液相色谱法测定抗菌膜中的肉桂醛和百里香酚
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实验二 液相色谱法测定抗菌膜中的肉桂醛和百里香酚Determination of cinnamaldehyde and thymol in antimicrobial film using liquid chromatography
（实验项目编号：J09020-07）
一．目的（Objective）
1.通过本实验理解高效液相色谱参数的意义及其相互关系。
2.通过本实验掌握高效液相色谱仪的构造及高效液相色谱仪各部件作用。
3.掌握利用高效液相色谱法对实际样品进行分离分析研究的方法。
二、基本原理（Principle）
试样经超声预处理，取液过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
三、仪器与试剂（Equipment and Reagents）
1. 仪器：美国Waters高效液相色谱仪，检测器为双波长紫外可见检测器。
2. 试剂：方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为超纯水，溶液为水溶液。
2.1 乙腈：Merck公司生产，色谱纯。
2.6 肉桂醛和百里香酚标准储备溶液:分别准确称取0.1000 g肉桂醛和百里香酚，无水乙醇溶解，移人100mL容量瓶中，以无水乙醇定容至100 mL，肉桂醛和百里香酚含量为1000 mg/L，作为储备溶液。
逐级稀释至25mL容量瓶中。
四．实验步骤（Procedure）
1. 试样处理
抗菌膜：称取4×4 cm2试样，用剪刀剪碎，放入35 ml棕色试剂瓶中，加入20 ml 70%乙醇水溶液，60℃下超声45 min，取液经有机系滤膜（0.45 μm）过滤。
2．高效液相色谱条件
2.1 色谱柱：Symmetry C18柱（4.6 mm×250 mm）。
2.2 流动相：乙腈：超纯水（60：40）。
2.3 流速：1 mL/min 。
2.4 进样量：10μL 。
2.5 检测器:紫外检测器，275 nm （百里香酚）和288nm （肉桂醛）波长。
根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
五、实验数据及处理（Data and Calculations ）
试样中百里香酚或肉桂醛的含量如下进行计算。
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10001000A X V m V ⨯=⨯⨯ 式中：
X — 试样中肉桂醛和或百里香酚的含量（g/kg ）；
A — 进样体积中肉桂醛和或百里香酚的质量（mg ）；
V 2— 进样体积（mL ）；
V 1— 试样稀释液总体积（mL ）；
M — 试样质量（g ）。
计算结果保留两位有效数字。
