食物中还原型维生素C的测定-2, 6-二氯酚靛酚滴定法课件

维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2, 6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。

（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。

（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。

二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。

维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C乂称为抗坏血酸。

水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。

不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。

测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。

维生素C具有很强的还原性。

它可分为还原性和脱氢型。

金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。

2, 6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈 红色。

抗坏血酸具有强还原性, 能使2, 6-二氯酚靛酚还原褪 色，其反应如图：当用2, 6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时， 滴下的2, 6-二氯酚靛酚被还原 成无色；当溶液中的抗坏血酸 全部被氧化成脱氢抗坏血酸 时，滴入的2, 6-一.氯酚靛酚立抗坏血酸 （蓝色） Cl o HO —CH CH 2O H CF 2.6•二氮（•红色）HO —CHO 一CIH —C脫氢抗坏血酸 还原型2,&二氨酚靛蜀（无色）即使溶液呈现红色。

因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。

三、实验材料、主要仪器和试剂：1(实验材料：多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器：(1)天平(2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL, 10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸(5)锥形瓶(lOOmL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HC1)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黃色则不能用)(225mg,溶于25ml 4,HC1中，移入50ml容量瓶中，用蒸憎水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml中含抗坏血酸O.omg, o(3)0. 01M 2, 6,二氯酚靛酚准确称0. 25g氧化型2, 6,二氯酚靛酚、0. 21g碳酸氢钠溶于250ml热蒸镭水中，稀释至1000ml,充分振摇，装入棕色瓶内，置冰箱内过夜，临用前过滤，用标准Vc标定其浓度。

维生素C的测定 2,6一二氯靛酚滴定法维生素c的测定-2,6一二氯靛酚滴定法实验六、维生素c的测定――2，6一二氯靛酚滴定法（1）原理还原型抗坏血酸可以还原染料2，6一二氯靛酚。

该染料在酸性溶液中就是粉红色（在中性或碱性溶液中呈圆形蓝色），被还原成后颜色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本身被水解成过氧化氢抗坏血酸。

在没杂质阻碍时，一定量的样品提取液还原成标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。

（2）试剂①1%草酸溶液（m/v）②2%草酸溶液（m/v）③抗坏血酸标准溶液精确称取20mg抗坏血酸，溶1%草酸溶液，并吸收至100ml，复置冰箱中留存。

用时抽出5ml，放在50ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，硝酸锶0.02mg／ml的标准采用液。

标定吸取标准使用液5ml于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5ml、1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/l碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。

v1?0.088v排序c＝2式中c――抗坏血酸标准溶液的浓度，mg/ml；v1―一滴定时消耗0.001mol/l碘酸钾标准溶液的体积，ml；v2―一滴定时所挑抗坏血酸的体积，ml；0.088―一1ml0.001mol/l碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/ml④2，6-二氯靛酚溶液称取2，6-二氯靛酚50mg，溶200ml所含52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。

次日过滤于250ml棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。

每星期标定一次。

标定挑5ml未知浓度的抗坏血酸标准溶液，重新加入1%草酸溶液5rnl，容器，用2，6-二氯靛酚溶液电解至溶液呈圆形粉红色，在15s不退色为终点。

c?v1计算：t＝v2式中t―一每毫升染料溶液相等于抗坏血酸的毫克数，mg/ml；c―一抗坏血酸的浓度，mg/ml；v1－一抗坏血酸标准溶液的体积，ml；v2――消耗2，6-二氯靛酚的体积，ml。

⑤0.000167mol／l碘酸钾标准溶液准确称取潮湿的碘酸钾0.3567g，用水吸收至100ml，抽出lml，用水吸收至100ml，此溶液lml相等于抗坏血酸0.088mg。

维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2, 6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。

（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。

（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。

二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。

维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C乂称为抗坏血酸。

水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。

不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。

测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。

维生素C具有很强的还原性。

它可分为还原性和脱氢型。

金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。

2, 6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈 红色。

抗坏血酸具有强还原性, 能使2, 6-二氯酚靛酚还原褪 色，其反应如图：当用2, 6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时， 滴下的2, 6-二氯酚靛酚被还原 成无色；当溶液中的抗坏血酸 全部被氧化成脱氢抗坏血酸 时，滴入的2, 6-一.氯酚靛酚立抗坏血酸 （蓝色） Cl o HO —CH CH 2O H CF 2.6•二氮（•红色）HO —CHO 一CIH —C脫氢抗坏血酸 还原型2,&二氨酚靛蜀（无色）即使溶液呈现红色。

因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。

三、实验材料、主要仪器和试剂：1(实验材料：多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器：(1)天平(2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL, 10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸(5)锥形瓶(lOOmL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HC1)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黃色则不能用)(225mg,溶于25ml 4,HC1中，移入50ml容量瓶中，用蒸憎水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml中含抗坏血酸O.omg, o(3)0. 01M 2, 6,二氯酚靛酚准确称0. 25g氧化型2, 6,二氯酚靛酚、0. 21g碳酸氢钠溶于250ml热蒸镭水中，稀释至1000ml,充分振摇，装入棕色瓶内，置冰箱内过夜，临用前过滤，用标准Vc标定其浓度。

实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法一、测定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。

抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO —C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。

2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。

因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。

还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。

当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。

在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。

根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。

在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。

反应式如下：二、实验仪器与试剂1.仪器组织捣碎机；水果刀；托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒；蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸；20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。

2.原料及试剂本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。

(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。

(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。

(3)抗坏血酸标准溶液：称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。

(4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液：称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。

2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C一、目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。

二、原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。

最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效。

维生素C能够还原染料2,6-二氯酚靛酚，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。

2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，被还原后成无色。

当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全。

因此，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。

三、试剂和器材（一）试剂2%草酸溶液：2g草酸溶于100ml蒸馏水中1%草酸溶液：1g草酸溶于100ml蒸馏水中标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）: 准确称取50mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至500mL，贮于棕色瓶中，冷藏。

最好临用前配制。

存，冷藏(最好临用时配置)；5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液，棕色瓶贮存，冷藏(4℃下可保存一周)，临用时以标准抗坏血酸液标定。

0.1%2.6―二氯靛酚溶液称取2.6―二氯靛酚钠盐500mg，溶于300ml热水中，冷后加水稀释至500ml，过滤后盛于棕色药瓶内，保存在冰箱中。

（二）器材1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等)；2. 吸管1.0ml、10.0ml；3. 容量瓶25ml, 100ml；4. 微量滴定管5ml；5. 天平；6. 研钵；7. 漏斗Φ8cm.。

四、操作步骤1. 样液制备适量称取青椒一份10g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，抽滤（或四层纱布过滤，纱布再用少量2%草酸洗几次，合并滤液），滤液转入50ml容量瓶后用2%草酸定容，若不易过滤研磨后以2%草酸洗涤，离心(4000r/min，10min)2—3次，合并上清液于50mL 容量瓶中，定容至刻度。