熊果苷分离纯化研究

酶法生产α-熊果苷的纯化工艺杨祥开;成春燕;欧娜;周志鹏;韦星明;许黎明;周兴【期刊名称】《华中农业大学学报》【年(卷),期】2017(0)3【摘要】采用乙醇发酵去除酶法合成α-熊果苷反应液中大部分糖类杂质,以活性炭纤维吸附分离α-熊果苷,选择甲醇-乙酸乙酯混合溶剂重结晶精制。

结果表明,50%乙醇溶液洗脱部分α-熊果苷含量最高,此部分经甲醇-乙酸乙酯混合溶剂反复重结晶精制,可制备得到α-熊果苷无色针状结晶,HPLC检测纯度达到99%以上,收率达到80%。

该工艺简单可行,稳定性高、重复性好,适合大规模制备高纯度α-熊果苷。

【总页数】6页(P57-62)【关键词】酶合成法;α-熊果苷;活性炭;HPLC;重结晶【作者】杨祥开;成春燕;欧娜;周志鹏;韦星明;许黎明;周兴【作者单位】广西科学院生物研究所【正文语种】中文【中图分类】TQ464.3【相关文献】1.环糊精葡萄糖基转移酶生产α-熊果苷的反应条件优化及分子改造 [J], 张文蕾;宿玲恰;陶秀梅;吴敬2.蔗糖磷酸化酶的分离纯化及其催化合成α-熊果苷的研究 [J], 侯顾伟;马江锋;隋姗姗;徐冰;刘嵘明;姜岷3.蔗糖磷酸化酶的半理性设计及生产α-熊果苷的条件优化 [J], 沈洋;吕雪芹;林璐;李江华;堵国成;刘龙4.亲水作用液相色谱法同时测定美白化妆品中的α-熊果苷和β-熊果苷 [J], 简龙海;茹歌;陈丹丹;郑荣;王柯5.酶法转苷生产双歧因子啤酒技术研究图1各种糖含量液相色谱仪图谱23结论及讨论231以麦芽、大米为主要原料,运用麦芽及转苷酶转苷法生产双歧因子啤酒,产品的理化指标与普通啤酒无较大差异,酒精度较同类普通啤酒低,有开发低醇啤酒的可能。

232以麦芽及转苷酶法生产的双歧因子功能 [J], 汪芳安;潘从道;熊友枝;董佳;赵三红;郑孝平;魏晓辉;胡劲松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

红景天是《中华人民共和国药典（一部）》收录的中药材，为景天科植物大花红景天的干燥根及根茎；具有益气活血、通脉平喘功效，用于气虚血淤、胸痹心痛、中风偏瘫、倦怠气喘等症[1]。

红景天的有效成分包括红景天苷、槲皮素、山萘酚、熊果苷等[2-4]。

熊果苷具有美白、去色斑、杀菌、消炎的作用，现主要用于高级化妆品的制备；因其能去除雀斑和黄褐斑，被称为21世纪理想的美白祛斑活性剂[5-7]。

本研究以红景天中有效成分熊果苷为研究对象，根据熊果苷提取方法的相关文献[8-10]，采用正交试验确定熊果苷的最佳提取方案，并建立高效液相色谱测定熊果苷含量的方法。

该方法对红景天用药质量监控及熊果苷在化妆品和医药领域的开发利用提供了实验依据。

1试剂与仪器红景天药材，经锦州成大方圆药店主任中药师王景清鉴定为正品；熊果苷对照品（批号：120520-201909），中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、乙醇（分析纯）、磷酸二氢钾（分析纯）、磷酸（分析纯），天津市康科德科技有限公司；重蒸馏水，自制。

FL2200高效液相色谱仪，浙江福立分析仪器股份有限公司；ZORBAX SB-C 18色谱柱（4.6mm ×250mm ，5μm ），北京金欧亚科技发展有限公司；KQ-100A 超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司；BP211D 电子分析天平（精度0.00001g ），德国赛多利斯集团；TU-1800紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

2方法与结果2.1色谱条件的选择2.1.1流动相的选择A ：乙腈－0.02mol/L 磷酸二氢钾溶液（二者体积比为22∶78）。

实验结果显示熊果苷峰峰形不佳，拖尾现象严重。

B ：甲醇-水-磷酸-三乙胺（四者体积比为47.0∶52.7∶0.2∶0.1）。

实验结果显示熊果苷峰和前一个峰分离度差。

C ：甲醇-水（二者体积比为65∶35），加磷酸调节pH=3.5。

实验结果显示熊果苷峰保留时间过短，有拖尾现象。

酶法生产α-熊果苷的纯化工艺酶法生产α-熊果苷的纯化工艺主要包括以下几个步骤：1. 酶解反应：将含有α-熊果苷的底物与适当的酶混合，在适宜的温度和pH条件下进行酶解反应。

此步骤可得到粗产物。

2. 分离纯化：采用合适的分离方法，如沉淀、色谱分离等，对粗产物进行分离纯化。

此步骤可得到中间产物。

3. 转化反应：将中间产物与特定的化学试剂进行转化反应，生成目标产物α-熊果苷。

4. 产物纯化：采用合适的纯化方法，如色谱分离、结晶等，对目标产物进行精制纯化。

5. 质量检测：对最终产物进行质量检测，如含量、纯度等指标的测定。

6. 存储：将最终产物存储在干燥、阴凉、通风的地方，避免阳光直射和高温。

在实施该工艺时，需要注意以下几点：1. 底物浓度和酶浓度对酶解反应的影响。

在适宜的范围内，提高底物浓度和酶浓度可以促进反应速度和产量的提高。

2. 温度和pH对酶解反应的影响。

过高或过低的温度和pH都会影响酶的活性和稳定性，因此需要选择适宜的反应条件。

3. 分离纯化方法的选用。

针对不同的粗产物和目标产物，需要选择合适的分离纯化方法，以达到最佳的分离效果。

4. 化学试剂的选用。

在转化反应中，需要选择适当的化学试剂，以保证反应的顺利进行和目标产物的生成。

5. 质量检测方法的选用。

针对不同的目标产物，需要选择合适的质量检测方法，以确保产品质量符合要求。

6. 存储条件的控制。

在存储过程中，需要控制好温度、湿度等条件，以避免产物的变质和损失。

总之，酶法生产α-熊果苷的纯化工艺需要经过多个步骤的实施和控制，才能得到高质量的产品。

同时，对于不同的情况和需求，需要灵活调整工艺参数和方法，以达到最佳的生产效果。

梨花中熊果苷的提取及应用研究梨花中熊果苷的提取及应用研究摘要：熊果苷是一种天然的植物化合物，具有抗氧化、抗炎、神经保护和抗肿瘤等多种生理活性。

本文以梨花为研究对象，通过提取和分离熊果苷，并对其化学特性进行分析和鉴定。

最后，介绍了熊果苷在食品、药物和化妆品等领域的应用前景。

引言梨花作为一种常见的植物，富含丰富的有益物质，被广泛应用于食品和药物制备中。

其中，熊果苷作为一种重要的活性成分，拥有多种生理活性，如抗氧化、抗炎、神经保护和抗肿瘤等。

因此，熊果苷的提取和应用研究对于梨花的综合利用具有重要意义。

一、梨花中熊果苷的提取方法1.1 乙醇提取法将鲜梨花置于乙醇中，反复浸泡和搅拌，待乙醇渗透到梨花细胞中，使得熊果苷溶解于乙醇之中。

然后，通过过滤和浓缩乙醇提取液，得到含有熊果苷的浓缩溶液。

1.2 超声波提取法将梨花样品与适量的溶剂（如甲醇）混合，置于超声波处理器中进行超声波提取。

超声波的作用下，破碎细胞壁，加速熊果苷的溶出。

最后，通过离心和过滤，得到熊果苷的溶液。

二、梨花中熊果苷的化学特性分析和鉴定对梨花中提取的熊果苷溶液进行化学特性分析和鉴定，可以确定其化学结构和性质，为后续的应用提供基础数据。

2.1 紫外-可见吸收光谱分析通过紫外-可见吸收光谱分析，可以测定熊果苷的最大吸收波长和摩尔吸光系数，验证其纯度和稳定性。

2.2 红外光谱分析通过红外光谱分析，可以确定熊果苷中的官能团、键类型和分子结构，进一步验证其纯度和鉴定结果。

2.3 薄层层析分析通过薄层层析分析，可以确定熊果苷在混合溶剂中的运移距离和色谱行为，用于检测和判断熊果苷的含量和纯度。

三、熊果苷的应用前景3.1 食品领域熊果苷具有较强的抗氧化活性，可以延缓食品氧化变质，保持食品的色、香、味和营养成分。

因此，熊果苷可以应用于食品添加剂和保鲜剂中，提高食品的品质和保质期。

3.2 药物领域熊果苷具有抗炎、神经保护和抗肿瘤等作用，对于预防和治疗炎症性疾病、神经系统疾病和肿瘤具有重要意义。

利用黄芩毛状根生物合成熊果苷工艺研究利用黄芩毛状根生物合成熊果苷工艺研究黄芩（Scutellaria baicalensis）是一种传统中药材，其根部含有丰富的黄酮类化合物，尤其是熊果苷（baicalin）这一重要的成分。

熊果苷具有抗炎、抗氧化等多种药理活性，因此在药物研发和临床应用中具有重要的价值。

然而，黄芩的生长速度缓慢，且从根中提取熊果苷的成本较高，限制了其产业化应用的发展。

因此，通过利用黄芩毛状根的生物合成熊果苷工艺进行研究，可以提高熊果苷的产量，并在一定程度上降低成本。

在黄芩毛状根的生物合成熊果苷工艺研究中，首先需要进行毛状根的培养和繁殖。

毛状根是黄芩根部特有的一种根系结构，其形状呈多分叉状，表面生长着细小的根毛。

通过细胞培养和激素处理等方法，可以促进黄芩根部产生毛状根，并通过分离和扩增毛状根，建立一个稳定的毛状根培养体系。

在毛状根培养的基础上，需要进行熊果苷合成的增产研究。

熊果苷的合成过程涉及到一系列关键酶的参与，包括苷酸转移酶、醛酸还原酶等。

通过基因工程技术和酶工程技术，可以提高这些关键酶的表达和活性，从而增加熊果苷的合成速率。

同时，通过调控培养基中激素浓度和营养物质供应等因素，也可以调节熊果苷的合成代谢途径，进一步提高熊果苷的产量。

另外一个关键问题是熊果苷的提取和纯化。

传统的黄芩根提取方法包括水提取和醇提取等，但提取效率较低，且纯化过程中易引起熊果苷的降解和丧失。

因此，需要开发一种高效的熊果苷提取和纯化方法。

目前，超声波提取、微波辅助提取和静电纺丝纳米纤维技术等新型提取技术被广泛应用于药物提取和纯化领域，在熊果苷的提取和纯化中也具有潜在的应用前景。

利用黄芩毛状根生物合成熊果苷工艺的研究，对于提高熊果苷的产量和降低成本具有重要意义。

通过建立毛状根培养体系，挖掘和改造关键酶的作用，以及优化提取和纯化工艺，可以进一步推动黄芩的产业化应用。

此外，该研究也为其他药用植物的生物合成工艺提供了借鉴和启示，促进了传统中药材的现代化开发与利用综上所述，建立一个稳定的毛状根培养体系是进行熊果苷合成增产研究的基础。

熊果苷的制备研究周烽【摘要】：熊果苷(Arbutin)化学名称为对羟基苯-B-D-吡喃葡萄糖苷(p-Hydroxyphenyl-β-D-gl ucopyranoside),最早发现于熊果叶中。

熊果苷最初应用于药物中,有抗菌消炎的作用。

自上世纪80年代,研究发现熊果苷作为酪氨酸酶的竞争抑制剂,能抑制黑素形成过程中关键酶酪氨酸酶的活性,因此有美白的效果。

日本资生堂公司首先将熊果苷应用于美白化妆品中,目前国内外也有多家厂商将熊果苷添加于美白类化妆品中。

熊果苷有很大的市场应用前景。

本文对熊果苷的合成及其检测作了研究,主要内容如下: 1)建立了熊果苷高效薄层色谱(TLC)定性分析方法。

薄层层析硅胶GF254为固定相,乙酸乙酯—甲醇—水(7-2-1,v/v/v)为展开剂,熊果苷和氢醌的R_f值分别为0.56和0.67。

2)建立了化妆品和酶反应体系中熊果苷含量的反相高效液相色谱(HPLC)定量分析方法。

建立了一套有效的萃取膏霜类化妆品中熊果苷的预处理方法,主要采用了氯仿—饱和氯化钠溶液(2:1,v/v)超声振荡萃取。

高效液相色谱条件为固定相Apollo C18分析柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇—磷酸缓冲液(pH6.0)—冰醋酸(10:90: 1,v/v/v),检测波长为254nm。

熊果苷的保留时间为5.2min,氢醌的保留时间为7.9min,达到基线分离。

熊果苷的线性方程为A=175543X+1763.1,r~2=0.9959,线性范围为0.01～1g/L,最小检测限为24ng,加样回收率为96.15%;氢醌的线性方程为A=16772X-3380.8,r~2=0.9957,线性范围为0.01～1g/L,最小检测限为21ng。

3)进行了以NaHCO_3为催化剂利用相转移催化反应合成熊果苷的中间体五乙酰熊果苷的研究。

通过相转移催化剂溴化四丁基铵(TBAB),合成了关键中间产物五乙酰熊果苷,避免使用了昂贵及对环境污染严重的金属盐催化剂。

一种从熊果叶中提取熊果苷的方法我前几天又试了个新方法来从熊果叶中提取熊果苷，这次总算成功了。

说实话从熊果叶中提取熊果苷这事，我一开始也是瞎摸索。

我最开始的时候啊，就想着简单粗暴地处理熊果叶，直接把熊果叶碾碎了就想得到熊果苷，那纯粹是不懂科学的做法，结果当然是啥有用的东西都没得到，全是一堆混着残渣的乱七八糟的东西。

后来我想，那得有点化学的手段才行了吧。

我就开始尝试用溶剂来提取。

我试过好多溶剂啊，酒精、水什么的。

我先把熊果叶切碎，放到酒精里泡着。

就像泡茶一样，想着这样就能把熊果苷泡出来。

泡了挺长时间后，我就开始过滤。

可是发现，这样得到的液体里杂质太多了，可能是熊果叶里其他的成分也被大量溶解出来了。

这种含杂质多的东西肯定不行，我又失败了一轮。

然后我就去查不少资料，学到了一点新东西。

我试着采用更好的比例来混合溶剂。

把熊果叶弄成粉末状，因为粉末不是表面积更大嘛，就像把一颗大石头打碎成很多小石子，接触溶剂的面积就大了。

这次用适量的水和乙醇混合溶液来浸泡熊果粉末，浸泡的时候还得时不时搅拌一下，就像熬粥一样，得让溶质充分在溶液里翻滚。

差不多浸泡了一天一夜后再过滤。

这时候的滤液虽然看起来干净多了，但我知道还是有杂质的。

我就又对这个滤液进行了一些处理。

把它加热让一部分溶剂挥发掉，当溶液变得浓稠的时候就停下来。

我也不太确定这个时候熊果苷的浓度到底有多少，反正药剂这类东西挺难准确判断的。

不过按照我查的一些资料的大概范围来说应该还可以。

然后我就继续搞后面的提纯工作。

我采用了一些简单的化学结晶法，慢慢降温，让熊果苷结晶出来。

但是我一开始降温降得太快了，结果晶体里包着好多杂质，又失败了。

后面我就慢慢总结经验，在结晶的时候控制好降温的速度，小步小步降，最后终于得到了比较纯净的熊果苷晶体。

总之啊，这个从熊果叶提取熊果苷真的不容易，得耐着性子逐步摸索，一点也不能心急。

要是哪个环节马虎了就前功尽弃了，得多尝试不同的比例、处理方法什么的，还得多从每次失败里吸取教训。

发酵法生产α-熊果苷及其分离纯化的开题报告1. 研究背景α-熊果苷是从熊果树的根、茎、叶等部位提取出来的一种天然二苷类化合物，具有多种药理活性，如降血脂、抗氧化、抗炎等作用。

由于其良好的药理作用，因此引起了人们的广泛关注。

目前，α-熊果苷的生产方法主要有体外合成、萃取提取和发酵法。

其中，发酵法是一种更加经济有效的生产方法，已得到了广泛的应用。

2. 研究目的本研究旨在建立一种高效的发酵法生产α-熊果苷的方法，并对其进行分离和纯化。

3. 研究内容本研究包括以下内容：（1）建立适合α-熊果苷生产的菌种筛选方法，选取高效产生α-熊果苷的菌株。

（2）针对选定的菌株，优化其培养条件，如培养基成分、温度、pH值等。

通过研究生物量和α-熊果苷产量的变化，确定最佳发酵条件。

（3）利用色谱等技术对α-熊果苷进行分离和纯化，得到高纯度的α-熊果苷。

4. 研究方法（1）菌种筛选：选取具有高效产生α-熊果苷能力的菌株，通过对多种菌株的培养和分析研究，筛选出最佳菌株。

（2）发酵条件的优化：通过对菌株的培养条件进行优化，确定最佳发酵条件，包括选用合适的培养基、温度、气氛、pH值等。

（3）分离和纯化α-熊果苷：利用柱层析、高效液相色谱等技术，对发酵液中的α-熊果苷进行分离和纯化，获得高纯度的α-熊果苷。

5. 预期结果本研究预计将得到以下结果：（1）选取出最佳的α-熊果苷生产菌株，并确定其最佳发酵条件。

（2）通过分离和纯化技术，得到高纯度的α-熊果苷。

（3）建立一种高效稳定的发酵法生产α-熊果苷的方法。

6. 研究意义本研究将建立一种高效稳定的发酵法生产α-熊果苷的方法，有助于逐步实现α-熊果苷的规模化生产，提高其利用价值。

此外，本研究对于发掘熊果树的药理活性成分、深入研究其药理作用等具有重要的现实意义和应用价值。

熊果苷调研报告一、引言熊果苷，又称为苦荞苷，是从熊果树的干燥果实中提取而来的一种天然化合物。

近年来，熊果苷因其丰富的保健功能而备受关注。

本调研报告旨在对熊果苷进行全面的调查研究，包括其来源、制备技术、应用领域以及市场发展情况等方面进行探讨。

二、熊果苷的来源与制备技术熊果苷主要来源于熊果树，该树分布于我国西南地区的云南、贵州等地。

熊果树的干燥果实中含有丰富的熊果苷，通过提取、精制等工艺，可以得到纯度较高的熊果苷产品。

目前，主要的熊果苷制备技术包括溶剂法提取、超声波提取、微波炉提取等方法。

其中，溶剂法提取是最常见的一种方法，利用有机溶剂对熊果树干燥果实进行提取，然后通过蒸发浓缩、结晶等步骤得到熊果苷产品。

三、熊果苷的保健功能熊果苷具有多种保健功能，被广泛应用于医药、保健品、食品等领域。

熊果苷可以提高机体免疫力，抗氧化，抗炎，对血管有保护作用，具有降血脂、降血糖、抗肿瘤等作用。

此外，熊果苷还具有抗衰老、促进睡眠、改善皮肤等功效，因此备受消费者青睐。

四、熊果苷市场发展情况目前，熊果苷市场呈现出快速增长的趋势。

随着人们健康意识的提高，对天然草本产品的需求不断增加，熊果苷作为一种具有多种保健功效的天然产物，受到了广大消费者的青睐。

熊果苷市场应用最广泛的领域是保健品行业。

大量的研究表明，熊果苷可以调节血脂、血糖，具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤作用，使其在降低慢性疾病风险方面具有很大的潜力。

此外，熊果苷还可以用于食品添加剂，例如可以加入到功能性饮料、保健食品中，提供人体所需的多种营养物质。

在市场竞争日益激烈的背景下，熊果苷企业面临着一系列的挑战。

其中，产品质量的稳定性和提高产能是熊果苷企业需要关注的重点。

此外，熊果苷产品的市场宣传和品牌建设也是企业需要重视的方面。

五、结论熊果苷作为一种天然的保健品成分，具有广泛的应用前景和市场潜力。

通过对熊果苷的来源、制备技术、保健功能和市场发展情况的调查研究，可以帮助企业更好地把握市场机遇，提高产品竞争力。

从梨树叶中提取熊果苷的方法梨树叶是一种常见的中药材，被广泛用于中药制剂和保健品中。

熊果苷是梨树叶中的一种重要成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。

本文将介绍从梨树叶中提取熊果苷的方法。

1.原料采集与处理首先，我们需要采集新鲜健康的梨树叶作为提取原料。

通常在梨树开花后2-3周的时间采集效果较好。

采集后的梨树叶需要立即进行处理，以避免其活性成分的流失。

处理方法包括清洗、晾干和粉碎。

清洗时使用纯净水彻底清洗梨树叶表面的杂质，并确保没有残留农药等有害物质。

晾干后的梨树叶需要完全干燥，常用的方法有自然晾干和烘干。

2.成分提取成分提取是从梨树叶中分离目标化合物的关键步骤。

常用的提取方法有水提法、醇提法和超声波辅助提取法等。

2.1水提法水提法是一种简单、安全的提取方法。

将粉碎后的梨树叶与适量的水加入反应容器中，随后进行水浴加热提取。

提取温度通常在80-100°C之间，提取时间根据需要可以在30分钟到3小时之间。

提取液中的悬浮物可以通过离心或滤纸过滤进行去除。

最后，通过浓缩提取液来得到目标化合物。

2.2醇提法醇提法是常用的提取方法之一、一般使用乙醇、甲醇、乙醚等有机溶剂进行提取。

将梨树叶与适量的有机溶剂混合，通常按照1:5的比例。

随后进行超声波或水浴加热提取，提取时间一般在1-3小时之间。

提取后，用滤纸过滤提取液并去除悬浮物。

然后，通过浓缩提取液得到目标化合物。

2.3超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种高效、快速的提取方法。

将梨树叶与适量的有机溶剂混合，使用超声波仪器进行提取。

超声波振动可以加速提取过程，提取时间通常在5-30分钟之间。

提取液离心或滤纸过滤后，通过浓缩获得目标化合物。

3.提取物的纯化与分离提取物中可能存在其他杂质，需要进行纯化与分离。

纯化与分离的方法包括薄层色谱、柱层析、凝胶过滤等。

3.1薄层色谱薄层色谱是一种简单有效的分离方法。

将提取物溶于合适的溶剂，并将其均匀地涂抹在薄层硅胶或薄层纸上，然后将薄层在合适的溶剂中进行上色。