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不同溶剂对豆甾醇富集效果比较
盛漪;谷文英
【期刊名称】《粮食与油脂》
【年(卷),期】2002(000)008
【摘要】溶剂选择性富集法是得到高浓度豆甾醇的常用方法.本文主要比较研究不同溶剂对于豆甾醇的富集效果,并通过实验证明混合溶剂效果最好,四至五次分步结晶后可得到80%豆甾醇.
【总页数】2页(P9-10)
【作者】盛漪;谷文英
【作者单位】江南大学食品学院,无锡,214036;江南大学食品学院,无锡,214036【正文语种】中文
【中图分类】TQ645.9+8
【相关文献】
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第22卷 第4期 西 南 林 学 院 学 报 V o1.22 N o.4 2002年12月 JOURNA L OF S OUTHWEST FORESTRY CO LLEGE Dec.2002 豆甾醇提取纯化工艺研究Ξ朱向东,杨少勇,安银岭(西南林学院资源学院,园林学院,云南昆明650224)摘要:以大豆油脚为原料,用NaOH饱和溶液皂化,用结晶法和层析法提取纯化豆甾醇,经理化数据、光谱测定和标样对照,证明是该化合物.关键词:豆甾醇;大豆油脚;提纯工艺;工厂化生产中图分类号:TS229 文献标识码:A 文章编号:1003-7179(2002)04-0041-02 豆甾醇(stigmasterol)存在于豆科植物大豆[Ct2 lycine Max(L.)Merr.]种子脂肪油中,大豆脂肪油还含有类胡萝素和异黄酮类色素等[1].豆甾醇可作为合成性激素、肾上腺皮质激素(强的松类抗炎风湿药物).甾体避孕药、更年期病治疗药、利尿药、抗肿瘤药、同化激素及催肥激素等多种药物的母体化合物[2,3].甾体激素及甾体避孕药的制造是制药工业中极为重要的内容,全世界约2/3的甾体药物是以中国及墨西哥产的薯蓣皂甙元作起始原料进行生产.近年来,随着新甾体药物的发现、生产的发展、生产规模的扩大、原料需要量也逐渐增加;另一方面由于不合理的采掘,造成资源短缺,植物中皂甙含量下降,使国际市场供需出现矛盾,因此,日本及美国的一些学者进行扩大资源的研究.豆甾醇在大豆中含量较丰富,但这类甾体资源的使用关键是能否使侧链降解,以CrO3氧化、侧链降解可获得17酮基化合物的收率甚低,无实用价值,所以,国外一些学者尝试采用生物转变的方法,使侧链降解,以期大大提高转化率,为豆甾醇的利用提供可靠的方法[3,4].笔者用两种方法从豆油脚中提取纯化分离获得样品,经IR,MS,NMR等光谱数据解析和理化性质分析,并与标准样品对照,参照有关文献证明其与标准样品完全一致为豆甾醇.利用这一工艺,使大豆油脚得到综合利用.1 实验部分111 实验材料油脚来自青岛油脂厂.112 仪器NMR用BRUKER AM—400型仪测定,C DCl3作溶剂,T MS作内标,EI—MS VG Autospec质谱仪测定(70ev);IR用Shamzdu IR—408型仪测定,CS2作溶剂,薄层层析用G F254硅胶板,柱层析用100—200目硅胶,青岛海洋化工厂生产,显微熔点测定仪XRC—1四川大学科仪厂.113 提取与纯化11311 重结晶法 取原料1053g,加250ml95% E tOH溶解,加热回流;用200g NaOH加1000ml H2O,加热溶解,并冷却至室温.滴加NaOH溶液,回流10h,皂化液加10%HCl调至pH7,加乙酸乙酯萃取,萃取液经浓缩,加石油醚溶解,并加水洗涤,出现乳化现象,加饱和NaCl溶液,温度40℃左右,反复洗涤,萃取液经浓缩,得浓缩液20g.浓缩液加MeOH热溶,滤液静置,放置2h后,有结晶析出,晶体加MeOH热溶,冷却静置,得结晶,经T LC检验,10%H2S O4显色,只有一个斑点, Rf值与标样相同,滤液静置,得第2批结晶,经T LC检验,Rf与第一批结晶和标样相同,两批结晶合并,得纯品516g,计算得率0153%.11312 层析法 取原料773g,加200ml无水E tOH,回流,其他步骤同结晶法,得石油醚萃取浓缩液1415g,加石油醚溶解,并加粗硅胶7g拌匀.真空干燥,称取100～200目层析用硅胶干法装柱,用氯仿洗脱,收集洗脱液,经T LC检验,与标准样Rf值相同的合并,并经浓缩、静置,数天后有结晶Ξ收稿日期:2002-07-09 作者简介:朱向东(1965-),男,安徽池州市人,硕士生,主要从事天然产物化学研究.析出,加MeOH 热溶,静置冷却,数小时后有结晶析出,经过滤,得晶体,滤液放置得第2批结晶,经T LC 检验,Rf 值与标样相同,合并结晶,得412g 结晶,计算得率0154%.2 结果与讨论211 鉴定21111 T LC 检验 结晶和标样分别用氯仿溶解,用氯仿作展开剂,10%H 2S O 4显色,两者Rf 值一致.21112 熔点测定 MeOH 作溶液剂,结晶成针状晶体,显微熔点测定仪,m p.170℃,熔点仪未校正.21113 光谱鉴定 EI -MS ,m/z :412(M +72)369(22),300(25),271(100),255(32),246(23),229(15),159(15),119(18),107(32),93(23),91(18),83(28),81(53),69(16).13 C —NMR δ(C DCl 3) C 1361117C 2311606C 3711760C 4421250C 51401720C 61211683C 7311870C 8311606C 9501093C 10361471C 11211051C 12391739C 13421250C 14561730C 15241271C 16291106C 17561018C 18111803C 19191369C 20391739C 21211051C 221381292C 231291230C 24501093C 25311606C 26211051C 27181750C 28241271C 29111951 IR :与文献一致[5,6]分子式C 29H 48O 分子量412stigmasterol(5α-stigmasta -5,22-diene -3β-ol )工艺流程:212 讨论比较两种方法,豆甾醇得率相近,但结晶法简单,不需要复杂设备,简便宜行,原料来源广泛,适合工厂化生产.[参 考 文 献][1] RAPH A L LK AN.A Lab oratory G uid ,2nd[M].New Y ork :A 2cademic Pressine ,1991.[2] 安银岭.植物化学[M].哈尔滨:东北林业大学出版社,1996.[3] 徐任生.天然产物化学[M].北京:科学出版社,1997.[4] 周维善,庄治平.甾体化学进展[M].北京:科学出版社,2002.[5] ME NG S U.ST OTZE N C D[J ].Med Sci.Res.1992,(20):20.[6] 谢晶曦,常俊标,王绪州.红外光谱在有机化学和药物化学中的应用[M].北京:科学出版社,2000.A Study on Technology of Extracting and Purification of StigmasterolZH U X iang -dong ,Y ANG Shao -y ong ,AN Y in -ling(Faculty of Res ources ,Faculty of Landscape Architecture ,S outhwest F orestry C ollege ,K unm ing Y unnan 650224,China )Abstract :T he wastrel of s oy oil is saponified with saturated NaOH s olution.A com pound has been is olated both by crystallization and chromatography.I ts structure has been identified as stigmasterol on basis of physical and chemical con 2stants and IR ,MS ,NMR spectral analysises.Crystallization method is sim ple and suitable for factory produciton.K ey w ords :stigmasterol ;wastrel of s oy oil ;technology of extracting and purification ;production24西 南 林 学 院 学 报 第22卷。
试析大豆油对植物甾醇转化率的影响因素雄甾-4-烯-3，17-二酮（androst-4-ene-3，17-dione，简称AD），是制造甾体激素类药物合成的关键中间物质之一，几乎所有的甾体激素药物都是以AD作为起始原料进行生产的[1]。
目前国内主要从野生中药材“穿地龙”等植物中提取薯蓣皂苷元后经化学合成而成，工艺十分复杂，成本很高，而且污染环境[2]。
微生物降解甾醇的工作开始于20世纪60年代，已发现多种微生物可将植物甾醇侧链选择性的切除得到AD[3]。
微生物法生产AD主要受甾醇在水中溶解度低的限制，甾醇在水中的溶解度低于2mg/L，产物AD在水中的溶解度也不高于50mg/L[4]，甾体化合物的难溶性是限制微生物转化工业化最主要的障碍之一。
传统的单水相发酵多采用添加少量有机溶剂、表面活性剂的方法来提高甾醇在发酵液中的溶解度，效果并不理想，而且有机溶剂等对细胞产生毒性以及对安全、环保等因素影响，从而制约了其在工业化上的应用。
采用大豆油/水双液相发酵系统，可以有效增加甾醇的溶解度，提高底物投料量，而且减少了对细胞的毒性。
本文主要研究了大豆油在发酵液中所占比例，植物甾醇的投料量以及添加表面活性剂对植物甾醇转化率的影响。
一、材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种分枝杆菌Mycobacterium sp-XHL-501（上海新华联制药有限公司菌种室保藏）。
1.1.2 试剂甾醇为进口甾醇，大豆油购于上海良友海狮油脂实业有限公司，吐温80购于上海申宇医药化工有限公司，其他试剂均为国产分析纯。
1.1.3 培养基斜面培养基（g/L）：牛肉膏5；胰蛋白胨10；葡萄糖25；琼脂20，灭菌后pH6.8-7.2。
种子培养基（g/L）：葡萄糖8；玉米浆65；酵母膏4；NaNO3 5；（NH4）2HPO4 0.5，灭菌后pH6.8-7.2。
转化培养基（g/L）：大豆油200；甾醇15；玉米浆65；酵母膏4；NaNO3 5；（NH4）2HPO4 0.5，吐温80 1.5，灭菌后pH6.8-7.2。
在有机化学实验中，经常使用各类溶剂作为反应介质或用来分离提纯粗产物。
由于反应的特点和物质的性质不同，对溶剂规格的要求也不相同。
有些反应(如格氏试剂的制备反应)对溶剂的要求较高，即使微量杂质或水分的存在，也会影响实验的正常进行。
这种情况下，就需对溶剂进行纯化处理，以满足实验的正常要求。
这里介绍几种实验室中常用的有机溶剂的纯化方法。
1．无水乙醚市售乙醚中常含有微量水、乙醇和其他杂质，不能满足无水实验的要求。
可用下述方法进行处理，制得无水乙醚。
在250mL干燥的圆底烧瓶中，加入100mL乙醚和几粒沸石，装上回流冷凝管。
将盛有10mL浓硫酸的滴液漏斗通过带有侧口的橡胶塞安装在冷凝管上端接通冷凝水后，将浓硫酸缓慢滴入乙醚中，由于吸水作用产生热，乙醚会自行沸腾。
当乙醚停止沸腾后，拆除回流冷凝管，补加沸石后，改成蒸馏装置，用干燥的锥形瓶作接收器。
在接液管的支管上安装一支盛有无水氯化钙的干燥管，干燥管的另一端连接橡胶管，将逸出的乙醚蒸气导入水槽中。
用事先准备好的热水浴加热蒸馏，收集34．5℃馏分70～80mL，停止蒸馏。
烧瓶内所剩残液倒入指定的回收瓶中(切不可向残液中加水!)。
向盛有乙醚的锥形瓶中加入1g钠丝，然后用带有氯化钙干燥管的塞子塞上，以防止潮气侵入并可使产生的气体逸出。
放置24h，使乙醚中残存的痕量水和乙醇转化为氢氧化钠和乙醇钠。
如发现金属钠表面已全部发生作用，则需补加少量钠丝，放置至无气泡产生，金属钠表面完好，即可满足使用要求。
2．绝对乙醇市售的无水乙醇一般只能达到99．5％的纯度，而许多反应中需要使用纯度更高的绝对乙醇，可按下法制取。
在250mL干燥的圆底烧瓶中，加入0．6g干燥纯净的镁丝和10mL99．5％的乙醇，安装回流冷凝管，冷凝管上口附加一支无水氯化钙干燥管。
在沸水浴上加热至微沸，移去热源，立刻加入几粒碘(注意此时不要振荡)，可见随即在碘粒附近发生反应，若反应较慢，可稍加热，若不见反应发生，可补加几粒碘。
2023版药典溶剂内控质量标准1. 引言本文档提供了2023版药典溶剂内控质量标准，旨在确保药物生产过程中使用的溶剂的质量和安全性，以提高药物的质量和有效性。
2. 质量要求2.1 纯度溶剂的纯度是保证药物质量的关键因素之一。
溶剂应符合以下标准：- 溶剂的纯度不低于98%。
- 溶剂的气味和外观应正常，不应有明显的异味或混浊。
2.2 pH值溶剂的pH值对药物稳定性和有效性起着重要的影响。
溶剂的pH值应符合以下标准：- pH值应在5.0至8.0之间。
2.3 水含量溶剂中的水含量应符合以下标准：- 溶剂中的水含量不应超过0.5%。
2.4 杂质溶剂中的杂质对药物的质量和安全性具有重要影响。
溶剂的杂质应符合以下标准：- 溶剂中的有机杂质不应超过0.1%。
- 溶剂中的无机杂质不应超过0.05%。
3. 检测方法为了确保溶剂的质量符合上述要求，可以使用以下检测方法：- 纯度的检测可以使用高效液相色谱法（HPLC）或气相色谱法（GC）。
- pH值的检测可以使用pH计进行测量。
- 水含量的检测可以使用千分秤法或卡尔费舍法。
- 杂质的检测可以使用紫外可见光谱法（UV-VIS）或原子吸收光谱法（AAS）。
4. 内控措施为了确保溶剂内控质量的一致性，以下措施可以采取：- 定期对溶剂进行质量检测，确保质量标准符合要求。
- 建立标准操作规程（SOP），确保生产过程中遵守相应的质量标准。
- 建立质量管理系统，包括记录溶剂的批号、生产日期、有效期等信息，以便追溯和管理。
5. 结论本文档提供了2023版药典溶剂内控质量标准，涵盖了纯度、pH值、水含量和杂质等质量要求。
使用合适的检测方法和内控措施，可以确保溶剂的质量和安全性，从而提高药物的质量和有效性。
质量管理人员应按照本文档要求进行操作，并进行相应的质量检测和记录，以确保溶剂的质量符合标准。
以上为2023版药典溶剂内控质量标准，供参考使用。
