宫颈鳞状细胞癌及癌前病变中FHIT、PCNA的表达及意义

２０１１年１１月　第２３卷下半月第２２期　中国民康医学　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｅｏｐｌｅ　ｓ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｎｏｖ．２０１１　Ｖｏ１．２３　ＳＨＭ　Ｎｏ．２２　【论　著】　宫颈鳞状细胞癌及癌前病变中ＦＨＩＴ、　ＰＣＮＡ的表达及意义　王　宝　，高志安　（１．辽宁省锦州市妇婴医院病理科，辽宁锦州１２１０００；２．辽宁医学院附属第一医院病理科）　【摘要】　目的：探讨ＦＨＩＴ、ＰＣＮＡ在宫颈鳞状细胞癌及癌前病变中的表达规律，研究其在宫颈癌变中的作用和意义。方法：采用免疫组　织化学（Ｓ—Ｐ法）检测ＦＨＩＴ、ＰＣＮＡ在ｌ８例正常宫颈组织、５２例ＣＩＮ和６９例宫颈癌中的表达。结果：ＦＨ１Ｔ在正常宫颈组织、ＣＩＮ　Ｉ、ＣＩＮ　ＩＩ、　ＣＩＮ　１１１和宫颈鳞癌组织中阴性率分别为０％、９．１％、２９．４％、４１．７％、６６．７％，正常组与宫颈癌组之间、ＣＩＮ组与宫颈癌组之间、ＣＩＮ　Ｉ、Ⅱ组与　ＣＩＮⅢ组之间比较，差异均有显著性（Ｐ＜０．０５）；随着细胞分化的降低，ＦＨＩＴ阴性率上升。ＰＣＮＡ在宫颈癌中的阳性率为８４．１％，高于ＧＩＮ和　正常组（Ｐ＜０．０５），ＣＩＮ和宫颈癌两组ＦＨＩＴ阴性者的ＰＣＮＡ阳性率明显高于ＦＨＩＴ正常表达者（Ｐ＜０．叭），ＦＨＩＴ与ＰＣＮＡ呈负相关关系。结　论：ＦＨＩＴ、ＰＣＮＡ蛋白异常表达与官颈癌的发生密切相关，ＦＨＩＴ缺失可作为判断ＣＩＮ有可能发展为浸润癌的有用指标。ＣＩＮ和宫颈鳞癌中的　ＦＨＩＴ缺失常与ＰＣＮＡ过度表达同时存在，两者存在负相关关系。　【关键词】　ＦＨＩＴ蛋白；ＰＣＮＡ蛋白；宫颈上皮内瘤变；宫颈癌　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—０３６９．２０１１．２２．００２　中图分类号：Ｒ７３７．３３　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—０３６９（２０１１）２２—２７４７—０３　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ＦＨＩＴ　ａｎｄ　ＰＣＮＡ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｃｅｒｖｉｃａｌ　Ｓｑｕａｍｏｕｓ　Ｃｅｌｌ　Ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　Ｃｅｒｖｉｃａｌ　Ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　Ｎｅｏｐｌａｓｉａ　ＷＡＮＧ　Ｂａｏ　．ＧＡＯ　Ｚｈｉ—ａｎ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　Ｗｏｍｅｎ　ａｎｄ　Ｃｈｉｌｄｒｅｎ￣Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｊｉｎｚｈｏｕ，Ｊｉｎｚｈｏｕ　１２１００１，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　ＯＭｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＦＨＩＴ　ａｎｄ　ＰＣＮＡ　ｉｎ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　Ｃｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＳＣＣ）ａｎｄ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｎｅｏ—　ｐｌａｓｉａ　ｆ　ＣＩＮ）ａｎｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ａｎｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＦＨＩＴ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ＰＣＮＡ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｉｍ－　ｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｓ—Ｐ）ｉｎ　１８　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，５２　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ＣＩＮ　ａｎｄ　６９　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ＳＣＣ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｒａｔｅｓ　ｆｏｒ　ｌｏｓｓ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＦＨＩＴ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ　ｏｆｎｏｒｍａｌ　ｃｅｒｖｉｃｅｓ，ＣＩＮ　Ｉ，ＣＩＮ　ＩＩ，ＣＩＮ　ｌａｎｄ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ＳＣＣ　ｗｅｒｅＯ％，９．１％，２９．４％，　４１．７％，６６．７％．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ（ＮＥＣ）ａｎｄ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ＳＣＣ，ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＣＩＮ　ａｎｄ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ＳＣＣ，　ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＣＩＮ　Ｉ、ＩＩ　ａｎｄ　ＣＩＮⅢｈａｖｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ａｌｏｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＦＨＩＴ　ｒａｉｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＣＮＡ　ｉｎ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ＳＣＣ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　８４．１％，ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ＣＩＮ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＰＣＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｐｌｅｔｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＦＨＩＴ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ＦＨＩＴ　ｎｏｒｍａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．Ｏ１）．Ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｒ－　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＦＨＩＴ　Ａｎｄ　ＰＣＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｏｎｄｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ＦＨＩＴ—ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＰＣＮＡ　ｏｖｅｒ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｒｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｈｅ　ＦＨＩＴ—ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ　ｍａｙ　ｂｅ　ａ　ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｕｓｅｆｕｌ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ＣＩＮ　ｍｏｒｅ　ｌｉｋｅｌｙ　ｔｏ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｔｏ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｄｉｓｅａｓｅ；Ｄｅｐｌｅｔｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＦＨＩＴ　ｉｓ　ｆｒｅｇｕｅｎｔｌｙ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＰＣＮＡ　ｏｖｅｒ—ｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＣＩＮ　ａｎｄ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ＳＣＣ　ｓｕｂｊｅｃｔｓ．Ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ａ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＦＨＩＴ　Ａｎｄ　ＰＣＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】ＦＨＩＴ　ｇｅｎｅ；ＰＣＮＡ；Ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｎｅｏｐｌａｓｉａ；Ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　宫颈鳞状细胞癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤，其发　病机制目前并不十分清楚。脆性组氨酸三连体（￣ａ６１ｅ　ｈｉｓ—　ｔｉｎｄｉｎｅ　ｔｒｉａｄ，ＦＨＩＴ）基因是近年在染色体３ｐ１４．２区域发现的　一个候选抑癌基因，在调节细胞周期和细胞凋亡方面具有重　要作用。增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎｔｉｇｅｎ，　ＰＣＮＡ）是与细胞增殖周期相关的肿瘤标记物，其与肿瘤的生　物学行为及恶性程度密切相关　。本实验采用免疫组织化　学方法检测ＦＨＩＴ、ＰＣＮＡ在正常宫颈鳞状上皮、宫颈ＣＩＮ和　作者简介：王宝（１９７７一），男，硕士学位，主治医师，主要研究领域　为妇产及乳腺病理学。　宫颈鳞状细胞癌中的表达情况，探讨两者在宫颈癌发生、发　展中的作用。　１资料与方法　１．１临床资料研究标本取自辽宁医学院附属第一医院病　理科、锦州市妇婴医院病理科２００５年１月一２０１０年１月间　门诊活检或住院手术病例ｌｌ５例，包括１８例正常宫颈组织、　５２例ＣＩＮ、６９例宫颈鳞状细胞癌。ＣＩＮ组５２例均为宫颈锥　切或子宫全切标本，宫颈癌组６９例为宫颈癌根治术后的标　本，另取因子宫良性病变而行子宫全切的正常宫颈标本１８　例为对照，所有病例术前均未经化疗和放疗。所有ＨＥ切片　均经病理专家复核。　

２７４７　２０１１年１１月　第２３卷下半月第２２期　中国民康医学　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｅｏｐｌｅ　Ｓ　Ｈｅａｌｔｈ　ＮＯＶ．２０１１　Ｖ０１．２３　ＳＨＭ　Ｎｏ．２２　１．２免疫组化ＦＨＩＴ、ＰＣＮＡ蛋白采用免疫组化ｓＰ法检　测，兔抗人ＦＨＩＴ多克隆抗体、鼠抗人ＰＣＮＡ多克隆抗体均购　自北京中山生物工程公司。染色步骤参照试剂盒说明书进　行。抗原修复作微波修复，ＰＢＳ代替一抗作为阴性对照，以　已知ＦＨＩＴ、ＰＣＮＡ表达阳性的正常乳腺组织为阳性对照。　１．３结果判定ＦＨＩＴ基因表达产物定位于细胞核和细胞　浆，主要位于细胞浆。采用Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ半定量法　对细胞染　色强度及阳性细胞百分率进行评分，完全没有着色记作０　分；染色强度弱着色为１分，中等着色为２分，强着色为３　分；阳性细胞百分率＜１０％为１分，１０％～５０％为２分，＞　５０％为３分。两者分值相乘得各例综合评分，≤３分判为　ＦＨＩＴ低表达或缺失，＞３分判为表达阳性。ＰＣＮＡ表达以细　胞核出现棕黄色颗粒为阳性，用３个参数的半定量法对染色　强度及阳性细胞百分率进行评分，评分＜３分为阴性，≥３分　为阳性　。　１．４统计学分析采用ＳＰＳＳ　１２．０统计软件处理数据。组　间率和两组间比较采用ｘ　检验，组间的相关性采用直线相　关分析。　２结果　２．１　ＦＨＩＴ在正常宫颈组织、Ｃ１Ｎ、宫颈癌组织中的表达　ｌ８　例正常宫颈鳞状上皮ＦＨＩＴ均呈现阳性表达（１００％）；１１例　ＣＩＮ　Ｉ中，Ｉ例出现明显的阴性表达（９．１％）；１７例ＣＩＮ　ＩＩ　中，５例出现阴性表达（２９．４％）；２４例ＣＩＮⅢ中，ｌ０例出现　阴性表达（４１．７％）；６９例浸润性宫颈癌中，有４６例ＦＨＩＴ表　达阴性（６６．７％）。随着宫颈病变程度的增加，ＦＨＩＴ表达的　阴性率逐渐升高。宫颈癌组织中ＦＨＩＴ表达阴性率与正常宫　颈组、ＣＩＮ组比较，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；ＣＩＮ　Ｉ、　ＣＩＮⅡ、ＣＩＮⅢ之间比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５），在高、中、　低分化的浸润性鳞状细胞癌中，ＦＨＩＴ蛋白表达阴性率分别　为４７．４％（９／１９）、６４．３％（１８／２８）、８６．４％（１９／２２）。低分化　与高分化比较、低分化与中分化比较，差异有统计学意义（Ｐ　＜Ｏ．０５）（见表１）。　表１　ＦＨＩＴ在不同宫颈组织中的表达　

注：与正常宫颈组比较，’Ｐ＜０．０５；与ＣＩＮ组比较，　Ｐ＜０．０５；　与ＣＩＮ　Ｉ、ｆｆ组比较，　Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｇｌ、Ｇ２组比较，　Ｐ＜０．０１　２．２　ＰＣＮＡ在正常宫颈组织、Ｃ１Ｎ、宫颈癌组织中的表达　２７４８　ＰＣＮＡ在１８例正常宫颈鳞状上皮中仅见个别基底旁细胞核　散在着色，定位阴性表达，在ＣＩＮ组中的阳性表达率为　５１．９％（２７／５２），在宫颈鳞状细胞癌组的阳性表达率为　８４．１％（５８／６９），三组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。　２．３　ＦＨＩＴ表达与ＰＣＮＡ表达的关系见表２：　表２　ＣＩＮ和宫颈癌组ＦＨＩＴ与ＰＣＮＡ表达之间的关系　

注：与同组ＦＨ１Ｔ正常比较，　Ｐ＜０．０５　２．４　ＦＨＩＴ与ＰＣＮＡ蛋白表达的相关性对ＦＨＩＴ与ＰＣＮＡ　的Ａ值进行相关性分析，结果显示，ＣＩＮ组和宫颈癌组中，　ＦＨＩＴ与ＰＣＮＡ两者均有相关性（ｒ＝一０．６２２，Ｐ＝０．００１；ｒ＝　一０．５８３，Ｐ＝０．００）。　３讨论　３．１　ＦＨＩＴ与ＣＩＮ及宫颈癌的关系ＦＨＩＴ是Ｏｈｔａ等　于　１９９６年发现的一种抑癌基因，大量研究发现。ＦＨＩＴ基因的　异常改变见于多种肿瘤及肿瘤细胞系，如肺癌、头颈部癌、食　管癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌等。　最近研究表明，官颈癌中常见ＦＨＩＴ基因异常，包括杂合　性丢失、纯合性缺失和异常转录。Ｂｕｔｌｅｒ等　报道，从低级别　ＣＩＮ、高级别ＣＩＮ到官颈癌，ＦＨＩＴ的杂合性缺失率呈现逐渐　增高的趋势。本研究结果显示，１８例正常宫颈组织的鳞状上　皮和腺上皮均有ＦＨＩＴ的强表达，无缺失发生；ＣＩＮ组的缺失　率为３０．８％（１６／５２），随着病变级别的升高而增加，本研究　的官颈ＣＩＮ　Ｉ、Ⅱ、Ⅲ组中均有ＦＨＩＴ的阴性表达，说明ＦＨＩＴ　缺失在癌前病变的早期阶段就已经发生。可以推测，ＦＨＩＴ　失活是肿瘤发生的始动事件。目前，由于缺乏能够反映ＣＩＮ　发展为宫颈癌可能性的形态学标准和分子标记物，对ＣＩＮ，　尤其是高级别ＣＩＮ的处理，一直是临床棘手的问题，而检测　ＣＩＮ中ＦＨＩＴ蛋白的丢失可作为一个判定其有可能发展为浸　润癌的有用指标。本研究中宫颈癌组的ＦＨＩＴ阴性率高达　６６．７％，且随着细胞分化程度的降低明显升高，说明ＦＨＩＴ异　常与宫颈癌的发生有密切关系，而且还与癌细胞的分化程度　有关。　３．２　ＦＨＩＴ表达与ＰＣＮＡ的关系及两者在宫颈癌中的作用　细胞的增殖失控是恶性肿瘤的重要特征之一，ＰＣＮＡ是真　核细胞ＤＮＡ合成所必需的一种３６ｋＤａ核蛋白，ＰＣＮＡ的表达　和合成与细胞的增殖周期相关。新近研究证明，它是ＤＮＡ　（下转第２８０８页）