ！ 生 箜】３卷第６期．，ｃ 日ｅｐ ｏｌ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１０．ｖ０１．１３ Ｎ ｏ．６
脐带血间充质干细胞研究中的若干问题
李翠王延 木 ・综述・
【摘要】随着脐血造血干细胞研究的不断深入，人们对脐血中存在的另一种干细胞一问充质干细胞（ｍｅｓ—
ｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）的生物学特性及分化能力有了进一步的认识，并且作了大量的研究。近年来在脐带血间充质干
细胞的分离培养，以及其作为一种新的细胞来源用于细胞替代治疗、基因治疗以及组织工程等方面，有了更进一步
的研究和发现，同时也存在很多尚未解决的问题。本文就此几点进行综述。
【关键词】间充质干细胞；基因治疗；组织工程 ・
ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７２—５０６９．２０１０．０６．０２８
１９８８年Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ等首先以实验证明脐带血（ｈｕｍａｎ
ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ，ＨＵＣＢ）中富含造血干细胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉ—
ｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＨＳＣｓ）。同年，法国Ｇｌｕｃｋｍａｎ等 １亦在巴黎圣
路易斯医院第１次利用脐带血成功治疗了一名患有ｆａｎｅｏｎｉ
贫血症的儿童。自此以后人们对于一直被当成废弃物丢掉的
胎盘和脐带血有了全新的评价和认识。
随着脐血造血干细胞的广泛应用，脐带血干细胞作为一
种易获得的细胞逐渐受到人们的重视。同时各国学者进行了
大量基础性研究发现，脐带血不仅含有相当数量的造血干细
胞而且还含有丰富的间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ），同骨髓源性ＭＳＣｓ相似，脐带血间充质干细胞
（ＨＵＣＢ—ＭＳＣｓ）作为一种中胚层发育的早期细胞也具有自我
复制及多向分化潜能，并在体外特定的诱导条件下，可分化
为肌细胞［２１、成骨细胞ｉ３一、脂肪细胞１５１、神经细胞［６１、肝细胞 和
心肌细胞１８］等多种细胞。因此ＨＵＣＢ—ＭＳＣｓ也日渐被人们重 视，利用其多项分化潜能，在组织工程、细胞因子替代治疗，
脐带间充质干细胞分离培养操作细则
一、样本接收
1. 观察运输箱的温度是否符合要求，采集瓶有无渗漏。
2. 查看客户信息是否与交接表一致。
3. 样本采集瓶外表面喷酒精擦拭消毒，并粘贴样本编码，填写样本接收记录，传入洁净区准备制备。
二、脐带间充质干细胞分离与接种
1）准备耗材试剂：10cm培养皿、15ml离心管、50ml离心管、离心管架、10ml移液管、T75培养瓶、离心管架、无尘布、50ml注射器针头、封口膜、灭菌止血钳、灭菌镊子、灭菌剪刀、废液缸、无血清干细胞培养基（常温复温）、生理盐水、75%酒精（已过滤）。
2）仪器设备准备及预热：电动移液枪、生物安全柜、离心机
3）将75%酒精喷到台面，用无尘布擦拭台面，包括侧面及玻璃。
4）将生物安全柜开紫外30min通风10min，样本喷酒精擦拭，放入生物安全柜中，电动移液枪、移液管、离心管、离心管架喷酒精擦拭放入生物安全柜中，无菌棉球放入到广口瓶中加75%酒精放入生物安全柜中。50ml、15ml离心管放到离心管架上，10cm皿5-7个。将装有灭菌器械的灭菌盒喷酒精擦拭放入生物安全柜中。
5）取5个10cm皿依次摆开，1，2，4，5号皿依次加入适量的生理盐水，3号皿加入适量的已过滤的75%酒精。拿出灭菌盒中已灭菌的止血钳，将脐带从保存瓶中取出放到第一个皿里，并取适量样本保存液留样送检支原体。使用两个止血钳将脐带在第一个皿里清洗尽量去除脐带外表面的血污以及动静脉的血液和血凝块，将
脐带转移至2号皿中，同样的方法再次清洗一次并测量其长度。
6）将清洗干净的脐带转移到装有已过滤75%酒精的3号皿中浸泡1min左右（不要超过两分钟），计时结束后，将脐带转移至4号皿中，同样的洗涤方法去除酒精。清洗结束后将脐带剪成1-2cm短节，放入5号皿中，再次洗涤尽量去除血管内的血污。再次拿两个10cm皿，加入适量的生理盐水，去一皿的盖子加少许盐水湿润底部及可。
7）将1-2cm的脐带小段转移到新的皿里，用带齿口的镊子取一段脐带，将脐带展开，再按血管走势剔除脐带的两条动脉，一条静脉。用组织镊将华通氏胶撕下，并放入到新的加有生理盐水的培养皿中。
脐带间充质干细胞生物学有效性及临床研究进展
摘要：目的：研究脐带间充质干细胞(hMSCs)生物学有效性。方法：本实验以PHA刺激淋巴细胞作为反应体系，观察hMSCs与淋巴细胞共培养时增殖的变化，培养体系分为阴性对照组、阳性对照组、实验组。结果：在共培养接触体系中不同数量hMSCs对淋巴细胞增殖具有抑制作用，且hMSCs浓度越高，抑制作用越强，具有剂量依赖性。结论：间充质干细胞在不同类型的炎症环境中，可由静息状态转变成激活状态，通过细胞间相互作用和分泌可溶性免疫调控因子，调节多种免疫细胞的增殖、分化、活化以及炎症因子的分泌功能。MSC的免疫调控功能是其临床应用中重要的生物学有效性质量属性，对这一质量属性的有效评价，是指导MSC产品研发及临床应用中最为相关的质量控制内容之一。近年来人们对MSC免疫调控功能的认识及其与临床应用的相关性，在此基础上提出了针对治疗性MSC产品免疫调控功能的评价策略，为在我国建立和完善MSC生物学有效性评价体系奠定基础。
关键词：脐带间充质干细胞；物学有效性；免疫调控功能
前言：间充质干细胞是具有高度自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌肉细胞以及神经细胞等，其免疫原性低，几乎影响免疫系统的所有细胞，具有免疫调节作用[1]。但其免疫调节作用机制不明确，我们通过研究hMSCs对异体淋巴细胞增殖的影响，进一步探讨hMSCs的免疫调节作用的可能机制，为hMSCs应用于临床提供一定基础。
1 材料与方法
1.1 材料 脐带间充质干细胞(hMSCs)和淋巴细胞（PBMC）均由生产提供。间充质干细胞无血清培养基；牛血清(FBS)；10XPBS；灭菌注射用水；PHA（植物血凝素）；CFSE；无水DMSO；荧光抗体；48孔板；流式细胞仪。
1.2 方法
1.2.1 hMSCs表型鉴定
调整细胞浓度，使用荧光抗体进行标记，不加抗体作为空白对照；室温避光孵育，洗涤后检测。
人脐带间充质干细胞来源外泌体的提取、鉴定和蛋白组学分析
摘要：目的：探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体进行提取鉴定和蛋白组学。方法：培养人脐带间充质干细胞并采用超滤序贯超离法提取外泌体，通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、蛋白质定量、蛋白质印迹法及蛋白组学分析等技术鉴定。结果①所抽取的外泌体分散度比较好，而且均匀。②，外泌体粒径分布的高峰为（129.5+8.7) nm，它的膜表面是带有负电荷的，其浓度为8.375>109颗粒/ml，平均 zeta电位为（-28.1+3.6) mV。③ 外泌体中存在着一类特殊的膜蛋白，即CD9,CD63等。④蛋白质组学研究发现外泌体中的大部分蛋白都具有较高的活性，它们涉及到 RNA剪接、 mRNA加工、蛋白质折叠等生物学过程，涉及到 RNA/DNA等基因材料的合成、加工、降解等过程。结论：经研究发现，人脐带间充质干细胞外泌体与其母系细胞存在某种“同质”、“差别”，且这些“差别”的蛋白质功能与其自身的免疫学特性都不相关，从而证实人脐带间充质干细胞外泌体具有较小的免疫学活性及较高的安全性。
关键词：人脐带间充质干细胞；外泌体;蛋白组学:免疫原性
引言：
间充质干细胞起源于中胚层，它是一种能够在各种组织中进行定向分裂并进行自身增生的干细胞，它可以从各种组织中被提取，比如脐带、子宫内膜息肉、月经期血液、骨髓、脂肪组织等，由于它的来源多样化，并且可以大规模地获取，所以它在实验和临床上都有着非常重要的研究价值。本课题拟通过分离人脐带间充质干细胞源性外泌体，并通过比较两者的蛋白质组水平上的差别，验证其在体外的免疫活性，进而验证其在临床上的应用前景，并评估其在临床应用中的应用前景。
一、资料与方法 1.1一般资料
选取本企业2021年8月至2022年8月该时间段接受人脐带充质干细胞来源外泌体进行提取鉴定和蛋白组学分析的足月产新生儿脐带50例。
1.2方法
1．2.1人脐带间充质干细胞培养及鉴定
