大肠杆菌O-抗原血清型鉴定研究进展

李迎晓，焦凤超，易本驰，等．猪源大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验［J］．江苏农业科学，2013，41（1）：217－218．

猪源大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

李迎晓，焦凤超，易本驰，何敏，陈敏（信阳农业高等专科学校动物科学系，河南信阳464000）摘要：从河南省信阳市规模化猪场腹泻仔猪病例中分离到4株革兰氏阴性杆菌，通过细菌培养特性、细菌形态和生化试验，确定为大肠杆菌。经O血清型鉴定，分离株为O8、O157、O117、O38。动物试验结果显示，4个分离菌株对小鼠有较强的致死性，为致病性大肠杆菌。药敏试验结果显示，分离菌株对头孢曲松、头孢噻呋、头孢噻肟和丁胺卡那等药物高度敏感，对四环素、强力霉素、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星等药物产生耐药性。关键词：大肠杆菌；血清型；药敏试验中图分类号：S855．1+2文献标志码：A文章编号：1002－1302（2013）01－0217－02

收稿日期：2012－06－07基金项目：河南省科技攻关项目（编号：072102130026）；河南省教育厅科学技术研究重点项目（编号：12B230012）。作者简介：李迎晓（1981—），女，河南洛阳人，硕士，讲师，从事病原微生物与免疫学研究。E－mail：liyingxiao81@163．com。通信作者：易本驰，副教授。Tel：（0376）6687605；E－mail：xy6226@foxmail．com。仔猪大肠杆菌病是由病原性大肠杆菌引起的养猪场常见的细菌性传染病，根据猪的发病年龄和临床表现不同可分为仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿病。不同地区流行的优势血清型有差异，即使在同一地区不同饲养场的大肠杆菌分离株的血清型也有差别［1－2］。因此，对当地流行的大肠杆菌进行血清型和耐药性试验等相关研究，对大肠杆菌病的有效防治具有重要的理论和实践意义。1材料与方法1．1试验材料1．1．1试验材料病料来源于河南省某猪场的病死仔猪肝脏、直肠棉拭等病料。1．1．2培养基、菌株和试剂营养肉汤、营养琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂、细菌生化微量鉴定管、药敏纸片和大肠杆菌（ATCC25922），购自杭州天和微生物试剂有限公司；大肠杆菌标准抗O血清，购自中国兽药监察所。1．1．3试验动物小白鼠，由信阳卫校实验动物中心提供。1．2试验方法1．2．1细菌的分离培养无菌采集病料划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板，在37℃培养24h后，挑取可疑菌落进行细菌形态染色特性鉴定，并挑取可疑菌落分别接种于三糖铁琼脂斜面、伊红美兰琼脂和营养肉汤，37℃条件下培养24h后，观察细菌的培养特性。1．2．2生化试验按文献报道方法对分离株进行10项生化指标的测定［3］。1．2．3药敏试验采用K－B法进行。取适量被检细菌的培养物，均匀涂布于营养琼脂表面，待菌液吸收后，贴上药敏纸片（购自杭州天和微生物试剂有限公司），37℃培养18h，观察结果，并用游标卡尺测量抑菌圈直径，根据抑菌圈直径大小判定细菌对药物的敏感性。1．2．4O血清型鉴定从麦康凯琼脂上挑取各株菌落1～2个，分别接种于营养琼脂斜面和营养肉汤中，37℃培养24h后，用2mL0．5%的石炭酸生理盐水洗下琼脂斜面上的培养物制成菌悬液，并与普通肉汤培养物同时置于121℃下高压2h，制成高压抗原；然后用O单因子血清进行玻板凝集试验，鉴定分离株的O血清型［4］。1．2．5致病力试验取经营养肉汤37℃培养16～18h后的4个纯化菌株培养液，分别腹腔接种体重20g左右的小白鼠，每组接种6只，每只注射0．3mL，同时用6只小白鼠接种无菌肉汤作对照。注射后观察小白鼠发病、死亡情况，并从死亡鼠的心、肝中回收接种菌。2结果与分析2．1细菌的分离培养结果经37℃培养24h，4个分离菌株在普通营养琼脂平板上形成白色圆形隆起、中等大小的菌落；在麦康凯琼脂上形成红色、圆形、隆起、光滑湿润、边缘整齐的中等大小菌落；三糖铁琼脂斜面培养基底层变黄，斜面变黄，同时产酸产气；在伊红美蓝琼脂上形成黑色、具有金属光泽的菌落；挑取单个菌落进行革兰氏染色后，在显微镜下可见革兰氏阴性、散在或成对排列、两端钝圆的短杆菌。以上均符合大肠杆菌的培养特性。2．2生化试验结果4个分离菌株能够发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇，产酸产气；发酵蔗糖，产酸不产气；吲哚试验和MR试验阳性；VP试验、柠檬酸盐利用试验和硫化氢试验阴性。2．3药敏试验结果采用K－B法进行，具体结果见表1。2．4O血清型鉴定结果将待检菌抗原分别与O8、O157、O117、O38单因子血清混合后浑浊，有白色颗粒出现；而待检菌抗原与石炭酸生理盐水混合无凝集现象出现，说明该分离菌血清型为O8、O157、O117、O38。2．5致病力试验结果试验组小鼠在注射抗原10h后开始出现死亡，并于72h—712—江苏农业科学2013年第41卷第1期表1药敏试验结果药物抑菌圈直径（mm）O8菌株O157菌株O117菌株O38菌株药敏试验结果庆大霉素5364耐药丁胺卡那霉素12101411中敏粘杆菌素17222018高敏四环素0000耐药强力霉素2578耐药诺氟沙星0134耐药环丙沙星4279耐药恩诺沙星6375耐药头孢曲松20282225高敏头孢噻呋19241826高敏头孢噻肟20261823高敏注：根据《纸片法抗菌药物敏感试验标准》［5］，抑菌圈直径大于15mm为高敏；直径10～15mm为中敏；直径10mm以下者为耐药。内全部死亡，将死亡小鼠肝、脾划线接种于麦康凯琼脂平板上，37℃条件下培养18h，有红色菌落生长，挑取单菌落染色镜检，其形态特性符合大肠杆菌的特征。对照组6只小鼠在隔离饲养1周内全部存活，说明该分离菌株为致病性大肠杆菌。3讨论大肠杆菌血清型众多，且具有较强的地域性分布，弄清各地致病性大肠杆菌的优势血清型以及敏感药物，对于该病的区域性防治具有重要的指导意义。大肠杆菌是一种在人和温血动物肠道内常见的细菌。大多数大肠杆菌菌株无害。然而一些菌株，如肠出血性大肠杆菌（EHEC）可引起严重的食源性疾病，出现包括腹部绞痛、腹泻、血性腹泻、发烧、呕吐以及溶血尿毒综合症等临床症状。其代表株O157∶H7大肠杆菌是与公共卫生有关的最重要的出血性大肠杆菌的血清类型。羊、猪、鸡、马、鹿、鸽、海鸥等动物均可能成为EHEC的携带者。因此弄清肠出血性大肠杆菌（EHEC）在动物中的携带情况及其传播模式，具有极其重要的公共卫生意义。大肠杆菌很容易产生耐药性，它可以通过菌毛将耐药质粒传递给其他大肠杆菌［6］，再加上临床上盲目用药致使大肠杆菌的耐药性日益严重，有些甚至出现多重耐药的现象，给猪大肠杆菌的及时治疗增添了一定的难度。最好的措施是建立长期的耐药性和病原血清型分布监测机制，在临床实践中根据药敏试验结果，选择有效抗生素，并注意交叉用药，用量适当，尽可能控制和减少耐药性的产生，提高抗生素对猪大肠杆菌病的防治效果；同时能够根据当地所流行的优势血清型进行相关的疫苗研究和防控工作。试验中的4株大肠杆菌分离自同一区域邻近的几家猪场，由于存在相同的用药习惯，因此表现出了类似的药敏试验结果参考文献：［1］房海．大肠埃希氏菌［M］．石家庄：河北科学出版社，1997：392－393．［2］刘书亮，王红宁，陶勇，等．四川规模化猪场仔猪黄、白痢E．coli的分离鉴定［J］．中国预防兽医学报，2001，23（5）：367－371．［3］曹澍泽，郭玉璞，董国雄，等．兽医微生物学及免疫学技术［M］．北京：北京农业大学出版社，1992：34－95．［4］赵坤，王三虎，刘诗柱，等．豫北地区猪源致病性大肠杆菌分离与鉴定［J］．河南科技学院学报：自然科学版，2007，35（3）：25－27．［5］张正，高屹，叶应妩．纸片法抗菌药物敏感试验标准［S］．北京：中国标准出版社，2000：4－15．［6］胡功政，张春辉，梁军，等．猪鸡致病菌β－内酰胺酶、超广谱β－内酰胺酶检测与药敏试验［J］．中国农业科学，2005，38（2）：399－404．—812—江苏农业科学2013年第41卷第1期

《西藏科技》2017年12期（总第297期）

西藏牦牛大肠杆菌的分离鉴定及部分生物学特性

贡嘎次仁次旺罗布

（西藏拉萨市曲水县聂当乡人民政府，西藏拉萨850000）

摘要：采集曲水县牦牛产区发生的疑似大肠杆菌自然病死牦牛的心、肝、脾、肾、淋巴结与血液分离鉴定出42株

大肠杆菌，通过形态观察、生化试验，血清学鉴定等试验，表明22株分离菌培养特性和生化特性基本一致，其中3

株具有很强致病力，是血清型不同的致病性大肠杆菌，分离鉴定的42株病原性牦牛大肠杆菌O抗原定型29株，共

覆盖了O142、O148、O158、O26、O43、O159、O39、O108、O91、O21、O14、O13、O36、O24、O18、O68和O25共17种血清型，其中血清型O26、O148、

O142、O158为优势血清型，共16株占定型株数的56％，对3株高致病性分离菌的药物敏感性试验显示，该分离菌对所

试的22种药物中，丙氟哌酸、氟哌酸、阿奇霉素、头孢氨苄、四环素、呋喃妥因头孢肤肟等7种药物高度敏感，头孢

孟多、丁胺卡那、新霉素、庆大霉素、头孢三嗪、链霉素等6中度敏感，对先美福仙、诺氟沙星等药物低度敏感，对氨

苄青霉素、青霉素、氨苄西林等药物具有耐药性，对其他药物的敏感性则不一致；通过动物致病实验，Gg5、Gg9和Gg15号菌株的毒力最强，致死率超过93%以上。结果提示，同一地方的发病牦牛群存在着多种血清型，耐药谱复

杂，且没有一种抗生素对所分离的菌株全部敏感。

关键词：牦牛大肠杆菌药敏实验

曲水县聂当乡、才纳乡、茶巴拉乡、达嘎乡、曲水镇

等是曲水县主要的牦牛产区，也是当地牧民们最主要

生活来源，近年致病性大肠杆菌引起牦牛的腹泻及败

血症病例呈上升趋势，成为影响本地区牦牛生产的主

要疾病之一，患病牦牛主要以下痢、腹泻、食欲不正、排

水样粪便、有的还带泡沫的血色粪便、消瘦死亡为特

征，以急性出血性肠炎为典型病理变化，其普遍性和严

重性以及对畜牧业发展造成的威胁越来越严重。现有

中国动物传染病学报２０１０，１８（２）：３４—４０　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｃａｓｅｓ　

・研究论文・　

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其　

生物学特性分析　

陈文静　，韩先干　，何　亮　一，胡青海　，于圣青　

（１．中国农业科学院上海兽医研究所，上海２００２４１；２．扬州大学，扬州２２５００９）　

摘要：鸭致病性大肠杆菌病是危害养鸭业的最为重要的细菌性传染病之一。本研究分离鉴定了６５株鸭致　病性大肠杆菌，并对其Ｏ血清型、耐药谱以及毒力相关基因进行了检测。结果表明：大肠杆菌Ｏ　，Ｏ，和Ｏ．为　主要流行血清型，各占分离株的７５％、ＩＩ％和５％。对１５种常规抗菌素或药物的药敏试验结果表明：１００％的　分离株对利福平和红霉素耐药；９４％以上的分离株对头孢噻吩等１Ｏ种抗菌素或药物耐受；７０％以上的分离株　对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素和头孢噻肟敏感。对１４种可能的大肠杆菌毒力相关基因的检测结果　表明：ｏｍｐＡ、ｐｆｓ和ｚ　ｓ三种基因高度保守，在分离菌株中的检出率为１００％；ｉｓｓ、　∞、柚、　ｍＣ、ｃｖａＣ和ｉｒｏＣ基　因的检出率达到７２％以上，为重要的鸭致病性大肠杆菌毒力相关基因。　关键词：鸭大肠杆菌；血清型；流行病学调查　中图分类号：￥８５２．６１２：￥８５２．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７４．６４２２（２０１０）０２－００３４－０７　

ＣＨＡＲＡＣＴＥＩＵＺＡＴＩｏＮ　ｏＦ　ＤＵＣＫ　ＰＡＴＨｏＧＥＮＩＣ　ＥＳＣ黝　．Ａ　ＣＤ￡Ｊ　

ＣＨＥＮ　Ｗｅｎ－ｒｉｎｇ　一，ＨＡＮ　Ｘｉａｎ—ｇａｎ　，ＨＥ　Ｌｉａｎｇ　一，ＨＵ　Ｑｉｎｇ．ｈａｉ　，ＹＵ　Ｓｈｅｎｇ．ｑｉｎｇ　（Ｊ．Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＡＡＳ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２４１，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｙａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ　２２５００９，Ｃｈｉｎａ）　

食品中大肠杆菌生物检测方法的研究进展

一、简述

大肠杆菌作为食品中常见的微生物污染指标，其快速、准确的检测方法一直是食品安全领域的研究热点。随着生物技术的不断发展，大肠杆菌的生物检测方法取得了显著进展。这些方法不仅提高了检测速度和灵敏度，而且有助于更深入地了解大肠杆菌的生物学特性和污染途径。本文将简述食品中大肠杆菌生物检测方法的研究进展，包括传统检测方法的优缺点、新型生物检测技术的开发与应用，以及未来发展方向。

传统的大肠杆菌检测方法，如多管发酵法和平板计数法，虽然操作简便、成本较低，但存在检测周期长、灵敏度低、易受干扰等缺点。研究者们一直致力于开发新型的生物检测方法，以克服传统方法的不足。基于分子生物学、免疫学、生物化学等原理的新型生物检测技术不断涌现，如脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点可变数衔接重复序列分析(MLVA)、气相色谱(GC)和高效液相色谱法(HPLC)、ATP生物发光技术、PCR检测技术等。

这些新型生物检测方法具有检测速度快、灵敏度高、特异性强等优点，能够在短时间内实现对大肠杆菌的准确检测。PFGE和MLVA等技术可以实现对大肠杆菌的分子分型，有助于追踪污染来源和传播途径；GC和HPLC等色谱技术则可以通过分析大肠杆菌的代谢产物来评估其污染程度；ATP生物发光技术和PCR检测技术则具有快速、简便的特点，适用于现场检测和大规模筛查。

新型生物检测方法在实际应用中仍面临一些挑战，如技术成本较高、操作复杂、对实验条件要求严格等。未来的研究应致力于优化这些技术的性能，提高实用性。加强食品中大肠杆菌的生态学研究和风险评估，对于制定有效的食品安全控制措施也具有重要意义。

食品中大肠杆菌生物检测方法的研究进展为食品安全领域的监测和防控提供了有力支持。随着新型生物检测技术的不断发展和完善，相信未来我们能够更加快速、准确地检测和控制大肠杆菌污染，保障人们的饮食安全。

1. 大肠杆菌在食品安全中的重要性