苦玄参体外抗菌作用的实验研究

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基金项目 :国家中医药管理局项目 (04 - 05ZM01) 广西中医药 2008 年 2 月第 31 卷第 1 期
2 实验方法与结果 211 苦玄参根 、茎 、叶提取物的制 备 21111 水煎液 取苦玄参根 、茎 、 叶各 100g , 分别加 10 倍量蒸馏水 浸泡 20min 后 , 加热煮沸 1h , 过滤 , 药渣再加 8 倍量蒸馏水煮沸 1h , 将 两次滤液合并 ,浓缩至 1g/ ml ,放置 备用 。 21112 醇提液 取苦玄参根 、茎 、 叶各 100g , 分别加 10 倍量 60 %乙 醇浸泡 20min 后 , 回流提取 1h , 过 滤 , 药渣再加 8 倍量 60 %乙醇回流
提取 1h , 将两次滤液合并 , 浓缩至 1g/ ml ,放置备用 。 212 最低抑菌浓度 (MIC) 和最低 杀菌浓度 ( MBC) 测定 [2 ] 用无菌 MH 肉汤分别将苦玄参的根 、茎 、叶 的水煎液和醇提液作二倍递减系 列浓度稀释 , 分装于小试管内 , 每 管各 1ml 。取浓度为 106 CFU/ ml 的 各种细菌工作液 , 于上述系列浓度 药液内 , 每管加入细菌工作液 011ml 。各抗菌药物浓度各留 1 管 作为药物对照管不加细菌 。另分装
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菌种
金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌耐药株 绿脓杆菌 表皮葡萄球菌 肺炎克雷伯氏菌 白色念珠菌 甲型溶血性链球菌 乙型溶血性链球菌 丙型链球菌
优于水煎液 。
根 31. 25 31. 25 125 31. 25 125 500 500 31. 25 500
MIC 茎 31. 25 31. 25 125 31. 25 125 500 500 31. 25 500
叶 31. 25 31. 25 125 31. 25 125 500 500 31. 25 500
根 62. 5 62. 5 250 62. 5 250
— — 62. 5 —
MBC 茎 62. 5 62. 5 250 62. 5 250 —— —— 62. 5 ——
叶 62. 5 62. 5 250 62. 5 250
(2007 - 11 - 26 收稿/ 编辑 陈明伟)
苦玄参体外抗菌作用的实验研究
黄 燕 肖艳芬 甄汉深 陈 君 广西中医学院 530001 南宁市明秀东路 179 号
摘 要 目的 :研究苦玄参根 、茎 、叶体外抗菌作用 。方法 :采用连续
稀释法对苦玄参根 、茎 、叶的水煎液和醇提液进行 MIC、MBC 的实验研
药物的敏感度 , 即为该药物的最低 的各个环节 , 使细菌的生长受到抑 链球菌抑制作用较强 。
抑菌浓度 (MIC) 。分别取各有效抑 制 , 故可通过观察试管内细菌生长
菌浓度药液 011ml 移种至不含药 情况来判定药物有无抗菌作用 。测 参考文献 的营养琼脂平皿上 , 轻轻推开药 定抗菌药物在体外对病原微生物 [ 1] 广西壮族自治区卫生厅编 1 广西中
究 。结果 : 苦玄参根 、茎 、叶的水煎液和醇提液在体外对金黄色葡萄球菌
(ATCC209) 、金黄色葡萄球菌耐药株 、表皮葡萄球菌 (ATCC26029) 、乙型溶
血性链球菌 (ATCC32210) 等均有一定的抗菌作用 ; 醇提液的体外抗菌作
用优于水提液 。结论 :苦玄参根 、茎 、叶的醇提液具有明显的抗菌作用 。
色 念 珠 菌 、甲 型 溶 血 性 链 球 菌 (ATCC32205) 、乙型溶血性链球菌 (ATCC32210) 、丙型链球菌均购自 中国药品生物制品检定所 。实验菌 种经血平板分离培养 16～24h 后 , 挑取数个菌落置于生理盐水管中 , 校正浓度至 015 麦氏标准 , 再用 MH 肉汤 1 ∶100 稀释 , 使含菌量达 到 106 CFU/ ml 为工作浓度 。(注 :本 文凡甲 、乙型溶血性链球菌实验用 培养基均加入无菌兔血清) 11212 水解酪蛋白 (Mueller - Hin2 ton ,MH) 肉汤 (北京陆桥商检新技术 公司 ,批号 020117) ;营养肉汤 (国药 集团化学试剂有限公司 , 批号 ZK050621) ; 营养琼脂 (国药集团化 学试剂有限公司 ,批号20061109) 。 113 实验仪器设备 无菌净化工 作台 (苏净集团苏州安泰空气技术 有限公司) ; 电热恒温培养箱 (上海 医疗器械七厂) ; 压力蒸汽灭菌器 (上海医用核子仪器厂) ; 电热蒸馏 水器 (北京市医疗设备厂) ; 电热恒 温鼓风干燥箱 (上海跃进医疗器械 厂) 。
(2007 - 05 - 24 收稿/ 编辑 陈明伟)
醇提液对本实验菌株均有不同程
苦玄参的临床使用主要是用
度的抑制作用 ,且苦玄参根 、茎 、叶 于治疗上呼吸道炎 、扁桃体炎 、支
的 60 %乙醇提取物的抑制作用均 气管炎 、咽喉炎及肺炎等 。本实验
广西中医药 2008 年 2 月第 31 卷第 1 期
关键词 苦玄参 ;抗菌作用 ;体外实验
中图分类号 : R28515
文献标识码 :A
文章编号 :1003 - 0719( 2008) 01 - 0046 - 02
广西道地药材苦玄参 ( Picria fel - tarrae Lour1) 为玄参科苦玄参 属植物 , 又名苦草 、蛇总管 、鱼腥 草 、苦胆草 。主要分布于广西 、广 东 、贵州及云南等地 , 印度及菲律 宾也有分布 [1 ]。苦玄参具有抑菌抗 炎之功效 。由于苦玄参使用的药用 部位为全草 , 其不同药用部位的抗 菌作用研究尚未见报道 。因此本文 对苦玄参的根 、茎 、叶的抑菌作用 进行研究 , 为今后合理开发和利用 苦玄参提供依据 ,现报道如下 。
1 实验材料 111 药材 苦玄参采于广西龙 州 , 经广西中医学院药用植物教研 室刘寿养副教授鉴定为玄参科苦 玄参属植物苦玄参 ( Picria fel - tar2 rae Lour) ,标本存于广西中医学院药 用植物教研室 。 112 菌种及培养基 11211 金黄色葡萄球菌(ATCC209) 、 金黄色葡萄球菌耐药株 、绿脓杆菌 (ATCC10104) 、 表 皮 葡 萄 球 菌 (ATCC26029) 、肺炎克雷伯氏菌 、白
表 1 苦玄参根 、茎 、叶水煎液抑菌 、杀菌结果 ( mg/ ml)
菌种
MIC
根
茎
叶
金黄色葡萄球菌
125
125 62. 5
金黄色葡萄球菌耐药株 125
125 62. 5
绿脓杆菌
250
250
125
表皮葡萄球菌
125
125 62. 5
肺炎克雷伯氏菌
250
Fra Baidu bibliotek250
125
白色念珠菌
500
500
500
甲型溶血性链球菌
培养箱内培养 18h 检查结果 , 并与 菌药物的筛选具有重要意义 。由于 本实验菌株均有不同程度的抑制
药物对照管比较 。以完全无细菌生 药物含有抗菌物质 , 能干扰和抑制 作用 , 其中对金黄色葡萄球菌 、金
长的最低药物浓度作为细菌对该 细菌代谢 (如蛋白质代谢 、糖代谢) 黄色葡萄球菌耐药株 、乙型溶血性
[J ] . 中国中医药科技 , 2001 , 8(5) : 325 - 326. [ 6] 邱贵兴 . 骨关节炎流行病学和病因 学新进展 [J ] . 继续医学教育 , 2005 , 19(7) :68. [ 7] 吕厚山 . 髋 、膝关节性关节炎的研究 现状和进展 [J ] . 实用老年医学 , 2001 ,15(5) :229. [ 8] 钟汉馨 , 黄涛 . 不同运动方式引起关 节软骨改变的病理研究 [J ] . 现代康 复 ,2001 ,5(1) :36. [ 9] 时光达 , 宋一同 , 陈宝兴 . 实验骨伤 科学 [ M] . 2 版 . 北京 :人民卫生出版 社 ,2001 :254. [ 10] Evans EB , Eggers GWN , Butler J K, et al. Experimental immobilization and re2 mobilization of rat knee joints[J ] . J Bone Joint Surg ,1960 ,42(A) :737. [ 11] Panasiuk AF , Laroshuk GV , Mitrovich D. Effect of free radicals on proliferation and metabolism of chondrocytes and on sensitivity of acellular monolayer to proteases[J ] . VoprMed Khim ,1995 ,41 : 19 - 22. [ 12] Schiller J , Arnhold J , Schwinn J , et al. Reactivity of cartilage and seleted carbohy rates with hydroxyl radicals :an NMR study to detect degradation prod2 ucts[J ] . Free Radic Res , 1998 , 28 : 215 - 218. [ 13] 李放 , 白玉龙 , 李玉霞 , 等 . 膝关节 骨关节炎的肌肉功能与功能性行为 能力 [J ] . 中国康复医学杂志 ,1996 , 11(3) :148 - 152.
液 , 置 35 ℃培养过夜 , 观察有无细 菌生长 。按一般规定 , 平皿培养基 中 , 计数少于 5 个菌落者作为该药 物的最低杀菌浓度 (MBC) 。结果见
有无抑制作用的方法 , 称为药物敏 感实验 。以抑制细菌生长为评定结 果时 , 常以最低抑菌浓度 (MIC) 表 示 ; 以杀灭细菌为标准时 , 使活菌
药材标准 [ S] 1 南宁 : 广西科学技术 出版社 ,1992 :2251 [ 2] 徐叔云 , 卞如濂 , 陈修 1 药理实验方 法学[M]1 北京:人民卫生出版社 ,1991.
表 1 ,表 2。
总数减少 99 %或 9919 %以上 ,称为
苦玄参根 、茎 、叶的水煎液和 最低杀菌浓度 (MBC) 。
— — 62. 5 —
选择了对咽喉部常见致病菌如金
一小试管 ,加肉汤培养基 1ml ,再加
黄色葡萄球菌 、乙型溶血性链球菌
入 011ml 细菌工作液作为细菌对 3 讨 论
等菌株 。抑菌实验结果表明 , 苦玄
照管 。将试验管和对照管置于 35 ℃
药物抗菌效力的测定对于抗 参根 、茎 、叶的水煎液和醇提液对
500
500
500
乙型溶血性链球菌
125 62. 5 31. 5
丙型链球菌
500
500
500
MBC
根
茎
叶
250
250
125
250
250
125
500
500
250
250
250
125
500
500
250
— ——
—
— ——
—
250
125 62. 5
— ——
—
表 2 苦玄参根 、茎 、叶醇提液抑菌 、杀菌结果 ( mg/ ml)