微生物不确定度评定-lu-课件PPT(精)

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2、气体灭菌：利用化学消毒剂形成的气体来杀灭微生物。 臭氧杀菌消毒 广泛存在于自然界中，雷雨过后的空气有一种清新的感觉， 是因为空中放电产生臭氧，消灭了空气中的微生物，净化了空 气。 臭氧具有强烈的杀菌消毒作用。其杀菌消毒原理是：臭氧 在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧和单个氧 分子，后者具有很强的活性，对细菌具有很强的氧化作用，臭 氧氧化分解了细菌内氧化葡萄糖所必需的酶，从而破坏其细胞 膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分 子，不存在任何有毒残留物，故称为无污染消毒剂。不但对各 种细菌（包括肝炎病毒、大肠杆菌、绿脓杆菌及杂菌等）有极 强的杀灭能力，且对杀死霉菌也很有效。
灭菌和消毒的比较： 共性：杀灭微生物以控制其污染和防止传染。 区别： 1、杀灭微生物完全性的差异。灭菌要求完全杀灭 微生物，灭菌后的药品不应含有活的微生物。而消毒不完 全杀灭微生物，只能杀灭一部分微生物即病原微生物。这 是相对的。因为强效消毒剂在适宜条件下可能达到灭菌效 果；不适宜条件下灭菌，有不完全杀灭微生物的可能。 2、方法上的差异：灭菌方法具有多样性，消毒常借化学 物质。 3、效果检查的差异：灭菌效果用无菌检查法检测，而消 毒效果以消毒剂的效价评定。

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2、液体石蜡保存法：
本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理生化水 平，并可防止水分蒸发，从而延长菌种的保藏期。
（1）方法： 将菌种接种于斜面或穿刺于0.3- 0.5 %琼脂半固体高层培养基 中，培养好备用。 取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口 包上纸， 121℃高压灭菌 30min ，取出置 37℃温箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器内除去液体石蜡中的水分 将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高 出培养基最上端 1 ㎝为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。 适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保 藏效果较差。 （3）特点： 本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法 主要使菌种与空气隔绝。

• 培养基46±1ºC水浴 保温。
• 倾注前先加TTC于营 养琼脂中,加入量比 例为1ml/1L。
• 小心旋转培养皿勿将 培养基溢出。
菌落总数测定
• 琼脂凝固后，翻转 平板，置36 ±1ºC 温箱内培养48 ±2h.
• 若有太多水珠在皿盖 上，应先倒置打开， 以免湿度大使菌成片 状生长。
菌落总数测定ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h -----不产气------大肠菌群阴性------报 告
大肠菌群测定
• 革兰氏染色------呈现阴性 • 乳糖发酵管36 ±1ºC下培养24 ±2h ------
产气------大肠菌群阳性------报告
沙门氏菌检验
• 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性，最适生 长温度37 ºC，对营养要求不高,能在普通 培养基上生长.
• 同一来源的链状菌落 作为一个菌落。
霉菌、酵母菌计数
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择3个适宜稀释度,各取1ml分别加入灭 菌培养基内------每皿内加入适量培养基----- 25~28ºC下培养5d ------菌落计数-----报告
菌落总数PK霉菌、酵母菌
• 营养琼脂
• 报告表示：100mg（ml）检样内大肠菌 群最可能数（MPN)
大肠菌群测定
• 检样------稀释------乳糖胆盐发酵管9支 36 ±1ºC下培养24 ±2h ------不产气-----大肠菌群阴性
产气------分离培养
大肠菌群测定
• 以无菌操作将检样25g（ml）加入225ml 灭菌生理盐水中，充分振摇或使用匀浆 机制成1：10的均匀稀释液。吸取1ml该 稀释液沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理 盐水中，混合均匀，制成1：100的稀释 液。

烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
微生物的鉴定（identification）:
借助于现有的微生物分类系统，通过特 征测定，确定未知的、或新发现的、或未 明确分类地位的微生物所应归属分类群的 过程。
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该法常用于肠道菌、噬菌体和病毒的分类鉴定。 利用此法，已将伤寒杆菌、肺炎双球菌等菌分成数 十种菌型。
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4．生态学特征
生态学特征主要包括它与其它生物之间的关系（是 寄生还是共生？寄主范围以及致病的情况）、在自然界 的分布情况（pH情况、水分程度等）、渗透压情况（是 否耐高渗、是否有嗜盐性等）。
在具体鉴定时，可参看中国科学院微生物研究所 细菌分类组编著的《一般细菌常用鉴定方法》一书。
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3．要有合适的鉴定方法
微生物种类繁多，特征各异，性状有主次之分。 因此，在鉴定某种微生物时，要选用合适的鉴定方法， 确定主要的测试项目。

(4) 一般情况下，绝对误差的有效数位只取一位； 相对误差EN 最多取两位； 误差进位的原则是只进不舍。
(5)在任何数值中，数值的最后一位应与误差位对齐。
例如： 1.35 0.01 cm 正确，
(1.351 0.01)cm 错误。
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第二节：误差理论与数据处理
2、仪器的估计读数: （1）和仪器的不确定度对齐
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第二节：误差理论与数据处理
2、关于不确定度的一些基本概念和分类
不确定度是表征测量结果具有分散性的一个参数， 它是被测量的真值在某一量值范围内的一个评定。
所谓“标准不确定度”是指以“标准偏差”表示的
测量不确定度估计值，简称不确定度，记为△。
标准不确定度一般可分为以下三类：
（1）A类评定不确定度△A：统计方法得到的 （2）B类评定不确定度△B：非统计方法得到的
|△d|(m) 0.007 0.002 0.012 0.015 0.009 0.004 0.002 0.007 0.000 0.018
d d1 d2 ...... d10 1.719(m) 10
d d d
A
k
2
di d
i 1
k (k 1)
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第二节：误差理论与数据处理
D1 D2
f (a x)2 (b y )2
f
x
y
ln B ln D1 ln D2 ln(D1 D2 )
ln B 1 1
D2
D1 D1 D1 D2 D1(D1 D2 )
ln B 1 1
D1
D2 D2 D1 D2 D2 (D1 D2 )
EB
[ D2D1 ]2 [ D1D2 .精]品2 课件.

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pH
低温保藏
腌制
微生物 食品
aw
干燥
高温保藏
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消毒 --杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达 到无害化的FF。
灭菌 --用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一 切微生物的方法。
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利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方
细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
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大肠杆菌
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金黄色葡萄球菌
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2、酵母
酵母菌（yeast）是一通俗名称，没有确切定义。 一般认为酵母菌具有以下五个特点： ➢ 个体一般以单细胞状态存在 ➢ 多数出芽繁殖，也有的裂殖 ➢ 能发酵糖类产能 ➢ 细胞壁常含有甘露聚糖 ➢ 喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长酸度较
法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活， 从而起灭菌作用。低温通常起抑菌作用。 嗜冷微生物适合于－ 10℃生活的细菌，最适生长温度在20℃左右。 嗜温微生物生 长温度在15～45℃之间，最适生长温度在37℃左右的细菌。
嗜热微生物生长温度在30～75℃之间，最适生长温度在55℃， 在100℃以上温度生长，称为嗜高热微生物。
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2. 快速酶触反应及代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中 可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选 用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细 菌快速诊断。如美国3M Petfifilm TM微生物测试片 可分别快速测定细菌总数、霉菌、酵母菌、大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。

0.1V 1V
±(0.5%读数+2个字） ±(0.8%读数+2个字）
交流 电压 VAC
200V 600V
0.1V ±(1.2%读数+10个字）
1V
（50/60Hz）
直流 2000uA 电流 …… ADC 10A
1uA …… 10mA
±(1.0%读数+10个字） ……
±(2.0%读数+10个字）
…… ……
B.测量条件达不到仪器规定要求时： 根据经验确定估读误差， Δ估可能比Δ仪大的多！
3 合成不确定度
A类不确定度分量
B类不确定度分量
对于任何一次直接测量量，都要必须算出 和 ，按“方和根”的方式合成不确定度。
(1)常用的不确定度合成公式为
(2)对任何一个直接测量原则上都必须先算出它的统 计不确定度 和两个非统计不确定度分量 后， 按“方和根”的方式合成为合成不确定度 (3)如果统计不确定度 小于 或 的1/3，测 量就可以简化为单次测量，合成不确定度的计算公 式也就简化为
1、A类不确定度 ：
可以通过统计方法来计算(如偶然误差)
通常最主要的A类不确定度分量是平均值的标 准偏差，本教材只考虑这一个分量，即
2、B类不确定度 ：
不能用统计方法只能用其他方法估算 (如仪器误差、估读误差)
通常仪器误差 和估读误差 是引起B类
不确定度的主要因素，因此本教材只考虑仪器误
差不确定度
……
……
电压 （0.8% 408 2个字）V
（3.264 2）V 5.3V
查移轴显微镜的说明 书得到仪器误差也是
查螺旋测微仪的说明 书得到仪器误差就是
D.未注明仪器误差也找不到说明书或相关标准时

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2）保持供检样品的原污染状态
对供检样品提供原始污染状况的微生 物检查数据是限度检查的基本任务。
药品的第二次污染及繁殖或死亡引起 的状态改变均不能反应药品的微生物真实 质量。
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3）按规定抽样检验
由于药品染菌的随机性和不均匀性， 欲从小量抽样检验反映整批药品的染菌状 况是不可能的。
由于微生物限度检查是破坏性检查， 检验一瓶破坏一瓶，增加抽验量及检验数 量对提高检出率无疑是有利的，但抽量过 多，生产、经营单位难以承受。
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(2)高压蒸汽灭菌物品：为最可靠、最 广泛使用的灭菌方法之一。凡是耐高 温和潮湿的物品如培养基、无菌衣、 金属、玻璃器材、陶瓷制品、传染性 污物等可用本法灭菌。将需要灭菌的 物品于0.11MPa, 121℃灭菌15分钟后 方可使用。
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三、 培养基的处置
（1）培养基的配制 一般采用商品脱水培养基，按照使用
①平皿法 系列稀释供试液，分别加入灭菌 平皿中，然后倾注琼脂。
②涂布法 将系列稀释的供试液分别涂布于 已事先备妥的琼脂平板上
③薄膜过滤法 将供试液用薄膜过滤，取出 滤膜贴于琼脂平板或其它培养基中。
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（2）控制菌检查：测定单位重量（体积或面 积）药品中的粪便污染指示菌和某些特定 菌，如大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄 球菌、铜绿假单胞菌、梭菌、白色念珠菌、 螨等在规定量的样品中不得检出或不超过 某限度。
因此药典规定了检验量和数量。
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4）适宜的供试液制备方法
正确制备供试液是保证检查结果可靠 的前提条件，供试液制备的基本要求是， 供试品必须均匀分散于供试液中，被检菌 应受到必要的保护。
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ppt课件
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细菌自动鉴定系统
API细菌数值鉴定系统 “Enterotube”系统 “Biolog”全自动和手动 细菌鉴定系统
ppt课件 API细菌数值鉴定系统流程
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微生物分类鉴定中的现代方法
核酸分析鉴定微生物的遗传型
细胞化学成分用作鉴定指标 （略）
数值分类法（略）
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核酸分析鉴定微生物的遗传型
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权威菌种鉴定手册
细菌：伯杰氏鉴定细菌学手册（第八版 1974、第九版1994）、伯杰氏系统细菌 学手册（第一版）1984~1989，2000年 分五卷出版。
放线菌：中国科学院微生物研究所编著的放 线菌目分科、分属检索表
真菌：Smith、 Alexopoulos (阿历克索鲍罗 斯 ） 、 Ainsworth（安斯沃思）的分类系统
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以往各种界级分类不同的新系统，称为三域学说，
"域"是一个比界更高的界级分类单元，过去曾称原界。 三个域指的是细菌域(以前称"真细菌域")、古生菌域 (以前称古细菌域)和真核生物域。
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rRNA寡核苷酸数目
定义
一种通过分析原核或真核细胞种最稳定的rRNA寡 核苷酸序列同源性程度，以确定不同生物之间的 亲缘关系和进化谱系的方法。
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rRNA寡核苷酸数目
优势
它们普遍存在于一切细胞内，不论是原核生物 和真核生物，因此可比较他们在进化中的相互 关系
他们的生理功能既重要又恒定 在细胞中的含量较高 轻易提取 编码rRNA的基因十分稳定 rRNA的某些核苷酸序列非常保守 相对分子质量适中
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• 1.1.2、不确定度在技术监督 中意义
1.1.2不确定度在技术监督中意义
• 不确定度与计量科学技术密切相关。不确 定度用以表明基准．标准、检定测试、校 准的水平，作为量值溯源的依据，并用来 表明测量设备的质量，测量过程控制所用 的计量保证，就是要保证经过验证的测量 不确定度要尽可能小，以满足计量校准或 计量检测的要求。
主要内容
1.概述 2.基本术语 3.不确定度评定过程 4.
• [测量]不确定度（uncertainty[of measurement]） 用以表征合理赋予被测量之值的分 散性，它是测量结果含有的一个参 数。
2、基本术语
• 标准不确定度（standard uncertainty）
是假设存在的相应方差的近似，像方
差那样去处理u2j，并像标准差那样去 处理uj。必要时，用相似方法处理协方
差。
1.2.2不确定度发展进程
4)用对方差合成的通常方法，可 以得到表征合成不确定度的数值， 应以“标准差”形式表示合成不 确定度及其分量。
1.2.2不确定度发展进程
5)对特殊用途，若须将合成不确定 度乘以一个因子以获得总不确定度 时，必须说明此因子的数值。
• 1978年，美国标准局局长安布勒(Ambler) 提请国际计量委员会(CIPM)注意不确定度 问题的重要性。
• 1978年5月，国际计量局(BIPM)发出不确 定度征求意见书。
• 1980年，国际计量局召开会议，讨论了各 国及国际专业组织意见，得出了结论，提出 了实验不确定度表示建议书INC-1(1980)。
4 不确定度评定举例
• 1.2.2不确定度发展进程
• 400年前，德国天文学家开普勒(Kepler)借 助于仪器进行天文测量，得以发现行星运 动规律，从测量结果比较中，他知道轨道 测量中有不确定度。