苜蓿总黄酮UV测定方法

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2.3标准曲线的绘制和样品的测定精密移取芦丁的标准溶液( 0. 25 mg/ mL0.1041mg/ml) 0、1. 0、1. 5、2. 0、2 . 5、3. 0、3 . 5ml分别置于10 mL容量瓶中,各加入5%亚硝酸钠溶液0. 4mL摇匀,放置6 min;再加入10%硝酸铝溶液各0. 4mL摇匀,放置6 min;加入1 mol/ L氢氧化钠溶液各4Ml,用95%乙醇稀释至刻度,摇匀,放置15 min后,取3号标准溶液在400~ 600 nm波长下用分光光度计测定其吸光度，找出其最大吸收波长，以最大吸收波长500 nm为测定波长分别测定标准溶液和各样品溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标,浓度( C, m/ v )为横坐标绘制曲线。回归方程为: C =17.688A- 0. 0091,R2=0. 9995，表明在0~100Lg/ mL吸收度和芦丁对照品的质量浓度呈良好的线性关系。
校园紫花苜蓿中总黄酮的提取及含量测定
摘要:通过超声波提取方法,对不同浓度乙醇、不同料液比及不同提取时间和提取次数进行单因素实验。采用分光光度法于500nm处测定其含量。并对提取和测定条件进行了积极的探讨。结论：超声波法提取紫花苜蓿中总黄酮的最佳提取工艺参数为：料液比1:20，乙醇浓度 60%，提取3次，30min/次。校园紫花苜蓿全草中含有总黄酮4.96%.
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总黄酮的测定方法黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物,种类繁多, 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷,部分为游离态或与鞣质结合存在。

黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物, 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。

近年来, 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。

因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。

一、方法（一）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。

2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。

（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。

2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。

（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。

摘要：以紫花苜蓿为原料，用60%乙醇溶液进行提取，提取液经乙酸乙酯萃取得到紫花苜蓿中 的黄酮色素类物质，紫外光谱鉴定后再用薄层层析进一步分离纯化。通过显色反应和紫外光谱 初步鉴定其为黄酮类化合物。通过与芒柄花素紫外波谱扫描特征的对比，初步判断为芒柄花素 的异黄酮类化合物。 关键词：紫花苜蓿；黄酮类物质；薄层层析；波谱扫描 中图分类号：R 284.2 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)09-0201-04
Separate and preliminary identify of the flavonoid in alfalfa
Miliban-huojiaaihemaiti1, Abudureheman-aila 2
(1.Scientific Rresearch Department, College of Chemistry and Chemical Engineering, Xinjiang Normal University, Urumqi 830054; 2.College of Food Science and Pharmacy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052)
Abstract: Based on Xinjiang alfalfa, the research used the ethanol with the content of 60% to extract and then used the ethyl acetate as the extracting agent of the extraction to get flavonoids pigmented materials, then the pigments were identified via UV and separated by TLC. The pigments of Xinjiang alfalfa belonged to flavonoid compounds. The flavonoids collection were preliminarily identificated as that of formononetin by comparing the characteristic of formononetin’s UV spectrum scanning. Key words: alfalfa; flavonoids; TLC; spectrum scanning

紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法紫外分光光度法是检测植物黄酮含量的最有效的方法，紫外分光光度的检测方法有很多，本文主要介绍了直接测定法、显色测定法、差示测定法、多波长法测定的方法，这些方法的应用条件不同，需要结合实际，综合考虑后选择适用的测定方法，这样才能提高测定的工作效率，保证测定结果的正确性。

通过对植物黄酮含量的测量，可以掌握黄酮类化合物含量的原理，还能对植物的特性进行科学的分析，具有一定的医药价值。

标签：紫外分光光度法植物黄酮方法【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）11-0709-02黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一類重要的天然有机化合物，很多植物中都含有一定量的黄酮。

黄酮种类很多，其主要类型有黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇等等，具有一定的保健和药用价值。

黄酮类化合物的存在形式既有与糖结合成糖苷的，也有游离态，多呈黄色，在紫外光下一般具有荧光，具有很强的抗氧化性。

紫外分光光度法是测定植物黄酮含量的主要方法，下面对具体的测定方法进行一些介绍，以供参考。

一直接测定法黄酮是指具有α或β苯基苯稠吡喃酮的一类化合物，这种化合物的分子中含有肉桂酰基，也还有苯甲酰基，是一种综合的共轭体系，在甲醇溶液中，大多数黄酮类化合物在甲醇中的紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成。

出现在300～400nm之间的吸收带称为带Ⅰ，出现在240～280nm之间的吸收带称为带Ⅱ。

带Ⅰ是由B环桂皮酰基系统的电子跃迁引起的吸收，而带Ⅱ是由A环苯甲酰基系统的电子跃迁引起的吸收，如图1所示。

峰带Ⅱ吸收紫外线的能力较强，也更适合直接测定法的检测。

在利用直接测定法对植物含黄酮量进行测定时，需要运用lambert- Beer 定律进行计算。

直接测定法主要利用了黄酮结构的特点，在测定的过程中不需要使用显色剂，在黄酮特征吸收峰处直接测定即可。

这种方法比较直接快速，而且操作简单，但是也具有一定的缺点，只适合单一成分的测定，在检测的过程中，若样品含有一定杂质，可能会影响检测结果的准确性。