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金虎退黄汤干预大鼠急性胆汁淤积肝损伤实验研究

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.硏究.Drug Research China Pharmaceuticals 2018年9月5日第27卷第17期Vol. 27, No. 17, September 5, 2018•实验研究•doi: 10. 3969/j. issn. 1006 -4931. 2018. 17. 005金虎退黄汤干预大鼠急性胆汁淤积肝损伤实验研究*何瑾瑜，董璐△，杨跃青，薛敬东(陕西省中医医院，陕西西安710003)摘要：目的探讨金虎退黄汤对a-萘异硫氰酸酯（ANIT)诱导的大鼠急性肝内胆汁淤积的干预作用及作用机制。

方法将21只S D大鼠 随机分为空白组、模型组、实验组，每组7只，按规定时间点进行造模、给药。

末次造模后48 h,检测大鼠血清中总胆红素牗Bil)、直接胆红素（D B il)、总胆汁酸牗B A)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶（GGT)、碱性磷酸酶(ALP)含量。

取 血后，处死大鼠，摘取心、肝、脾、肺、肾，称定质量，计算脏器指数；肝组织做组织切片H E染色，光镜观察肝组织病理变化。

结果各组大鼠体质量虽缓慢增加，但变化无明显差异（P > 0. 05);实验组血液生化指标TBil，DBS，TBA，AST，ALP下降明显（P < 0. 05)，病理组织切片改善较显著，但ALT和GGT下降不明显（P> 0.05)。

结论金虎退黄汤对胆汁淤积性肝损伤大鼠具有显著的退黄、降酶、修复肝细胞损伤作用，可能通过抑制炎性反应及肝细胞坏死发挥作用。

关键词-萘异硫氰酸酯;胆汁淤积性肝损伤；金虎退黄汤；黄疸；大鼠中图分类号：R285. 5; R256. 41 文献标识码：A 文章编号：1006 - 4931牗018) 17 - 0018 - 03Effect of Jinhu Tuihuang Decoction on Liver Injury Induced by Acute Cholestasis in RatsHe Jinyu, Dong Lu, Yang Yueqing，Xue Jingdong(Shaanxi Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Xi’ an, Shaanxi, China 710003)Abstract：Objective To investigate the intervention effect of Jinhu Tuihuang Decoction on acute intrahepatic cholestasis induced by a - Naphthylisothiocyanate(ANIT) in rats and its mechanism. Methods Totally 21 SD rats were randomly divided into the blank group, model group and experimental group, 7 rats in each group, the rats were modeled and administrated according to the prescribed time points. 48 h after the last modeling, the levels of serum TBil, DBil, TBA, ALT, AST, GGT, ALP were detected. After taking blood, the rats were sacrificed, and the heart, liver, spleen, lung and kidney were taken out and weighed ,the visceral indexes were measured ,the liver tissue was stained by HE and the pathological changes of liver tissues were observed by light microscope. Results The body weight of rats in e ach group increased slowly but there was no significant difference (P > 0. 05) . The decrease of blood biochemical indexes (TBil, DBil, TBA, AST and ALP) and the improvement of pathological section in the experimental group were obvious( P < 0. 05), while the decrease of ALT and GGT in the experimental group was not obvious (P > 0.05). Conclusion Jinhu Tuihuang Decoction has significant effects on removing jaundice, reducing enzyme and repairing hepatocyte injury in rats with cholestatic liver injury induced by acute cholestasis, which may play a role by inhibiting inflammatory reaction and hepatocyte necrosis.Key words： a - Naphthylisothiocyanate; liver injury induced by cholestasis; Jinhu Tuihuang Decoction; jaundice; rats胆汁淤积性肝病是指各种原因引起的胆汁形成、分 泌和(或)胆汁排泄异常所致肝脏病变，最常见的临床表 现及体征为黄疸，同时常伴有一定程度的皮肤瘙痒、乏 力等症状犤_2],生化异常主要是碱性磷酸酶(ALP)、谷氨 酰转肽酶(GGT)及血总胆红素（Bil)升高[3]。

按照病因 可分为肝细胞性胆汁淤积、胆管性胆汁淤积及混合性胆 汁淤积[4]。

目前，推荐只需符合生化指标ALP高于1.5倍 正常上限值(ULN),且GGT高于3倍ULN,便可确诊[5]。

中医学对胆汁淤积性肝病并无认识，中医典籍里也无专 门记载，很难将其归于某证，专家多认为应归属“黄疸 病”范畴[6]。

金虎退黄汤是陕西省名中医薛敬东主任根 据多年治疗胆汁淤积性肝病的临床经验方，以整体观念为指导，并运用中医辨证论治的思想总结而得。

湿邪阻 滞、瘀血内结是导致该病最基本的中医病因病机，病 位可涉及肝、脾、肾、胆、胃等，病性多属虚实夹杂，临床 表现为“湿-瘀-虚”的演变过程，但以湿邪、瘀血贯穿 疾病始终。

应以利湿退黄、活血化瘀为基本治疗原则，自拟方以此选择特异性中药遣药组方，临床疗效显著。

本 研究中探讨了自拟方金虎退黄汤对a-萘异硫氰酸酯 (ANIT)诱导的急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠的干预 作用及作用机制。

现报道如下。

1 仪器、试药与动物1.1 仪器7170型全自动生化分析仪（日立公司）BP61型电*基金项目：017年度陕西省重点研发计划项目犤0177F -33/]。

第一作者：何瑾瑜，女，硕士研究生，主治医师，研究方向为中医内科学，（电子信箱）cs25010@126. com。

△通信作者：董璐，女，硕士研究生，主治医师，研究方向为中医内科学，（电子信箱）1053577321@qq. com。

182018年9月5日第27卷第17期Vol. 27, No. 17, September5, 2018.硏究.Drug Research China Pharmaceuticals子分析天平（万分之一，德国赛多利斯公司）；Axioskop 40型光学显微镜（我院病理科提供）；NU-6832E型低 温冰箱(天肯贸易有限公司）。

1.2 试药ANIT(纯度98% ,上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；橄榄油(上海佳格食品有限公司）;桃仁PraniM per-sica L.Batsch,红花 Cart/ia服m timSoriiw L..金钱草 Lysi-mac/iia c/iripinaeHance,桂枝 CimiamomMmcawsiaPresl,虎杖 Polygonumcuspidatum Sieb el Zucc，栀子 Gardenia j'am ioies Ellis购自北京同仁堂西大街店，盘龙七 flempeya panionzi购自西安市药材市场，均由张瑞霞 主任医师鉴定为正品；生理盐水(西安京西双鹤药业有 限公司，批号为051005122); 10%水合氯醛（陕西中医 学院附属医院制剂中心，批号为20040420);金虎退黄 汤组方由薛敬东主任医师提供，药物由陕西省中医医院 制剂室制备。

1.3 动物SPF级健康雄性SD大鼠,4 ~5周龄,体质量130 ~ 180 g,共21只。

由西安交通大学医学院实验动物中心 提供，生产许可证号为SCXK(陕)2013 -003。

2 方法与结果2.1方法药液制备:将ANIT溶于橄榄油中，配成质量分数 为1.6%的ANIT橄榄油溶液。

按照1/2处方量称取药 材，分别按照8倍、6倍、4倍量加水煎煮3次，合并水煎 液，浓缩,得质量浓度为1g/mL的处方提取液。

因实验 周期较长,处方提取液每周制备1次，于4 °C冷藏保存，用前自然晾至室温,备用。

实验方法:将21只健康SD大鼠随机分为空白组、模型组、实验组，各7只，ANIT橄榄油量造模剂量为 80 mg/kg。

处方提取液成人给药剂量为110 g/d,按体 表面积折合成的大鼠给药量为9.9 g/kg。

造模前，大鼠 禁食过夜,造模后2 h给药。

于0,7,14,21 d时空白组给 予橄榄油（5 mL/kg),模型组给予ANIT橄榄油（剂量 为80 mg/kg),实验组给予ANIT橄榄油（80 mg/kg)造模+处方提取液(9.9 g/kg)。

期间，每天称体质量，实 验组每天给药1次;23 d时，空白组和模型组取血+摘 取各脏器称质量，实验组给药2 h后取血+摘取各器官 称质量。

实验期间，每天观察各组大鼠的一般状况，包括 毛色、活动、饮水等，每天称体质量，记录其变化。

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黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究

黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究

黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究【摘要】目的观察黄连解毒汤对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用及中药的量效关系。

方法 32只SD大鼠，雌雄各半，随机分为正常组，模型组，黄连解毒汤低剂组，高剂组；除空白组外，其余各组均以1000 mg/kg D-Galn腹腔注射造模，空白组则以等量NS腹腔注射；造模后立即对中药组给予相应浓度中药10ml/kg灌胃，每日一次，余组则以等量NS灌胃。

染毒24h后，股动脉取血，测血清ALT，AST，并解剖肝脏，光镜下观察其病理变化，操作同前。

结果模型组与正常组相比，模型组ALT、AST活性明显增高；治疗组与模型组相比，治疗组转氨酶活性降低，差异有统计学意义（均p＜0.05）；两治疗组间相比，转氨酶活性差异无统计学意义。

肝脏病理组织学检查显示，治疗组肝细胞坏死及炎细胞浸润程度均较模型组减轻。

结论对1000mg/kgD-Galn诱导的大鼠急性肝损伤，黄连解毒汤干预24h后，有一定的治疗作用。

【关键词】黄连解毒汤急性肝损伤 D-氨基半乳糖胺量效关系黄连解毒汤方出自《肘后备急方》，名见《外台秘要》，由黄芩、黄连、黄柏、栀子四药组成，有清热燥湿、泻火解毒的功效，主治三焦火毒证，尤其对热毒炽盛证型的急性肝炎，有一定的临床效果[1]。

有学者已对该复方进行了研究[2]，但为预防性研究，与临床实际应用有一定的差距。

本实验重点观察该方对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 药物：D-氨基半乳糖（D-galactosanine， D-Galn）由sigma公司提供，批号7499531，黄连解毒汤的四味药材为中药免煎剂型，购自成都中医药大学附属医院中药房，各药物的剂量比遵守《肘后备急方》原方比例，以蒸馏水煮沸冲为不同浓度的中药汤剂，其中低剂量组 (T1组) 浓度为0.49g/ml，高剂量组（T2组）浓度为0.99g/ml。

1.1.2 动物：清洁级SD大鼠32只，体重200±20g，雌雄各半，由四川大学华西动物实验中心提供，饲养于成都中医药大学附属医院病理生理实验动物中心，自然明暗周期，室温21～23℃。

大鼠急性肝损伤(肝郁脾虚证)病证结合模型的研究

大鼠急性肝损伤(肝郁脾虚证)病证结合模型的研究

大鼠急性肝损伤（肝郁脾虚证）病证结合模型的研究建立適宜于抗急性肝损伤（肝郁脾虚证）中药复方活性发现、药效评价和新药研发的方证相应动物模型。

依照中医病因病机演变规律和现代病理机制研究，抽提适宜于急性肝损伤（肝郁脾虚证）大鼠动物模型评价的证候、确定积分，根据药证相符原则选定逍遥丸和水飞蓟宾葡甲胺片为模型反证药物，大鼠每天腹腔注射猪血清，并按分组给予不同配比高脂低蛋白饲料及食用乙醇进行诱导；共7 d。

实验期间每日观察大鼠的体重、食量、饮水量及一般观察并对其进行中医证候积分，实验结束检测大鼠血清ALT，AST，PA，TBIL，TBA等肝功能指标的水平，检查肝组织病理学变化。

在造模1周后，各模型组的大鼠均达到明显急性肝损伤程度，且大鼠主证、次证均符合肝郁脾虚证的证候表现。

与正常对照组比较，血清ALT和AST活性升高，TBIL和TBA含量升高，PA含量降低；肝组织病理形态学检查显示各模型组的大鼠均出现炎细胞浸润、嗜酸性变或嗜酸性脂肪变，反证药物组可不同程度改善上述病变表现。

腹腔注射猪血清+高脂低蛋白饲料（895%玉米粉、10%猪油、05%胆固醇）+10%食用乙醇连续造模7 d，经药物反证，可建立拟临床肝郁脾虚证的急性肝损伤大鼠模型，具有成模耗时短、死亡率低、动物状态与临床患者证候表现相近等特点，可适用于抗急性肝损伤（肝郁脾虚证）中药复方活性发现、药效评价、新药研发和临床方证相关性研究与机制探讨。

标签：急性肝损伤；肝郁脾虚证；病证结合；大鼠；动物模型Research on rat models of acute liver injury with syndrome ofliver depression and spleen deficiencyHUANG Nana1，2，SUN Xiaoqian2，YANG Qian3，LI Xiaoyu1，SUN Rong1*（1 Shandong Academy of Chinese Medicine，Ji′nan 250014，China；2 Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Ji′nan 250355，China；3 Rizhao City Hospital of Traditional Chinese Medicine，Rizhao 276800，China）[Abstract]This paper aimed to establish animal models which are suitable for the activity found，efficacy evaluation of herbs resistant to acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency and new drug research and development based on corresponding of formula and syndrome The symptoms that are suitable for evaluating the rat models of acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency were extracted according to the evolution rule of theetiology and pathogenesis in traditional Chinese medicine and the modern pathological mechanism Xiaoyao pill and silibin meglumine tablets were used as drug counter evidence for models in accordence with the principle of consistence of prescription and syndrome Rats model were fed with highlipid and lowprotein fodder of different proportion and induced by intraperitoneal injection with pig serum，intragastric administration with edible alcohol once a day for 7 days Daily record of body weight，daily food intake and daily water intake were conducted day after day in experimental session Symptoms were also observed and evaluated by score at the same time The contents of ALT，AST，PA，TBIL and TBA in serum were detected and histopathological changes of liver were checked at the ending of experiment Obvious acute liver injury occurred to all rats in model groups at 1 week following model induction Both main symptoms and secondary symptoms were consistent with syndrome manifestation of liver depression and spleen deficiency Compared with normal control group，the activity of ALT，AST and contents of TBIL，TBA in serum increased and the content of PA decreased Liver tissue pathological morphology showed inflammatory cells infiltration，eosinophilic or eosinophilic adipose change in hepatocytes of rats in model groups All the above lesions manifestation could be improved by drug counterevidence By the disproof of medicine，rat models of acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency could be induced by fed with highlipid and lowprotein fodder which contained 895% cornstarch，10% lard and 05% cholesterol，intraperitoneal injected with pig serum，intragastric administrated with edible alcohol for 7 days The rat models with a low mortality could be induced in a short time and animal status were similar to syndrome performance of patients So the rats models are suitable for the activity found，efficacy evaluation and drug discovery of herbs resistant to acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency，and also can be used in the research of correlation between prescription and syndrome and its mechanism[Key words]acute liver injury；liver depression and spleen deficiency；combination of disease and syndrome；rat；animal modeldoi：10.4268/cjcmm20162318急性肝损伤主要是由病毒感染、药物服用不当、过量饮酒、高脂饮食因素造成的急性肝功能异常为代表的疾病。

大鼠供肝热缺血损伤诱发肝移植术后胆汁淤积的实验研究的开题报告

大鼠供肝热缺血损伤诱发肝移植术后胆汁淤积的实验研究的开题报告

大鼠供肝热缺血损伤诱发肝移植术后胆汁淤积的实验研究的开
题报告
一、研究背景
肝移植是治疗终末期肝病的有效手段，但肝移植后胆汁淤积是常见并发症之一，影响肝移植的预后。

一般认为胆汁淤积与移植肝排泄功能障碍有关，但具体机制尚不明确。

动物模型可以模拟肝移植的病理生理情况，并探究其发生机制。

二、研究目的
本研究旨在通过大鼠供肝热缺血损伤模型诱导肝移植术后胆汁淤积，并探究其发生机制，为肝移植后胆汁淤积的预防和治疗提供实验依据。

三、研究内容和方法
1. 建立大鼠供肝热缺血损伤模型。

2. 分为两组，实验组进行肝移植手术并给予缺血再灌注造成肝损伤，对照组仅进行肝缺血再灌注手术。

3. 术后24小时、48小时、72小时以及7天，采集各组大鼠的肝、胆管、胆汁等组织及液样本。

4. 采用HE染色观察肝脏病理变化情况，采用ELISA检测胆汁中胆固醇、胆红素、碱性磷酸酶等指标含量，以探究肝移植
术后胆汁淤积的发生机制。

四、预期结果
1. 成功建立大鼠供肝热缺血损伤模型，模拟肝移植术后肝损伤情况。

2. 肝移植术后实验组胆汁淤积明显，胆汁中胆固醇、胆红素、碱性磷酸酶等指标含量升高，与对照组相比差异显著。

3. 对比两组大鼠肝脏组织病理变化，分析肝移植术后胆汁淤积的发生机制。

五、意义与创新
本研究有助于深入探究肝移植术后胆汁淤积的发生机制，为其预防和治疗提供实验依据，具有一定的临床应用价值。

同时，本研究将建立大鼠供肝热缺血损伤模型，为后续相关研究提供基础。

急性肝衰竭大鼠胃肠动力变化及大黄干预治疗研究的开题报告

急性肝衰竭大鼠胃肠动力变化及大黄干预治疗研究的开题报告

急性肝衰竭大鼠胃肠动力变化及大黄干预治疗研究的开题报告一、研究背景急性肝衰竭是指在短时间内肝功能严重受损，导致肝细胞坏死、肝细胞失去功能，造成凝血障碍、脑功能障碍等严重后果的病情。

近年来，由于药物中毒、病毒性肝炎等原因引起的急性肝衰竭的发病率呈上升趋势，给医学界带来了巨大的挑战。

目前，临床上针对急性肝衰竭的治疗方法主要包括支持性治疗、肝移植等，但疗效有限，且肝移植手术的高风险和高成本使其并不适用于所有患者。

因此，探索更有效、更安全的治疗方法对急性肝衰竭的治疗具有重要意义。

大黄是一种常用的中草药，具有泻下通便、清热解毒等作用。

研究表明，大黄的活性成分大黄素能够抑制肝细胞坏死、改善肝脏功能，对肝损伤的治疗起到积极作用。

因此，我们希望通过本次研究，探究大黄对急性肝衰竭大鼠胃肠动力变化的影响，为大黄在急性肝衰竭的治疗中的应用提供科学依据。

二、研究目的和意义本研究的主要目的是通过建立急性肝衰竭大鼠模型，观察其胃肠动力变化，验证大黄的治疗效果，并探究其可能的作用机制。

本研究的意义在于：1. 为急性肝衰竭的治疗提供更有效、更安全的方法。

2. 探索大黄的作用机制，为深入研究急性肝衰竭的发病机制提供重要数据。

3. 为扩大大黄在肝病领域的应用提供科学依据。

三、研究内容和方法本研究将采用实验室动物模型，建立急性肝衰竭大鼠模型。

通过观察大鼠胃肠道平滑肌收缩情况和排便状况，评估大鼠胃肠道动力学变化情况，并对大黄的治疗效果进行观察和评估。

具体流程如下：1. 采购建模所需的实验用大鼠，按照实验室动物使用规范进行动物饲养和管理。

2. 大鼠急性肝衰竭模型的建立。

在饮食、饮水等方面管控大鼠的最佳状态，用去除受体鸟氨酸+二氢叶酸的方法诱导大鼠急性肝衰竭。

3. 大鼠胃肠道动力学变化的观察。

在进行大黄干预治疗前后，采用胃肠道动力学、排便状态评估和胃肠道解剖检测等方法，评估大黄治疗效果以及相关作用机制。

4. 数据统计与分析。

对研究结果进行统计和分析，并进行可视化处理。