崇义野生桔与栽培种——南丰蜜桔抗逆生理的比对研究
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崇义野生桔与栽培种——南丰蜜桔抗逆生理的比对研究内容摘要:通过对崇义野生桔和南丰蜜桔果实的可溶性固形物、维生素C、可溶性总糖、可滴定酸等一系列的生理指标进行了测定,另外分析比较了两个品种之间超氧化物歧化酶的活性、丙二醛和游离脯氨酸等抗逆生理指标的差异,发现南丰蜜桔超氧化物歧化酶的活性比崇义野生桔强,而崇义野生桔的脯氨酸、膜脂过氧化程度较强于南丰蜜桔,这些结果表明崇义野生桔比南丰蜜桔更耐旱。此次试验的开展既有助于对崇义野生桔的研究开发,对发掘柑桔品种和改良新型材料也有重要意义。
关键词:崇义野生桔南丰蜜桔抗逆生理
Citrus wild and cultivated a physiological contrast
Abstract: A series of physiological characteristics of both Chongyi wild citrus and Nanfeng orange, including citrus fruit soluble solids, vitamin C content, total soluble sugar content and titratable acid were determined. Comparing the difference of superoxide dismutase activities, MDA (malondialdehyde) and proline physiological indexes between the two varieties, the results showed that the superoxide dismutase activities of Nanfeng orange are stronger than those of the Chongyi wild citrus, and the bioactivities of proline and lipid peroxidation of Chongyi wild citrus are more than those of Nanfeng citrus indicating that the drought resistance of Chongyi wild citrus are possibly higher than those of Nanfeng orange. The research will be benefited the development of Chongyi wild citrus and show some useful meaning for citrus variety improvement in uncovering significant new materials.
Key words : Chongyi wild citrus Nanfeng orange anti-physiology 崇义野生桔是20世纪70年代末在赣南的崇义原始林中发现的[1],这是目前世界上发现的第三片野生柑橘林,对我国柑橘生产品种的改良和柑橘种植业的发展
提供了重要的优势种质资源。截止到目前,对于柑桔野生种的研究还停留在分类和育种两方面,对于其生理特性的具体研究没有见诸报道。
刘庚峰等对道县野橘和莽山野橘进行了植物学性状特征鉴定[2]、同工酶分析[3];陈梦龙等进行了花粉粒电镜扫描等工作[4];廖振坤等采用AFLP技术,对湖南省宽皮柑橘类野生资源莽山野橘、道县野橘、江永野橘及印度野橘、立花野橘等23个材料进行鉴定,根据聚类结果和亲缘关系分析,结果表明莽山野橘、道县野橘等是较印度野橘和立花野橘更古老的野生种[5]。在柑橘近缘野生种的利用方面,据统计,利用PEG或电融合己经创造出了60多种有性亲和或有性不亲和的柑橘及其各种近缘野生种属间的体细胞杂种[6]。
南丰蜜桔属芸香科柑桔属植物,是我国优良的宽皮柑桔良种之一,原产于江西省南丰县,已有1300多年的栽培历史。南丰蜜桔是江西的传统地方特色品种,享有“桔中之王”美称[7]。
本实验通过对崇义野生桔和南丰蜜桔果实的生理特性进行了研究, 为简化植物果实品质的评价指标,采用主要成分分析方法。测定了可溶性固形物、维生素C、可溶性总糖、可滴定酸的含量,再对这4项指标进行分析,初步比较这两个品种的品质差异。然后通过测定它们的SOD活性、丙二醛和脯氨酸等,比较二者的抗逆生理指标,以期为今后崇义野生桔的开发利用提供理论依据。
1.1 材料与处理
南丰蜜桔的果实和叶片采自江西省南丰县,崇义野生桔的果实和叶片采自江西省崇义县。挑选大小均匀,无病虫害,成熟度一致的果实以及新鲜的叶片,放在—25℃低温条件下冰柜贮藏,测定生理生化指标。以果实为材料,测定可溶性总糖含量、可滴定酸的含量、维生素C的含量和可溶性固形物的含量,以叶片为材料,测定丙二醛含量、SOD活性和游离脯氨酸的含量。两个品种的每项指标的测定都做3组样品,南丰蜜桔标记为南丰1、南丰2、南丰3,崇义野生桔标记为崇义1、崇义2、崇义3。
1.2 测试指标及方法
1. 2.1 可溶性固形物(SSC) 的测定。
取样品去核,放入匀浆机进行匀浆后用纱布过滤取滤液,采用手持折光仪(WYF--4型)进行测定。[8]
1. 2.2费林试剂比色法测定可溶性总糖
(1)取已经去核的样品放入匀浆机进行匀浆后用纱布过滤,用干燥小烧杯准确称量5.00g 样品,将称好的样品转移至250ml 容量瓶中,加水稀释至200ml 左右,逐渐滴加5ml 乙酸锌溶液及5ml 亚铁氰化钾溶液,加水定容,混匀,静置30min 后用棉花过滤,弃去初滤液,收集滤液。(2)用50ml 量筒量取50.00ml 滤液于100.0ml 容量瓶中,加入5ml 盐酸(6mol/L )于68~70℃水浴锅中水解15 min ,立即取出迅速冷却至室温。加两滴甲基红指示剂(0.1%),用200g/L 氢氧化钠溶液中和至溶液刚好褪去粉红色后定容,混匀。(3)吸取碱性酒石酸甲液和乙液各5.00ml 于250ml 锥形瓶中,加水10ml ,加几粒玻璃珠,控制在2min 内加热至沸,从滴定管中快速滴加试样溶液,并保持溶液沸腾状态,直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗试样水解液的体积(V )。(4)结果计算: 总糖(以转化糖计,%)=
1001000
250
⨯⨯⨯V m F
式中,F ——10ml 碱性酒石酸铜溶液相当的转化糖质量,mg ;m ——样品质量,g ;V ——测定时平均消耗样品溶液的体积,ml ;250——样品溶液的体积,ml 。[8] 1.2.3 中和滴定法测定可滴定酸
(1)取待测样品,去皮取果肉,匀浆处理后,称取20g 与无CO 2蒸馏水移入250ml 容量瓶,定容,静置30分钟,用干燥滤纸过滤,弃去初始滤液25ml ,准确吸取滤液50ml,加入酚酞指示剂3-4滴,用0.1mol/LNaOH 标准溶液定至微红色30秒不褪,记录NaOH 标准溶液消耗的ml 数。(2)计算:总酸度(%)=CV k V 0×100/(m ×V 1)。式中:C---标准NaOH 溶液的浓度,mol/l ;V---滴定消耗标准标准NaOH 溶液体积,ml ;m---样品的质量,g ;V 0---样品的稀释液总体积,ml ;V 1---滴定时吸取的样液体积,ml ;k---换算为主要酸的系数,即1毫摩尔氢氧化钠相当于主要酸的系数 [9] 。
1.2.4 2,6-二氯靛酚滴定法维生素的测定
(1)用分析天平精确称取待测样品2.5g ,放入研钵中,加约10ml 1%HCl 溶液研磨,静置后,将提取液过滤入50ml 容量瓶中,如此反复提取3次,最后用1%HCl 定容至刻度,混摇均匀。(2)每次量取10ml 提取液放入50ml 三角瓶中,用微量滴定管,以2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至提取液呈现淡粉红色,并