水溶C100中还原型抗坏血酸的测定 二氯酚靛酚滴定法

一. 目的掌握滴定法测定Vc含量的基本原理和操作。

二. 原理L-抗坏血酸（Vc）中的—C=C—基具有还原性，还原型L-抗坏血酸能与氧化剂染料2,6-二氯酚靛酚作用，染料本身被还原成无色的衍生物，同时还原态的L-抗坏血酸被氧化成无色的脱氢L-抗坏血酸。

一定量的样品提取液还原标准染料的量与样品中所含Vc的量成正比。

染料2,6-二氯酚靛酚在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈粉红色。

用2,6-二氯酚靛酚滴定样品，在达到终点之前，滴下的2,6-二氯酚靛酚立即被还原成无色；当溶液中的L-抗坏血酸被消耗完时，滴下的过量的2,6-二氯酚靛酚在酸性体系里呈现粉红色。

所以当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。

三. 实验材料及设备1. 材料新鲜蔬菜2. 仪器电子天平3. 器材滴定管：25mL×1移液管：10mL×2 20mL×1容量瓶：100mL×1量筒：50mL×1锥形瓶：100mL×4研钵：1套烧杯：250mL×2 50mL×1洗瓶：1个纱布：20cm×20cm 1块四. 试剂的配制1. 草酸溶液（2%）每组配制250mL2. 2,6-二氯酚靛酚溶液分别称取2,6-二氯酚靛酚300mg、碳酸钠300mg，用热蒸馏水200mL溶解并定容至3000mL（过滤除去难溶颗粒，置于棕色瓶中，贮于冰箱中备用。

有效期一周，使用前需标定，见附注。

）五. 操作步骤1. 样品液的制备(1) 取材：称取新鲜黄瓜10g左右，准确记录称样量g,再称量2.5g草酸，与样品一起用纱布包裹住。

(2) 研磨：样品包置研钵中，加15mL2%草酸，用研棒挤压样包，将样品充分磨细。

将汁液转移到100mL容量瓶中。

残渣再加15mL2%草酸，继续研磨，汁液再合并到上述容量瓶中。

如此反复研磨2～3次，合并汁液。

(3) 定容：最后用2%草酸定容至V=100mL，摇匀备用。

实验六果蔬维生素C(抗坏血酸)的测定（2，6二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的与要求1 目的新鲜食品中的维生素C主要以还原型的形式存在，测定还原型维生素C可以粗略了解该食品中维生素C的浓度。

2 要求掌握新鲜食品中的维生素C的常规化学测定方法。

二、实验原理还原型维生素C可以还原2，6二氯酚靛酚（蓝色）。

被测样品中维生素C含量与2，6二氯酚靛酚的量呈正比，且2，6二氯酚靛酚在酸性条件下呈粉红色。

当用2，6二氯酚靛酚标定样品溶液时，其终点为被测溶液呈粉红色。

CH2OH还原型维生素CCHHOCHOCHOCHOCO+OH2，6二氯酚靛酚（红色）NClOCl→CH2OH脱氢型维生素CCH2OH脱氢型维生素CCHOCHOCOCOCO+OH2，6二氯酚靛酚（蓝色）NHClOHCl三、实验仪器与试剂1 仪器（1）公用仪器①组织捣碎机1台；②托盘天平1台；③ 1000ml烧杯2个；④ 250ml烧杯2个；⑤ 20cm镊子1把；⑥记号笔1~2个。

(2) 分组及仪器： 2人一组，每组仪器包括：① 100ml具塞量筒2个；② 10ml量筒1个；③ 5ml移液管2根；④酸式滴定管1个；⑤ 50ml烧杯2个；⑥ 50ml三角烧瓶4个；⑦漏斗2个；⑧漏斗架1个；⑨滤纸2张；⑩吸耳球1个；玻璃棒1个。

（所有仪器使用前清洗，烘干备用）2 试剂（1） 2，6二氯酚靛酚染料，配制成每毫升所含维生素C的毫克数（T值）；（2） 2%草酸2000ml；（3） 1%草酸2000ml。

四、实验步骤1 取300~500g新鲜水果，置于1000ml烧杯内，称重，精确至0.01g。

2 将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（W∶V），加盖旋紧，匀浆2~5min。

3 取出匀浆物质（以上统一进行）。

4 用50ml烧杯称取20g匀浆物质，精确度1%，编号，记录。

5 将称取的匀浆物质倒入具塞量筒，用1%草酸反复洗涤烧杯（3次），其洗涤液倒入具塞量筒，并用1%草酸定容到100ml。

二氯靛酚滴定法
一、实验目的
掌握2,6-二氯靛酚测定维生素C的原理和方法。

二、实验原理
还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。

还原型抗坏血酸还原2,6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。

在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。

反应式如下：
三、实验仪器与试剂：
1.仪器：组织捣碎机、天平、50mL锥形瓶、100mL容量瓶、10mL移液管、碱式滴定管、漏斗、漏斗架
2.试剂
(1) 2％草酸溶液：溶解20克草酸结晶于200毫升水中，然后稀释至1000mL。

(2) 1％草酸溶液：取上述2％草酸溶液500mL，用水稀释至1000m1。

(3) 抗坏血酸标准溶液：准确称取20mg抗坏血酸，溶于1％草酸溶液中，移入l00mL容量瓶中，并用1％草酸溶液稀释至100毫升，混匀，置冰箱中保存。

使用时吸取上述抗坏血酸标准溶液5mL，置于50毫升容量瓶中，用1％草酸溶液定容之。

此标准使用液每毫升含0.02mg维生素C。

标定：吸取标准使用液5m1于三角烧瓶中，加入6％碘化钾溶液0.5mL，1％淀粉溶液3滴，再以0.001N碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。

计算如下：
抗坏血酸浓度（mg/mL）=( V1×0.088)/V2
V1：滴定时所耗0.001N碘酸钾标准溶液的量(mL)。

实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。

在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。

因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。

如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。

二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。

2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。

3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。

4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。

（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。

四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。

（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。

实验十五抗坏血酸含量测定（2,6-二氯酚靛酚法）一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C 的原理和方法。

二、原理维生素C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。

此外维生素C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。

维生素C的分布很广，尤其在水果（如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等）和蔬菜（觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等）中的含量更为丰富。

不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。

测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。

维生素C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素C易丢失。

此外在碱性溶液中，维生素C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。

利用它具有的还原性质可测定其含量。

还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。

因此用2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。

用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。

三、仪器、试剂和材料1．仪器（1）天平（2）组织捣碎机（3）微量滴定管（5ml）（4）容量瓶（50ml）（5）刻度吸管（5ml，10ml）（6）锥形瓶（100ml）2．试剂（1）l％草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水中（2）2％草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中（3）抗坏血酸标准溶液（0.1 mg／ml）：精确称取10mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）用1％草酸溶液溶解并定容至100ml。

维生素C的定量测定维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的：掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理1、维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。

2、在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚成红色，被还原后变为无色。

因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品中的维生素C被完全氧化后，在滴加过量的2，6-二氯酚靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。

3、如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯酚靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。

三、实验仪器1、新鲜猕猴桃2、50ml容量瓶3、微量滴定装置4、100ml锥形瓶5、研钵6、漏斗7、吸管四、实验试剂1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水2、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液五、实验步骤1.样品中抗坏血酸的提取：1）将猕猴桃去皮，准确称取果肉5.090g，加2%草酸试剂10ml 置研钵中研成浆状；2）将浆状物倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。

2.滴定样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分别放入两个100ml 锥形瓶中，用2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色。

滴定终点要保持15秒钟；六、实验结果：已知：1ml2，6-二氯酚靛酚染料相当于1毫克抗坏血酸初始读数/ml 最终读数/ml共用染液/ml抗坏血酸毫克数/mg10ml滤液平均含抗坏血/mg50ml滤液含抗坏血/mg滤液1 0.011 1.604 1.593 1.593 1.589 7.945 滤液2 0.048 1.633 1.585 1.585由上表可知5.090g猕猴桃果肉含7.945mg抗坏血酸素，则100g 猕猴桃果肉中含抗坏血酸素约156.090mg.七、实验结果分析与思考：1.2,6-二氯酚靛酚滴定法测定Vc含量的优缺点?优点：它具有简便易行、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。

维生素C的测定 2,6一二氯靛酚滴定法维生素c的测定-2,6一二氯靛酚滴定法实验六、维生素c的测定――2，6一二氯靛酚滴定法（1）原理还原型抗坏血酸可以还原染料2，6一二氯靛酚。

该染料在酸性溶液中就是粉红色（在中性或碱性溶液中呈圆形蓝色），被还原成后颜色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本身被水解成过氧化氢抗坏血酸。

在没杂质阻碍时，一定量的样品提取液还原成标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。

（2）试剂①1%草酸溶液（m/v）②2%草酸溶液（m/v）③抗坏血酸标准溶液精确称取20mg抗坏血酸，溶1%草酸溶液，并吸收至100ml，复置冰箱中留存。

用时抽出5ml，放在50ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，硝酸锶0.02mg／ml的标准采用液。

标定吸取标准使用液5ml于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5ml、1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/l碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。

v1?0.088v排序c＝2式中c――抗坏血酸标准溶液的浓度，mg/ml；v1―一滴定时消耗0.001mol/l碘酸钾标准溶液的体积，ml；v2―一滴定时所挑抗坏血酸的体积，ml；0.088―一1ml0.001mol/l碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/ml④2，6-二氯靛酚溶液称取2，6-二氯靛酚50mg，溶200ml所含52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。

次日过滤于250ml棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。

每星期标定一次。

标定挑5ml未知浓度的抗坏血酸标准溶液，重新加入1%草酸溶液5rnl，容器，用2，6-二氯靛酚溶液电解至溶液呈圆形粉红色，在15s不退色为终点。

c?v1计算：t＝v2式中t―一每毫升染料溶液相等于抗坏血酸的毫克数，mg/ml；c―一抗坏血酸的浓度，mg/ml；v1－一抗坏血酸标准溶液的体积，ml；v2――消耗2，6-二氯靛酚的体积，ml。

⑤0.000167mol／l碘酸钾标准溶液准确称取潮湿的碘酸钾0.3567g，用水吸收至100ml，抽出lml，用水吸收至100ml，此溶液lml相等于抗坏血酸0.088mg。

食品中维生素C 含量的测定——2,6-二氯靛酚滴定法测定还原型抗坏血酸一、目的与要求学会用滴定法测定还原型抗坏血酸。

二、实验原理还原型抗坏血酸能定量地还原染料2,6-二氯靛酚。

该染料在中性或碱性溶液中呈粉红色，滴定时还原型抗坏血酸将染料还原为无色，本身被氧化为脱氢抗坏血酸，终点时过量的染料在溶液中呈粉红色，在没有杂质干扰时，样品提取液所还原的标准染料量与样品中的还原型抗坏血酸量呈正比。

三、试剂材料及仪器（1）2%草酸溶液 溶解20g 草酸于1000mL 水中。

（2）1%草酸溶液（3）抗坏血酸标准溶液 称取20mg 分析纯抗坏血酸溶解于1%草酸溶液中，移入100mL 容量瓶，用1%草酸溶液稀释至刻度，摇匀，于冰箱中保存。

使用时用1%草酸溶液稀释10倍。

此标准使用液相当0.2mg/mL 维生素C 。

也可用下法标定：吸取维生素C 使用液20.00mL 于锥形瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5mL 、1%淀粉溶液3滴，使用微量滴定管，用0.001mol/mL 碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色，计算公式如下：21088.0mg/mL V V ⨯=）抗坏血酸浓度（ 式中，1V 为消耗0.001mol/mL 碘酸钾标准溶液的量，mL ；2V 为吸取抗坏血酸使用液的量，mL ；0.088为1mL0.001mol/mL 碘酸钾标准溶液相当于0.088mg 抗坏血酸。

(4)2,6-二氯靛酚钠溶液 称取2,6-二氯靛酚钠50mg ，溶解并稀释至250mL ，此液应贮于棕色瓶中并冷藏，用时依下法标定：吸取20.00mL 已知浓度的抗坏血酸标准溶液于锥形瓶中，用2,6-二氯靛酚钠溶液滴定至溶液呈粉红色，15s 不褪色为滴定终点，计算染料溶液对抗坏血酸的滴定度T 。

21V V c T ⨯=式中，c 为抗坏血酸的浓度，mg/mL ；1V 为吸取抗坏血酸的体积，mL ；2V 为消耗染料溶液的体积，mL 。

（5）0.100mol/mL 碘酸钾溶液 精确称取干燥的碘酸钾0.3567g ，用水溶液并定容于100mL 容量瓶，混匀。