蛋白质类药物分析

百泰派克生物科技
蛋白质药物的翻译后修饰
随着生物医药技术的发展，越来越多的蛋白质类药物被开发出来用于各种疾病的治疗，常见的蛋白质类药物如蛋白质、多肽、单克隆抗体、疫苗和抗体偶联药物等。

这些蛋白质类药物有时需要进行一些修饰才能发挥预想的生物学功能，达到治疗效果。

常见的蛋白质药物翻译后修饰包括糖基化、二硫键、乙酰化和磷酸化等，不同的修饰类型、氨基酸修饰位点以及修饰的含量都会严重影响药物终产品的安全性和疗效性。

研究表明，糖基化程度的高低与促红细胞生成素（一种蛋白类药物）的活性和半衰期密切相关，单克隆抗体的糖链类型影响其与受体的亲和力。

因此，对蛋白质药物的翻译后修饰的分析与鉴定是必不可少的。

目前主要依靠液相色谱-串联质谱技术对蛋白质药物进行翻译后修饰鉴定，其原理和分析流程与常规的蛋白质翻译后修饰鉴定类似。

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台结合Nano-LC色谱，提供快速高效的蛋白质药物翻译后修饰鉴定服务技术包裹，您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的样品寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括蛋白提取、蛋白酶切、修饰肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析，欢迎免费咨询。

蛋白分子成药性评价简述摘要近些年来，治疗性抗体及抗体类蛋白已经成为欧美新批准药物的一大组成部分，此类药物的临床试验数量呈迅速增长的趋势。

一个可成功开发成商业化药物的治疗性蛋白，不仅应具有理想的药效、安全性和药代动力学特性，还应具有理想的理化特性，使得其稳定性能够满足生产、制剂工艺的技术要求。

这一系列理化特性的评价，也称为“成药性”或“可生产性”评价。

本文总结了目前成药性评价方法的研究进展。

关键词：治疗性蛋白、成药性、可生产性、理化性质、稳定性、制剂前言近年来，基于单克隆抗体的治疗性药物成为了制药企业研发管线中最重要的一部分。

据统计，2016年处于临床研究中的抗体类药物分子数量在已超过了470个[1]，适应症范围覆盖了肿瘤、自身免疫、眼科及一些罕见病等多个方面。

大分子蛋白药物在原液、制剂生产，及临床给药时常遇到的一个问题是蛋白的不稳定性。

一方面由于蛋白质天然的稳定性显著低于小分子化药，另一方面为了达到天然蛋白所不具有的治疗特性，研究者们还应用蛋白质工程设计出了各种非天然蛋白，如双特异性抗体、融合蛋白等。

而同时这些非天然蛋白的稳定性常常更加成为问题。

一些理化特性较差的蛋白常常在生产、储存、给药过程中出现研究者不想看到的化学修饰、断裂和聚集等现象，这大大影响了药物的产率、活性，高分子聚集体还会造成免疫原性等方面的安全性问题。

过去很多研究机构主要基于生物学活性来筛选候选分子，其可生产性的相关影响因素在分子发现阶段并未纳入考量范围。

但这些分子常常在推进到后期生产工艺开发阶段时，遇到稳定性等技术方面的问题而无法顺利商业化，从而导致大量资源被浪费。

近5年来，越来越多的研发机构开始将成药性评价也纳入蛋白药物发现阶段，以得到最佳的药物分子。

与小分子药物已有简单成熟的成药性评价标准：“里宾斯基五规则”[2]不同，大分子药物的成药性评价目前尚无类似的评价标准。

本文结合近年来各方面的研究进展，将所报道的各种大分子成药性评价方法进行了综述。

小分子药物蛋白质谱（Proteomics）是研究生物体内蛋白质组成、结构和功能的一门学科，是系统生物学和生物医学研究的重要工具之一。

蛋白质谱学技术在疾病诊断、治疗和新药研发等方面具有广泛的应用前景。

PKM2（Pyruvate Kinase M2）是一种重要的代谢酶，在肿瘤发生和发展过程中起着重要作用。

近年来，研究人员发现小分子药物与PKM2结合并调控其活性，成为肿瘤治疗的新策略。

本文将重点介绍小分子药物与PKM2之间的相互作用和蛋白质谱技术在该领域的应用研究进展。

一、PKM2的生物学功能及临床意义1. PKM2的结构和功能PKM2是一种重要的蛋白质激酶，参与糖酵解途径中催化磷酸烯醇丙酮酸（PEP）向丙酮酸转化的关键步骤，是维持细胞能量代谢平衡的重要因子。

2. PKM2在肿瘤发生和发展中的作用近年来的研究表明，PKM2在肿瘤细胞的代谢重编程、增殖和转移过程中发挥重要作用，成为肿瘤治疗研究的热点。

3. PKM2作为肿瘤治疗靶点的潜在价值由于PKM2在肿瘤发生和发展中的重要作用，研究人员开始探索将PKM2作为肿瘤治疗的靶点，开发靶向PKM2的抗肿瘤药物。

二、小分子药物与PKM2的相互作用机制1. 小分子药物对PKM2活性的调控机制研究人员发现，小分子化合物（如狭叶马兜铃碱）通过与PKM2特定残基的相互作用，能够调控PKM2的催化活性和代谢途径选择。

2. 小分子药物在调控肿瘤细胞代谢转化中的作用对PKM2活性的调控直接影响肿瘤细胞的代谢转化，进而影响肿瘤生长、增殖和转移过程。

三、蛋白质谱技术在小分子药物与PKM2相互作用研究中的应用1. 亲和纯化-质谱分析（AP-MS）技术在PKM2小分子药物结合蛋白互作蛋白质组学研究中的应用通过AP-MS技术，研究人员可以筛选出PKM2与小分子药物的结合蛋白，揭示小分子药物通过哪些蛋白质介导影响PKM2的活性。

2. 肽质谱分析技术在鉴定PKM2翻译后修饰的应用肽质谱技术可以帮助研究人员鉴定PKM2的翻译后修饰，揭示小分子药物与PKM2相互作用的分子机制。

蛋白质药物的研发与生产一、引言蛋白质是生命体系中同时担任结构和功能的重要分子。

许多疾病的发展都与蛋白质有关，蛋白质药物已成为临床治疗的主要手段之一。

本文将介绍蛋白质药物的研发和生产。

二、蛋白质药物的研发1.蛋白质药物的种类蛋白质药物主要包括单克隆抗体、重组蛋白和蛋白质表面结构模拟体等。

单克隆抗体主要用于肿瘤、自身免疫等疾病的治疗，重组蛋白主要用于代替人体中缺失的功能性蛋白质，如干扰素、转化生长因子等。

蛋白质表面结构模拟体主要用于感染病毒和细菌等疾病的治疗。

2.蛋白质药物的研发流程蛋白质药物的研发流程包括基因克隆、表达和纯化、药效评价、体内药动学评价、毒性评价等环节。

其中，基因克隆是研发蛋白质药物的第一步，需要对目标蛋白的基因进行克隆和序列分析，确定最佳表达载体和宿主菌株。

表达和纯化是研发蛋白质药物的关键环节，需要对目标蛋白进行大规模的表达和纯化，并进行各种质量控制和活性评价。

药效评价是评价蛋白质药物疗效的重要环节，需要进行体外和体内实验，确定药物的作用机制和药效。

体内药动学评价和毒性评价则是评价药物安全性和耐受性的重要环节。

3.蛋白质药物研发的挑战和解决方案蛋白质药物研发面临着多种挑战，如蛋白质稳定性、药效性和免疫原性等。

为应对这些挑战，研究人员需要采用多种策略和技术手段。

比如，通过改变蛋白质结构、构建哑变体等手段提高药物的稳定性和降低免疫原性；通过多肽标记等手段提高药物的生物利用度和半衰期；通过选择合适的表达系统和纯化技术等手段提高药物的纯度和活性。

三、蛋白质药物的生产1.蛋白质药物的生产流程蛋白质药物的生产流程包括菌种扩培、发酵、纯化和制剂等环节。

菌种扩培是生产蛋白质药物的第一步，需要对表达蛋白质的宿主菌株进行扩培，培养细胞达到一定密度后添加诱导剂。

发酵是蛋白质药物生产的核心环节，需要对表达蛋白的菌液进行大规模的发酵，借助于发酵罐和其他设备，控制温度、pH、氧气气体浓度及营养成分等因素，使细胞大量表达目标蛋白。

生物药物分析试题及答案一、单选题（每题2分，共20分）1. 生物药物分析中，以下哪种方法不适用于蛋白质类药物的定量分析？A. 高效液相色谱法B. 紫外分光光度法C. 核磁共振波谱法D. 质谱法答案：C2. 以下哪种生物药物的分析不需要考虑其稳定性？A. 胰岛素B. 干扰素C. 抗体药物D. 维生素C答案：D3. 在生物药物分析中，以下哪种技术不用于蛋白质的纯度分析？A. SDS-PAGE电泳B. 高效液相色谱法C. 质谱法D. 核磁共振波谱法答案：D4. 生物药物的生物活性测定中，以下哪种方法不是常用的活性测定方法？A. 细胞增殖实验B. 酶联免疫吸附测定C. 放射性免疫分析D. 热重分析答案：D5. 在生物药物的质量控制中，以下哪种检测不是必要的？A. 纯度检测B. 含量测定C. 热稳定性测试D. 微生物限度检查答案：C6. 以下哪种生物药物不适合采用高效液相色谱法进行分析？A. 重组人生长激素B. 重组人胰岛素C. 重组人干扰素D. 重组人红细胞生成素答案：B7. 在生物药物分析中，以下哪种方法不适用于蛋白质类药物的结构分析？A. 质谱法B. 核磁共振波谱法C. 圆二色光谱法D. 热重分析答案：D8. 生物药物的生物等效性评价中，以下哪种方法不常用？A. 药代动力学研究B. 药效动力学研究C. 免疫原性分析D. 热重分析答案：D9. 在生物药物的质量控制中，以下哪种检测不是必要的？A. 纯度检测B. 含量测定C. 微生物限度检查D. 热重分析答案：D10. 以下哪种生物药物的分析不需要考虑其免疫原性？A. 重组人胰岛素B. 重组人生长激素C. 重组人干扰素D. 维生素C答案：D二、多选题（每题3分，共15分）1. 生物药物分析中，以下哪些因素会影响蛋白质类药物的稳定性？A. pH值B. 温度C. 光照D. 蛋白质的分子量答案：A、B、C2. 在生物药物分析中，以下哪些方法可用于蛋白质类药物的定量分析？A. 高效液相色谱法B. 紫外分光光度法C. 核磁共振波谱法D. 质谱法答案：A、B、D3. 生物药物的质量控制中，以下哪些检测是必要的？A. 纯度检测B. 含量测定C. 微生物限度检查D. 热稳定性测试答案：A、B、C4. 生物药物的生物活性测定中，以下哪些方法常用？A. 细胞增殖实验B. 酶联免疫吸附测定C. 放射性免疫分析D. 热重分析答案：A、B、C5. 在生物药物分析中，以下哪些方法可用于蛋白质类药物的结构分析？A. 质谱法B. 核磁共振波谱法C. 圆二色光谱法D. 热重分析答案：A、B、C三、判断题（每题1分，共10分）1. 生物药物分析中，高效液相色谱法是常用的定量分析方法。

蛋白质与药物相互作用分析的研究与开发蛋白质与药物相互作用分析的研究与开发摘要：蛋白质与药物的相互作用在药物研发与临床应用中起着至关重要的作用。

本论文主要介绍蛋白质与药物相互作用分析的研究与开发，包括研究方法、技术手段以及在药物研发中的应用等。

希望通过本论文的撰写，能够加深对蛋白质与药物相互作用的理解，并为相关领域的研究与开发提供参考。

一、引言蛋白质与药物的相互作用是药物研发过程中的关键环节之一。

药物的靶点通常是蛋白质，药物通过与蛋白质结合从而发挥其药理作用。

因此，准确地分析和预测蛋白质与药物的相互作用对于药物的研发和临床应用至关重要。

二、蛋白质与药物相互作用的研究方法1. 结构生物学方法结构生物学方法主要包括X射线晶体学、核磁共振和电子显微镜等技术手段。

这些方法可以解析蛋白质的三维结构，从而获得蛋白质与药物的结合位点、结合模式等信息。

2. 分子对接技术分子对接技术是一种体外计算方法，可以预测蛋白质与药物的结合位点和结合能力。

分子对接技术根据蛋白质和药物的结构信息建立模型，并通过模拟计算得出蛋白质与药物的结合模式与结合能力。

3. 生物物理方法生物物理方法主要包括表面等离子共振、热卤片、荧光共振能量转移等技术手段。

这些方法可以直接测量蛋白质与药物的结合能力、结合位点等物理化学性质。

三、蛋白质与药物相互作用的技术手段1. 蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是一种高通量分析方法，可以同时测量多个蛋白质与药物的相互作用。

该技术通过将蛋白质固定在芯片表面，再与药物通过共价键或非共价键结合，从而实现药物与蛋白质的相互作用分析。

2. 蛋白质质谱技术蛋白质质谱技术是一种基于质谱的靶位点发现方法，可以快速鉴定与药物相互作用的蛋白质。

该技术通过将蛋白质与药物结合后进行质谱分析，并通过质谱数据鉴定蛋白质与药物的结合位点和结合能力。

3. 亲和层析技术亲和层析技术是通过亲和层析柱实现蛋白质与药物的相互作用分析。

该技术利用柱子内部填充的亲和层析材料与目标蛋白质或药物之间的特异性相互作用，实现蛋白质与药物的富集和分离。

蛋白质质谱分析技术蛋白质质谱分析技术是一种广泛应用于生物医学研究和药物开发领域的重要分析方法。

它通过测定蛋白质的分子质量、结构以及相互作用等信息，为科学家提供了深入了解蛋白质功能和疾病机制的有力工具。

本文将介绍蛋白质质谱分析技术的原理、方法及其在不同领域的应用。

一、蛋白质质谱分析技术的原理蛋白质质谱分析技术基于质谱仪的原理，该仪器能够将蛋白质分子转化为离子，并通过质谱分析技术对离子进行检测和分析。

质谱分析技术主要包括四个步骤：样品制备、质谱仪分析、数据获取和解析。

在样品制备过程中，蛋白质通常需要经过蛋白质提取、纯化和消化等处理步骤，以获取高质量的样品。

随后，样品通过不同的离子化方法（如电喷雾离子化或激光解析离子化）将蛋白质转化为离子化的状态，并进入质谱仪进行分析。

质谱仪中的离子分离装置（如时间飞行法或四极杆）能够按照质量-电荷比将离子分离并进行测量。

最后，通过数据的获取和解析，科学家可以获得蛋白质的分子质量、序列信息、结构以及相互作用等重要参数。

二、蛋白质质谱分析技术的方法蛋白质质谱分析技术包括多种不同的方法和技术，下面将介绍其中的一些常用方法。

1. 质谱仪类型质谱仪分为多种类型，包括飞行时间质谱仪（TOF）、电子捕获质谱仪（ESI-MS）、多杆质谱仪等。

不同类型的质谱仪适用于不同的蛋白质分析需求，具有不同的优势和适用范围。

2. 核心技术蛋白质质谱分析中的核心技术包括蛋白质消化、亲和纯化、离子化方法以及质谱数据分析等。

消化方法如胰蛋白酶消化、化学消化等可将复杂蛋白质分子分解为易于分析的肽段。

亲和纯化方法则能够富集特定的蛋白质或肽段。

离子化方法常用的有电喷雾离子化和激光解析离子化，能够将蛋白质或肽段转化为离子态以进行分析。

质谱数据的解析和处理涉及到数据库比对、蛋白质定量以及结构分析等多个方面。

三、蛋白质质谱分析技术的应用蛋白质质谱分析技术在生物医学研究和药物开发领域有着广泛的应用。

1. 蛋白质鉴定蛋白质质谱分析技术可以用于鉴定复杂混合物中的蛋白质成分，如细胞蛋白质组、组织蛋白质组等，为研究蛋白质功能和疾病相关基因的表达提供重要的手段。

蛋白质在药物开发中的作用蛋白质作为生命体内的重要组成部分，在药物开发中扮演着重要的角色。

本文将探讨蛋白质在药物开发过程中的作用，并分析其在不同阶段的具体应用。

1. 疾病标靶发现阶段蛋白质在疾病标靶发现阶段起着重要作用。

研究人员通过对不同蛋白质的功能和表达进行分析，以确定与疾病相关的蛋白质标靶。

通过这种方式，科学家可以揭示疾病发生的机制，并找到合适的蛋白质作为靶点进行进一步的研究与开发。

2. 药物设计和筛选阶段在药物设计和筛选阶段，蛋白质的结构和功能被广泛应用。

科学家使用结构生物学等技术手段来研究蛋白质的三维结构，并通过计算机模拟等方法来设计药物分子与目标蛋白质之间的相互作用。

这种相互作用能够帮助科学家评估候选药物的亲和性和特异性，从而筛选出最有效的药物候选分子。

3. 药物生产与开发阶段在药物生产与开发阶段，蛋白质的表达和纯化技术被广泛应用。

人类蛋白质的生产通常使用重组DNA技术，通过转基因细胞表达和纯化工艺获得目标蛋白质。

这些蛋白质被用作药物的活性成分，并被进一步进行药物制剂的开发和优化。

4. 药物安全性和疗效评价阶段在药物安全性和疗效评价阶段，蛋白质在临床试验和药物监管中发挥着重要作用。

临床试验前，蛋白质被用作生物标志物来评估药物的有效性和安全性。

而在药物监管中，蛋白质被用作检测药物残留和不良反应的指标，以确保药物的质量和安全性。

总结起来，蛋白质在药物开发中发挥着至关重要的作用。

它们通过在疾病标靶发现、药物设计和筛选、药物生产与开发以及药物安全性和疗效评价等阶段的应用，为科学家提供了重要的工具和手段。

未来，随着生物技术和药物研发技术的不断发展，蛋白质在药物开发中的作用将越来越重要，为人类健康事业做出更大的贡献。

在研究方法上，多肽和蛋白质药物口服吸收机制及策略的分析主要依赖于体 外实验、体内实验和数学模型等手段。体外实验包括对药物理化性质的分析、药 物在模拟胃肠道环境中的稳定性评估等；体内实验包括药代动力学分析、药物分 布和排泄等；数学模型则可以对药物吸收过程中的各种因素进行量化分析，有助 于深入理解吸收机制。
（1）调节细胞功能：多肽类药物可以调节细胞生长、分化、凋亡等过程， 从而达到治疗疾病的目的。
（2）抑制酶活性：一些多肽类药物可以抑制特定酶的活性，从而降低疾病 的发生和发展。
（3）调节免疫反应：多肽类药物可以调节免疫反应，包括细胞免疫和体液 免疫，从而达到治疗免疫相关疾病的目的。
3、多肽类药物的临床应用
在吸收机制分析方面，研究者们已明确了多种吸收途径，如淋巴途径、细胞 旁路途径和跨细胞途径等。这些途径在药物的吸收速度和程度上有着不同的影响。 例如，淋巴途径可以提高药物的生物利用度，而细胞旁路途径则可以迅速地将药 物分布到组织中。对于跨细胞途径，研究者们正在深入探讨其具体机制，以便为 药物设计和优化提供更多指导。
为确保口服蛋白多肽类药物制剂的稳定性，需在制剂制备过程中建立严格的 质量控制体系。一方面，要原料药的选取，保证原料药的质量和稳定性；另一方 面，要采用合适的制剂工艺和稳定剂，以延缓药物在储存和使用过程中的降解。 同时，应重视杂质的排除，防止其对药物疗效和安全性的影响。
临床试验是评价口服蛋白多肽类药物制剂疗效和安全性的关键环节。应遵循 国际通用的GCP（药物临床试验质量管理规范）原则，设立合理的试验方案，明 确评价标准，并采用适当的统计学方法进行分析。在试验过程中，要确保受试者 的权益和安全，同时密切不良反应的发生情况，以便对药物进行全面评估。
多肽类药物可根据其来源、功能和结构进行分类。根据来源，多肽类药物可 分为天然多肽、合成多肽和重组多肽。根据功能，多肽类药物可分为细胞因子抑 制剂、神经递质抑制剂、酶抑制剂等。根据结构，多肽类药物可分为环状多肽、 线状多肽和嵌合多肽。

原理：蛋白质与硫酸和催 化剂一同加热消化，使蛋 白质分解，分解的氨与硫 酸结合生成硫酸铵。然后 在碱性条件下蒸馏将铵盐 转化为氨，随水蒸气蒸馏 出来并为过量的硼酸液吸 收，再以硫酸或盐酸标准 溶液滴定，计算出样品中 的氮量。由于蛋白质含氮 量比较恒定，蛋白质含量 =含氮量/16%，可由其氮 量计算蛋白质含量。
原理 • 样品与特殊基质混合形成 结晶，激光作用于晶体使 之直接气化并离子化。
优点 • 分析速度快，灵敏度高， 能忍受高盐样品。
缺点 • 背景信号大，不适于质荷 比太小的样品。
2.3 有关物质
工艺杂质 • 缺失肽，插入肽，未脱保 护肽。
降解产物 • 多肽氧化、还原、水解、 脱酰胺、二硫键错配。 聚合物 • 二聚体，多聚体。
3.8 蛋白质印迹法
适用 1～5ng蛋白质，用于细 范围 胞中特异蛋白质的测定。
优点 灵敏度高，特异性强。
缺点 成本高，技术难度大。
3.9 高效液相色谱法
原理：酪氨酸，苯丙氨酸和色氨酸残基在280nm处 有紫外吸收，吸光度与蛋白质含量成正比。反相 HPLC可以分析多肽，更大分子量的多肽需要用凝 胶过滤色谱柱。
2.1 氨基酸分析
2.1.1 酸水解 6mol/L盐酸，110℃，真空，20-24小时。
优点：氨基酸不消旋。
2.1 氨基酸分析
2.1.2 碱水解 5mol/L氢氧化钠溶液，充氮封管，110℃，22小时。
优点：色氨酸稳定。
2.1 氨基酸分析
2.1.3 酶水解 一组蛋白酶
优点：条件温和，氨基 酸不消旋，不被破坏。
3.9 高效液相色谱法
适用 范围
10-9～10-12g蛋白质。
优点
高灵敏度，快速分 析。
缺点

生物药物分析重点完整版生物药物是通过生物技术手段制造的药物，其活性成分是通过生物源来获得的。

与化学合成药物不同，生物药物具有高度的复杂性和多样性，因此对其进行分析至关重要。

下面是生物药物分析的重点内容：1. 蛋白质序列分析：生物药物通常是由蛋白质或多肽组成的，因此确定其氨基酸序列是十分重要的。

这可以通过蛋白质质谱法（Protein Mass Spectrometry）或者核酸测序法（Nucleic Acid Sequencing）来实现。

2.组分分析：生物药物是复杂的混合物，可包含多种不同的成分，例如蛋白质、糖类、脂类等。

对于生物药物的组分分析，可以使用色谱法，如高效液相色谱法（HPLC）或毛细管电泳法（CE）等。

3.纯化与纯度分析：生物药物的纯度对其药效和安全性至关重要。

纯化过程需要将生物药物与所含的杂质进行分离，常用的方法包括亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等。

而对于纯度的分析，则可以通过各种色谱方法和电泳分析手段来实现。

4.结构分析：了解生物药物的结构对于评估其功能和作用机制至关重要。

结构分析通常包括二级结构、三级结构和四级结构的测定。

核磁共振（NMR）和X射线晶体学是常用的方法。

5.生物活性分析：生物药物的药效可以通过多种生物活性分析方法进行评估。

这包括细胞培养实验、动物模型和体内药效学实验等。

6.稳定性分析：生物药物往往是不稳定的，并受到多种因素的影响，如温度、光照和pH值等。

稳定性分析可以通过测定样品在不同条件下的变化来评估药物的稳定性。

7.免疫原性分析：生物药物可能会引起免疫反应，导致不良反应。

因此，对于生物药物的免疫原性进行分析十分重要。

这可以通过体内和体外方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组化等来实现。

8.品质控制和一致性分析：对于生物药物的品质控制和一致性分析至关重要，以确保其在不同批次和制造过程中的一致性。

这可以通过比较分析、稳定性试验和其他生物学方法来实现。

3.四川远大蜀阳药业
4.成都蓉生药
2014-6-2
2014-6-2
上海莱士血液制品股份有限公司
上海莱士血液制品股份有限公司源于1988年10月由美国稀有抗体 抗原供应公司和上海市血液中心血制品输血器材经营公司合资成立的 上海莱士血制品有限公司，是中国第一家中外合资的血液制品大型生 产企业。 上海莱士主要产品包括人血白蛋白、静注人免疫球蛋白(pH4)、人 凝血因子VIII、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原、冻干人凝血酶、 外用冻干纤维蛋白粘合剂，共7个品种23个规格。上海莱士是“上海 市外商投资先进技术企业”及上海市科学技术委员会认定的“高新技 术企业”，是国内同行业中血浆综合利用率高、产品种类齐全、结构 合理的领先血液制品生产企业之一。
2014-6-2
发展历史
1、1993年上海莱士血制品有限公司将人血白蛋白 生产技术引入我国，并获得国家药品主管部门核准 后投入生产，以商品名“安普莱士”上市销售。
2、国内企业于1994年
后先后研制开发成功， 上海生物制品研究所、
3.2005年国内重点
城市样本医院人血 白蛋白购入总金额 为38778万元，同 比上一年增长了 14.53%，其中纯进 口制品不到20%。
沉淀线的分析
靠近哪一边→看浓度 沉淀线靠近浓度低，含量低的 弯向哪一边→看相对分子质量 沉淀线弯向相对分子质量大的
2014-6-2
渗透压摩尔浓度的测量
溶液的渗透压，依赖于溶液中溶质离子的数量，是溶液的依数性之一， 通常以渗透压摩尔浓度（Osmolality)表示，它反映的是溶液中各种溶质对 渗透压贡献的总和。血液渗透压决定血液中细胞膜两侧水份的转移，正常 的血液渗透压对于维持红细胞的体积和形态正常具有重要作用。 通常采用测量溶液的冰点下降来间接测定其渗透压摩尔浓度。 原理： 在理想的稀溶液中，冰点下降符合ΔTf=Kf· m 的关系，式中，ΔTf 为冰 点下降值，Kf 为冰点下降常数（当水为溶剂时为1.86），m 为重量摩尔浓 度。而渗透压符合Po=Ko· m 的关系，式中，Po 为渗透压，Ko 为渗透压常 数，m 为溶液的重量摩尔浓度。由于两式中的浓度等同，故可以用冰点下 降法测定溶液的渗透压摩尔浓度。 正常人体血液的渗透压摩尔浓度范围为285-310mOsmol/kg，0.9%氯 化钠溶液或5%葡糖溶液的渗透压摩尔浓度与人体血液相当。

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５．ＦＵ
由各种核糖供体酶合成５－ＦＵＲ
作者： 作者单位： 陈钢 上海市食品药品检验所生物制品检定室 上海 201203
本文链接：/Conference_6681585.aspx
、
多肽、蛋白质类药物的质量研究和质量标准建立
陈钢（上海市食品药品检验所生物制品检定室上海２０１
２０３）
摘要：本文钊‘对多肽、蛋Ｆｊ质类药物的质量研究和质量标准的建立进行了系统闸述，着重论述 了质量研究内容确定的一‘般历ｉ则，生化药质量研究的内容，生物制品质量研究的内容，方法验证应 关注的Ｉ’ｕＪ题，以及质量标准建立的一一般原则。 关键词：多肽：蛋白质；质最研究；质最标准
一、质量研究内容确定的一般原则
药物的质量研究足质奄标准制订的旗础。质量研究的内容应尽可能全面，既要考虑一１般性要求，
义要有针对性。确定质疑研究内容的１般历ｉ则，应根据所研制药物的特性、所采用的制各Ｉ：艺、药
物的稳定性数据来定，生物制晶还要根据所使用的生物原材料及＿『：艺束确定。
二、生化药质量研究的内容
五、质量标准建立的一般原则
质量标准建立的一般原则：质鼍标准主要由检测项Ｆ１、分析方法和限度组成：在全面、有针对 性的质最研究基础上，充分考虑药物的安伞。陀和有效性，以及生产、流通、使用各个环节的影响， 确定控制产品质量的项日和限度：质趟标准应能反映产品特征和质量变化，有效控制产品批ｆ刚质最， 验证生产Ｔ艺的稳定性；所用的分析方法应经过方法学验证，具有一‘定的适用性和重现性，同时还 应考虑原料药和其制剂质量标准的关联性。 多肽药物质量标准项Ｆ１一‘般有，外观性状；比旋度；氨基酸分析；反离子的含量；水分：多肽 纯度：多肽序列；残留溶剂；氟化物残留量；肽图；多肽的结构；生物或免疫活性；多肽含量等。 提取物药物质量标准项ＦＩ应尽可能用理化检测，不能用的应以工艺、安全。件检测和效价测定（或 活一Ｐ＿－Ｉ－：ｆＮ定）结合来控制质量。 蛋白质药物以重组治疗蛋白药品为例，质韪标准项Ｆ１ １般有，比活；肽图；纯度（ＨＰＬＣ）；纯 度（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）；分子量；等电点；最大的紫外吸收波长；残留ＤＮＡ；残留宿主细胞蛋白：残留抗 生素：Ｎ端氮基酸序列：细菌内毒素等

新疆医科大学教案首页编号：_1－33_第十八章生物技术药物制剂第一节概述一、生物技术的基本概念1、生物技术或称生物工程（biotechnology），是应用生物体（包括微生物、动物细胞，植物细胞）或其组成部分（细胞器和酶），在最适条件下，生产有价值的产物或进行有益过程的技术。

2、现代生物技术主要包括基因工程、细胞工程与酶工程、发酵工程（微生物工程）与生化工程。

二、生物技术药物的结构特点与理化性质（一）蛋白质的结构特点蛋白质的组成和一般结构（一、二、三、四级结构）（二）蛋白质的理化性质1．蛋白质的一般理化性质：旋光性、紫外吸收、蛋白质两性本质与电学性质（1）旋光性：蛋白质分子总体旋光性由构成氨基酸各个旋光度的总和决定，通常是右旋，它由螺旋结构引起。

蛋白质变性，螺旋结构松开，则其左旋性增大。

（2）紫外吸收：大部分蛋白质均含有带苯核的苯丙氨酸、酪氨酸与色氨酸，苯核在紫外280nm有最大吸收。

氨基酸在紫外230nm显示强吸收。

（3）蛋白质两性本质与电学性质：蛋白质除了肽链N-末端有自由的氨基和C-末端有自由的羧基外，在氨基酸的侧链上还有很多解离基团，如赖氨酸的-氨基，谷氨酸的γ羧基等。

这些基团在一定 pH条件下都能发生解离而带电。

因此蛋白质是两性电解质，在不同 pH条件下蛋白质会成为阳离子、阴离子或二性离子。

2．蛋白质的不稳定性（1）由于共价键引起的不稳定性：水解、氧化和消旋化，此外还有蛋白质的特有反应，即二硫键的断裂与交换（2）由非共价键引起的不稳定性：聚集（aggregation）、宏观沉淀、表面吸附与蛋白质变性（三）蛋白质类药物的评价方法：多种分析方法：液相色谱法、光谱法、电泳、生物活性测定与免疫测定第二节蛋白质类药物制剂的处方与工艺（注射剂型）一、蛋白质类药物的一般处方组成：一类为溶液型注射剂，另一类是冻干粉注射剂二、液体剂型中蛋白质类药物的稳定化：①改造其结构；②加入适宜辅料蛋白类药物的稳定剂：缓冲液、表面活性剂、糖和多元醇、盐类、聚乙二醇类、大分子化合物、组氨酸、甘氨酸、谷氨酸和赖氨酸的盐酸盐等、金属离子1．缓冲液因为蛋白质的物理化学稳定性与pH值有关，通常蛋白质的稳定pH值范围很窄，应采用适当的缓冲系统，以提高蛋白质在溶液中的稳定性。

单克隆抗体药物质量控制与分析摘要：单克隆抗体（单抗）药物属于蛋白质类药物，具有相对分子质量大、极性强和跨膜受限等特点，药物代谢动力学有一定的特殊性和复杂性，临床应用中存在治疗效果个体差异大、生物效应多样和治疗响应丢失等问题。

影响单抗药物血药浓度的因素包括靶部位受体数量、抗药物抗体水平、药物间相互作用等。

早期开展治疗药物监测有助于及时调整单抗药物给药剂量，提高疗效，避免或减少不良反应的发生。

应积极开展药物临床监测，提高单抗药物合理用药水平和不良反应预警能力，减少对患者的伤害。

本文通过论述单克隆抗体药物杂质的相关内容，结合国内外研究现状，提出了控制单克隆抗体药物杂质的方法，希望能为相关企业提高单克隆抗体药物质量提供一定的参考依据。

关键词:单克隆抗体药物;杂质控制;质量近年来，单克隆抗体药物在制药行业取得了尤为突出的发展，其凭借副作用小、用量少、生物活性强、药效好、无代谢异化等优点得到了医药届的广泛关注。

由于单克隆抗体药物自身具有独特的结构特征，在生产合成此类药物时需要用到特殊的合成方法和剂型。

因此，单克隆抗体药物的杂质控制使相关企业面临新的要求和挑战。

据统计，全球范围内已有超过六十种合成单克隆抗体药物上市，各国药典中都对成熟品种进行了收载[1]。

我国对单克隆抗体药物的研究也越来越深入，出台了一系列相关规划政策，重点扶持单克隆抗体药物的新药创制。

为有效控制单克隆抗体药物的质量，应着重开展对药物杂质的控制。

据统计，全球范围内已有超过六十种合成单克隆抗体药物上市，各国药典中都对成熟品种进行了收载。

我国对单克隆抗体药物的研究也越来越深入，出台了一系列相关规划政策，大力支持相关行业人员研发和创造高质量、高安全性的单克隆抗体药物。

一、单克隆抗体药物杂质的概述单克隆抗体药物是不同种氨基酸间通过某些特定的组合顺序形成的。

从单克隆抗体药物的工艺特点来看，合成单克隆抗体药物需要经过多个步骤，而在这些合成步骤中会产生复杂的杂质。

审批页颁发部门：质量保证部分发部门：存档拷贝号：NO. /目录1目的 (4)2范围 (4)3定义 (4)4环境、健康和安全 (4)5培训 (4)6职责 (4)7程序（内容） (4)7.1概述 (4)7.2实验材料 (5)7.3实验人员 (8)7.4操作步骤/技术路线 (8)7.5过程及结果 (8)7.6结论 (13)7.7问题与讨论 (13)7.8原始记录/数据索引 (14)8相关文件 (14)9参考文献 (14)10流程图 (15)11附录 (15)1目的对XX蛋白质含量测定方法（紫外吸收法）的消光系数进行研究，以期获得最适的消光系数，从而确保该方法科学、合理，检测结果准确并稳定可靠。

2范围适用于XX蛋白质含量测定方法（紫外吸收法）的方法开发。

3定义4环境、健康和安全在本报告的开发过程中，会使用到强酸（如硫酸）、强碱（如氢氧化钠）及其它腐蚀性液体（如福林酚试剂），实验操作过程中应佩戴好手套与口罩，避免造成皮肤损伤；酸性、碱性废液应分别用碱、酸中和后再倾倒；腐蚀性液体切勿倒入下水道，应倒入废液桶，由专业部门回收。

在凯氏定氮实验过程中，会使用到高温设备（消化炉），实验操作过程中应佩戴好隔热防护手套，避免烫伤。

5培训————6职责6.1质量保证部：负责审核本方法开发报告。

6.2质量研究部：负责起草本方法开发报告。

7程序（内容）7.1概述紫外吸收法测定蛋白质含量具有方法快速、方法稳定、结果准确的优点，其基本原理是依据蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸，其在280nm波长处具有最大吸光度，在一定范围内其吸光度大小与蛋白质浓度呈正比。

通过光谱扫描（扫描范围为400nm~240nm）可获得供试品的最大吸收峰波长及在最大吸收峰波长处的吸光度值，再根据供试品在最大吸收峰处的特定消光系数及样品稀释倍数，通过朗伯比尔定律可计算出供试品的蛋白质含量。

在紫外吸收法测定XX蛋白质含量实验中，关键实验参数为消光系数，所以在整个开发过程中对消光系数进行了摸索研究。

常用的药物分析方法常用的药物分析方法可分为化学分析方法和生物分析方法两大类。

化学分析方法包括物理方法和化学方法。

物理方法包括质谱法、光谱法和色谱法等，化学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）和高效液相色谱法（HPLC）等。

质谱法是一种分析化学中常用的表征和鉴定药物的实验方法。

它通过测量药物样品中质量-电荷比，确定分子的组成和结构，从而实现鉴定和定量分析。

常用的质谱方法包括质谱仪、质谱图谱分析和质谱定量分析等。

光谱法是利用物质与电磁波相互作用的规律，研究它们在光学区域的吸收、散射、发射等现象，从而得出物质的结构和成分。

常见的光谱法包括紫外可见光谱（UV-Vis）、红外光谱（IR）和核磁共振谱（NMR）等。

色谱法是一种将物质分离的方法，根据不同物质在固定相（静态相）和移动相（动态相）中的亲和性差异，将其从混合物中逐个分离出来。

常用的色谱法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）和毛细管电泳（CE）等。

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种高灵敏度、高选择性的分析方法，广泛应用于药物代谢动力学研究、药物效应评价和药物安全性评估等领域。

它是利用酶作为检测指标，结合抗体和药物的特异性相互作用，通过光学或电化学信号来定量测定样品中目标物质的含量。

高效液相色谱法（HPLC）是一种基于液相流动和色谱柱分离原理的分析方法，具有高灵敏度、快速、准确、重现性好等特点，被广泛应用于药物分析和质量控制。

HPLC可用于药物纯度检测、定量分析、有害成分检测、药代动力学研究等。

生物分析方法主要是通过生物学实验手段来研究药物的效应和代谢过程。

常用的生物分析方法包括荧光定量PCR、蛋白电泳、细胞毒性测试和动物实验等。

荧光定量PCR是一种用于快速和准确测定DNA和RNA的方法，可以定量分析药物对基因表达的影响。

通过荧光染料标记靶分子，结合PCR技术的多倍化效应，可快速测定样品中目标分子的含量。

蛋白电泳是一种用于研究药物对蛋白质结构和功能的影响的方法。