瑞氏染色操作流程

外周血涂片的制作方法1、采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。

2、推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。

以约30度的夹角向前均匀地推动推片即可制成血涂片。

其薄厚度要适中，分布均匀而无空泡，边缘整齐。

3、固定：推片做好后，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量，甲醇固定液固定：涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。

但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。

多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。

4、染色：瑞氏-基姆萨双染1）从固定缸里取出载片后，在室温下通风晾干。

将载片平放在玻璃板上准备染色。

2）所用的两种染料事先过滤好（染料中有颗粒物，会沉淀在载玻片上影响载片的质量）3）将染料滴加到载玻片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。

等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS 溶液。

继续染色2到3分钟。

4）染色时间到后，用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。

冲片结束后将载片放到阴凉处风干。

5）在玻璃板上放好牙签，将风干的载片倒扣在一根牙签上，从背面滴加基姆萨染液进行扣染。

染色时间约为10分钟。

时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。

5、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。

6、显微观察：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。

用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。

在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。

所需材料：硅化过的载玻片，推片，甲醇瑞氏-基姆萨双染，过滤，PBS，牙签，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。

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英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

使用方法瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色：1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。

甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇ME（瑞氏染料）----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

染液配制(1) 瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作用：○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

瑞氏染色操作流程一、瑞氏染色实验前准备1.1准备染色液和显影液针对瑞氏染色实验，首先要准备染色液和显影液，染色液由25mL的瑞氏染料，90mL的盐酸溶液（浓度为5％），以及1mL的激发剂混合而成。

而显影液则是在10mL的9N的硫酸、10mL的5％的NaOH溶液、10mL的1％的苯甲醇和10mL的1％的芳香族醇基乙醇混合而成。

1.2准备染色木质菌梗在预先准备瑞氏染色液和显影液后，接下来要准备染色用的木质菌梗才能开始瑞氏染色实验。

首先，用洗碗笠将要染色的木质菌梗洗淨，然后用医用刀在木质菌梗中切出厚约2mm的薄片，最后用蒸汽–水泼淋法将木质菌梗片浸湿，方可准备瑞氏染色实验。

二、瑞氏染色实验操作2.1放置染色片在准备好染色液和显影液，以及木质菌梗薄片后，此时要把准备的的木质菌梗薄片放置在染色槽内，以留出表面空间，方便染色液充分浸渍。

2.2加入染色液之后将准备的瑞氏染色液加入染色槽，在实验室内控制温度为37℃，放置20分钟后，可以观察菌梗表面是否呈染色，一般都可以看到浅色到深色之间的蓝色或紫色染色，这说明瑞氏染色已经取得成功。

2.3加入显影液如果瑞氏染色实验成功，那么接下来可以准备将木质菌梗片洗净后加入显影液了，而此时温度需要将控制在22℃，放置5-10分钟后，可以发现菌梗片变淡，并且半透明，证明显影液已经取得成功。

2.4用x网影像再接着，用X网影像观测染色后的木质菌梗，当观测到菌梗表面开始出现斑斑点点发亮时，这表明染色实验结束，在此基础上对木质菌梗进行另一个体系的判断，也就是对菌梗的形态和染色的准确性进行分类、认定和鉴定。

三、瑞氏染色实验结束完成上述瑞氏染色实验操作后，就可以对经过染色后的木质菌梗进行分析、鉴定，完成木质菌梗的离子吸收率、分子斑点和染色效果等等内容，通过瑞氏染色实验把细菌聚集在一起，以便进行实验分析，这正是瑞氏染色实验取得成功的原因。

瑞氏染液配制、使用方法及注意事项南宁市二医院检验科马升俊1.瑞氏染色的原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。

瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。

2.试剂的配制：2.1 瑞氏染液的配制：2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。

将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。

染液配好后放于室温下，一周后即可使用。

新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。

久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。

染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。

2.1.2 成品瑞氏染液:现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。

2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。

配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。

3. 瑞氏染色的使用方法：（以血涂片为例）：3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上；3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟；3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；3.4用流水冲洗去染液,待干后镜检。

4.染色结果判断：在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。

显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。

白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。

细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

5.注意事项:5.1 PH对细胞染色有影响。

英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

使用方法瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色：1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。

甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇ME（瑞氏染料）----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

染液配制(1) 瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作用：○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

瑞氏姬姆萨染色操作规程生效日期：20150125 页码：第1页共2页1 目的：规范瑞氏姬姆萨染色操作规程，保证染色效果。

2 原理：2.1 染色原理：瑞氏姬姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成。

细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。

各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料（伊红）和碱性染料（亚甲蓝）的亲和力也不一样。

因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。

2.2 试剂组成：瑞氏姬姆萨A液（瑞氏染料、姬姆萨染料）瑞氏姬姆萨B液（磷酸盐）3 操作步骤：3.1 滴加瑞氏姬姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；3.2 再将瑞氏姬姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。

（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）3.3 水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。

4 结果解释：4.1 血细胞涂片、骨髓涂片染色：红细胞呈粉红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

4.2 阴道分泌物（妇科白带染色）：4.2.1 滴虫：经过染色后的滴虫跟活的滴虫呈现完全不同形态，一般情况下，看不到鞭毛，经过染色后，滴虫多为梨形、圆形、椭圆形或呈不规则形态，浆被染成灰蓝或天蓝色，核小，枣核状，常偏于一侧，需注意观察，避免与上皮细胞混淆。

4.2.2 念珠菌（霉菌）：染成深蓝色，可见芽生孢子，假菌丝细长而直。

4.2.3 白细胞：形态上与血细胞涂片的白细胞相同，一般白细胞的多少，提示发炎程瑞氏姬姆萨染色操作规程生效日期：20150125 页码：第2页共2页度的高低，对医生的诊断具有一定的指标作用。

巨噬细胞与淋巴细胞的瑞氏吉姆萨染色-概述说明以及解释1.引言1.1 概述瑞氏吉姆萨染色是一种常用的细胞染色技术，广泛应用于巨噬细胞和淋巴细胞的研究中。

巨噬细胞和淋巴细胞作为免疫系统中的两大重要细胞类型，对维持机体的免疫功能和免疫应答起着至关重要的作用。

瑞氏吉姆萨染色是利用吉姆萨染料对细胞染色的一种方法，该染色方法可使细胞核显色为蓝色，细胞质呈粉红色。

这种染色技术具有简单、快速、可靠的优点，因此在细胞学研究领域得到了广泛的应用。

巨噬细胞是一类具有噬菌、清除损伤细胞和产生炎症因子等功能的专门免疫细胞。

通过瑞氏吉姆萨染色可以清晰地观察巨噬细胞的形态特征、数量分布以及细胞内的器官结构，从而更好地了解巨噬细胞在炎症反应、感染和免疫调节中的作用机制。

淋巴细胞是免疫系统中的另一类重要细胞，分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞等多个亚群。

瑞氏吉姆萨染色技术可以帮助研究者观察淋巴细胞的数量比例、形态特征以及细胞发育和分化状态，有助于深入了解淋巴细胞的免疫功能和免疫调节机制。

瑞氏吉姆萨染色在巨噬细胞和淋巴细胞研究中的应用广泛，为科研工作者提供了一种方便、可靠的观察和分析工具。

通过深入研究巨噬细胞和淋巴细胞的瑞氏吉姆萨染色结果，可以进一步揭示它们在免疫学、肿瘤学、感染病理学等领域的重要作用，为相关疾病的研究和临床治疗提供有力支持。

未来，随着细胞研究的不断深入和技术的不断发展，瑞氏吉姆萨染色将继续发挥重要作用。

同时，结合其他高级细胞学和分子生物学技术的发展，我们可以更全面、深入地理解和阐释巨噬细胞和淋巴细胞在免疫反应和疾病发生发展中的作用机制，为新型诊断和治疗策略的研发提供理论基础。

1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分的主要目的是为读者提供对整篇文章的概览和组织结构的理解。

通过清晰地描述文章的结构，读者可以更好地理解文章的主要内容和思路，并能够更方便地查找感兴趣的信息。

在本篇文章中，文章结构包括三个主要部分：引言、正文和结论。

瑞士染液操作流程咱开始说说瑞士染液的操作流程哈。

一、准备工作。

咱得先把要用的东西都准备好。

这就好比做饭之前得把食材和厨具都备好一样。

你得有瑞士染液，这个是主角啦。

然后呢，还有干净的载玻片，这载玻片可得擦得干干净净的，不能有一点脏东西，不然就像在脏桌子上画画一样，效果肯定不好。

再有就是采血针，如果是做血液染色的话，采血针得是那种干净卫生的哦。

还有盖玻片也不能少，就像给小画儿加个保护罩一样。

另外，磷酸盐缓冲液（PBS）也是很重要的东西，这可是在染色过程中起到调节酸碱度的大功臣呢。

二、采血。

要是做血液的瑞士染色，这采血可有点小讲究。

你可不能手抖得太厉害，轻轻地用采血针刺破皮肤，就像给皮肤开个小小的门一样。

然后呢，把血滴在干净的载玻片一端。

注意哈，这个血滴的大小要合适，不能太大也不能太小，太大了染出来可能会糊成一团，太小了又不够看。

大概像个小芝麻粒那么大就挺合适的。

三、涂片。

采好血之后就要涂片啦。

拿另外一个干净的载玻片，把它的一端斜着放在有血滴的载玻片上，就像把一个小滑梯搭在小血滴旁边一样。

然后慢慢地把这个“小滑梯”往前推，让血滴顺着它均匀地铺开在载玻片上。

这个动作要轻要稳，就像给小宝贝盖被子一样，要铺得平平整整的，不能有太厚或者太薄的地方。

涂片完了之后呢，要把这个涂片放在一边晾干，就像把刚画好的画放在一边等颜料干一样。

四、染色。

涂片晾干之后就可以染色啦。

把涂片放在染色架上，然后慢慢地滴上瑞士染液，要把涂片都覆盖住哦。

这个时候你就会看到涂片被染液染成了一种紫红色，感觉就像给涂片穿上了一件漂亮的紫红色衣服。

让染液在涂片上停留大概1 3分钟，这个时间可不能太长也不能太短，太长了颜色会太深，太短了颜色又染不上。

然后呢，再慢慢地滴加等量的PBS，这个时候染液就会开始有一些奇妙的变化啦，就像魔法一样。

滴加PBS之后，轻轻地晃动染色架，让染液和PBS充分混合，这就像搅拌一杯美味的果汁一样，要搅拌得均匀一些哦。

混合之后再让它静置个5 10分钟，这个时候涂片的颜色会变得更加丰富好看。

瑞氏染色操作流程
1.实验准备
- 收集需要染色的细胞或组织样本，并固定在载玻片或试管中。

常用的固定方法包括用乙醇、甲醛、Perfix等。

-根据样品的特性和染色目的，选择适当的瑞氏染色方法和试剂。

常用的瑞氏染色方法包括瑞氏-厄利染色法、瑞氏-黛染色法等。

2.染色步骤
-将固定的细胞或组织样本浸入去离子水中，使其恢复至自然状态。

-准备适当浓度的染色试剂。

瑞氏染色试剂一般包括硒铁酸盐和酸性柠檬酸溶液。

-将样本浸入硒铁酸盐溶液中，浸泡时间根据实验需要和染色方法而定。

染色时间过长可能导致染色物质过量或染色效果不佳。

-用去离子水或PBS缓冲液冲洗样本，使其清洁并去除多余的染色试剂。

-将样本浸入酸性柠檬酸溶液中，去除多余的染色物质并增强染色效果。

-再次用去离子水或PBS缓冲液冲洗样本。

3.结果观察和分析
-将处理后的样本进行显微镜观察。

瑞氏染色可以用于可视化染色物质（如核酸和蛋白质）或细胞器结构（如核、线粒体等）。

-在显微镜下观察样本时，可以调整镜头焦距、曝光时间等参数，以获得清晰且准确的图像。

-观察到的染色结果可以进行进一步的分析和解释。

例如，可以量化染色强度或比较不同样本之间的染色差异。

总结：
瑞氏染色是一种常用的细胞和组织染色技术，可以用于生物学实验室的各种研究和应用。

该操作流程包括样本固定、染色步骤和结果观察与分析。

通过瑞氏染色，可以可视化并研究细胞和组织中的特定结构和分子，为生物学研究提供重要的实验基础。

瑞氏染色法题目
（最新版）
目录
1.瑞氏染色法的定义和背景
2.瑞氏染色法的原理和操作步骤
3.瑞氏染色法的应用领域和优势
4.瑞氏染色法的局限性和发展前景
正文
瑞氏染色法是一种常用的细胞染色技术，起源于 19 世纪末，由瑞士生物学家瑞氏（Reticulum）发明。

该方法主要通过染色剂对细胞进行染色，使细胞结构更加清晰，便于观察和研究。

瑞氏染色法的原理是利用染色剂对细胞内的核酸和蛋白质进行染色。

通常使用一种名为伊红（Erythrosin）的染料，将其与另一种名为美蓝（Methylene Blue）的染料混合，形成瑞氏染料。

操作步骤主要包括样品制备、染色、洗涤、脱水和透明，最后在显微镜下观察。

瑞氏染色法广泛应用于生物学、医学和法医学等领域。

在生物学研究中，瑞氏染色法可以帮助科学家观察细胞结构，了解细胞生长、发育和死亡过程。

在医学领域，瑞氏染色法可以用于诊断疾病，如癌症和感染性疾病。

在法医学中，瑞氏染色法可以用于分析犯罪现场中的生物样本，为案件侦破提供重要线索。

尽管瑞氏染色法具有很多优势，但仍存在一定的局限性。

例如，该方法对染色剂的浓度和染色时间要求较高，操作过程中容易出现误差。

此外，瑞氏染色法的染色效果受到细胞类型、组织环境和染色剂质量等多种因素的影响，可能影响观察结果。

随着科学技术的发展，瑞氏染色法也在不断改进和优化。

例如，研究
者们通过调整染色剂的配方和改进操作方法，提高了染色效果和稳定性。

瑞氏染色瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。

1原理：瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美篮混合经化学作用后，变成中性之伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。

此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。

由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。

2 试剂配制：1、瑞氏试剂瑞氏染料（粉）1克，加不含醋酮之甲醇600毫升溶解过滤后即成。

混合方式可将瑞氏染料置于研钵内，加适量甲醇混合研磨，使染料溶解，将已溶解的液体倒入清洁玻瓶，再放入甲醇继续溶解剩下染料，直至染料及甲醇均用完为止，然后过滤，以深色中性之玻璃瓶储备待用。

亦可将1克染料一次加入600毫升甲醇中，盛深色玻璃瓶内，塞好瓶口，置于温暖而黑暗之处或37度温箱内，每日振荡5min，连续7天以上，然后过滤储备用。

染液宜久置后使用，通常存放愈久，染色效果愈好。

2、缓冲液由1%的磷酸氢二钠和1%的磷酸二氢钾各30毫升加蒸馏水1000毫升配成，或以上两药各1克加2500毫升左右蒸馏水制成。

以石蕊试纸检验、调整酸碱度，使PH在6.5-7之间即可。

缓冲液亦可永新鲜蒸馏水或煮沸后密闭保存的蒸馏水。

如蒸馏水与空气过多接触，则可因吸收空气中之二氧化碳而使PH值变低，影响染色，故不宜使用。

3、染色步骤1 将已编号之涂片水平置于染色板或者染色架上，涂片两端各划一道蜡笔线，主要防止染液外溢。

2 滴加瑞氏染色液。

其多少依标本所占面积大小而定，一般为4-8滴，至染液将标本完全盖住为止。

染液不宜过少，否则，甲醛挥发后，易产生沉淀；不可过多，以免因过盛而流失，影响染色。

3 1-2分钟后，滴入缓冲液（染液与缓冲液的比例约为1：1.5，冬季1：1，夏季1：2）。

以气囊向玻璃片上轻轻打气，使染液和缓冲液混合均匀，一般不宜口吹起，以免呼出二氧化碳改变缓冲液酸碱度而影响染色。

4 自缓冲液滴入10-15分钟后，用自来水冲洗。