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基因工程第三章克隆载体-1汇总讲解

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第三章 克隆载体的特征及类型

第三章 克隆载体的特征及类型

质粒
质粒DNA的分离纯化
氯化铯密度梯度离心法： 用含有EDTA的缓冲液悬浮菌体 加溶菌酶裂解细菌细胞壁 加CsCl和溴乙锭 超速离心过夜 在紫外灯下吸取cccDNA 稀释沉淀cccDNA RNAs ocDNA L-DNA proteins
质粒
重要的大肠杆菌质粒载体
pGEM-3Z： 多拷贝 装有多克隆位点（MCS） 正选择颜色标记 lacZ’ 装有两个噬菌体的强启动子 用于外源基因的高效表达
ori Apr
pGEM-3E 2743 bp lacZ’
PT7
MCS
PSP6
注意：T7和SP6启动子特异性地由噬菌体DNA编码的RNA聚合 酶所识别，因此相应的受体菌必须表达噬菌体RNA聚合酶，如： E.coli BL21（DE3）等
质粒
质粒的基本特征
质粒的自主复制性：拷贝数的控制机制 – 质粒DNA复制启动控制 控制复制引物与模板的结合
RNA II
3’ 5’
复制方向
5’ 3’
ori
RNA I
rop
（+） Rop
E.coli ColE1 plasmid
RNAII是复制的正向调节分子，RNAI是复制的负调节物
质粒
质粒的基本特征
在重组的 pGEM3Z载体中 加入相应的RNA 聚合酶，可以 发生外源基因 转录。
质粒
质粒DNA的分离纯化
实验室一般使用下列三种方法制备质粒DNA： 氯化铯密度梯度离心法
质粒DNA纯度高、周期长、设备要求高、溴乙锭污染
沸水浴法
质粒DNA纯度底、快速、操作简便
碱溶法 质粒DNA纯度、操作周期介于氯化铯法和碱溶法之间
拷贝数控制系统的干扰，致使两种质粒的最终拷贝数不同，

第三章 基因克隆的载体

第三章 基因克隆的载体

没有获得载体的寄主细胞 在Amp或Tet中都死亡。
获得载体的寄主细胞 在Amp或Tet其中之一中死亡。
外源基因BamH I Amp中存活 但在Tet中死亡
外源基因Pst I Tet中存活 但在Amp中死亡
② 分子小，克隆能力大 载体越小越好。 >10kb的DNA在纯化过程中容易断裂。
③ 高拷贝数
2. 质粒载体相关知识介绍
（4）pBluescript SK
pBluescript SK is similar to the pGEM vectors except that it also carries an origin of replication for a filamentous phage, f1. f1 uses a single stranded DNA molecule as a genome and pBluescript KS
表达型质粒载体
装有强化外源基因表达的转录、翻译、纯 化的元件，主要用来使外源基因表达出 蛋白质产物。
注意启动子的性质，终止子、起始 密码、终止密码的阅读正确。 如果在大肠杆菌里表达，必须把所克隆 的真核生物的基因臵于大肠杆菌的转 录—翻译信号控制之下。
① 表达载体的结构
1）普通载体元件 复制起始点ORI、 选择标记、 多克隆位点MCS
1.质粒的生物学特性
（4）质粒的复制类型 一种质粒在宿主细胞中存
在的数目称为该质粒的拷贝数。据拷贝数将质粒分为 两种复制型：“严紧型”质粒（stigent plasmid）, 拷贝数为1-3；“松弛型”质粒（relaxed plasmid）, 拷贝数为10-60。不过，即使是同一质粒，其拷贝数在 不同的寄主细胞间也可能有很大的变化。

基因工程原理第3章基因克隆载体[可修改版ppt]

基因工程原理第3章基因克隆载体[可修改版ppt]
融合蛋白质克隆载体克隆外源基因示意图
表达融合体蛋白质策略的优点：
（1）克隆的外源基因能有效 转译。 （2）表达的蛋白质稳定。 （3）可以加入信号肽，定位 输送蛋白质。 （4）利于分离纯化。
非融合蛋白表达载体：
二、噬菌体克隆载体
λ DNA： ——在噬菌体中是线状DNA分子，进入寄主细胞后呈环 状DNA分子。 ——长48kb。 ——左右两端各有12bp组成的彼此完全互补的粘性末端。 形成cos位点。 ——包括61个基因，其中1/2参与了噬菌体生命周期， 是必要基因，另1/2属于不必要基因，用于基因工程操 作。
不含对受体有害基因不任意转入其它细胞尤其是人体细胞第一节克隆载体的一般特征一细菌质粒载体第二节原核生物基因克隆载体细菌质粒载体是以细菌质粒dna分子为基础构建的克隆载体主克隆载体
• DNA重组（限制性内切酶） • 运输工具——基因克隆载体 • 目的基因的制备 • 目的基因导入受体细胞 • 外源基因的表达 • 基因工程的应用
的成熟有关（占20%）
4.λ噬菌体DNA的包装限制问题
包装能力： λDNA×75%——λDNA ×105%， 即从36kb——51kb
• 野生型λDNA的必要区是28kb，所以能加入的外源DNA长度最大为 51kb-28kb=23kb。实际为15kb。
• 若λ基因组缺失大于25%时，也不能有效包装。
pBR322
（6524bp)
λDNA：cos序列和控制包装序列
pBR322
质粒的复制子 抗药性基因 多克隆位点区
克隆能力：31—45kb
（二） Cosmid载体的应用程序
应用柯斯质粒载体，在大肠 杆菌细胞中克隆大片段的真 核基因组DNA技术，叫做柯 斯克隆（cosmid cloning）。

第三章 第一节 基因工程（基因表达载体的构建）

第三章 第一节 基因工程（基因表达载体的构建）

4．为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C （图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。下列 操作与实验目的不符的是（ C ）
A．用限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ和连接酶构建重组质粒 B．用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞 C．在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞 D．用DNA分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上
三、目的基因及其表达产物的检测鉴定
1．检测与鉴定的内容、方法
阅读教材98~99页的内容，根据表格提示的项目填写表格中缺 少的内容。
检测水平
分子水 DNA 平的检 RNA
测 蛋白质 个体水平的检测
检测内容
方法
结果显示
1．检测与鉴定的内容、方法
检测水平
检测内容
方法
结果显示
检测转基因生物的染色体 DNA分子杂交法（基因探针
3．对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全 能性高，而高度分化的动物体细胞的全能性受到限制。
4．大肠杆菌和酵母菌在基因工程中都可以作为受体细胞，但 又有所不同。大肠杆菌为原核生物，而酵母菌为真核生物（具有 多种细胞器），所以酵母菌在用于生产需要加工和分泌的蛋白质 时比大肠杆菌有优势。 有内质网和高尔基体
2．病毒感染法 用病毒DNA与目的基因一起构建的载体，去感染受体动物细胞， 也能使目的基因导入动物细胞内。
（三）将目的基因导入微生物细胞 1．感受态细胞 经过适当的处理（如用Ca2+处理）后，细胞质膜对DNA的通透性会
发生改变，细胞变得容易接受外来的DNA，处于这种状态的细胞称为 感受态细胞。
2．过程
Ca2+处理微生物细胞
感受态细胞

三四章分子克隆载体---答案_完_

三四章分子克隆载体---答案_完_

三四章分⼦克隆载体---答案_完_第三章分⼦克隆载体（Molecular cloning vectors）⼀、名词解析1.质粒：质粒是染⾊体外的遗传因⼦，能进⾏⾃我复制（但依赖于宿主编码的酶和蛋⽩质）；⼤多数为超螺旋的双链共价闭合环状DNA分⼦（covalently closed circle , cccDNA），少数为线性；⼤⼩⼀般为1～200Kb，有的更⼤。

2.质粒拷贝数：质粒拷贝数(plasmid copy numbers)是指细胞中单⼀质粒的份数同染⾊体数之⽐值,常⽤质粒数/每染⾊体来表⽰。

不同的质粒在宿主细胞中的拷贝数不同。

3.质粒的不相容性：两个质粒在同⼀宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第⼆个质粒导⼊后，在不涉及DNA 限制系统时出现的现象。

不相容的质粒⼀般都利⽤同⼀复制系统，从⽽导致不能共存于同⼀宿主中。

4.质粒的转移性：质粒具转移性。

它是指在⾃然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作⽤转移到新宿主内。

它需要移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因⼦ bom 及其内部的转移缺⼝位点 nic。

5.穿梭质粒：既能在真核细胞中繁殖⼜能在原核细胞中繁殖的载体。

这类载体必须既有细菌的复制原点或质粒的复制原点，⼜含有真核⽣物的复制原点，还具备酶切位点和合适的筛选指标。

它⽤来转化细菌，⼜可以⽤于转化真核细胞。

6.α-互补：α-互补是指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β -galactosidase ，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。

α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补⽽建⽴的7.温和噬菌体：既能进⼊溶菌⽣命周期⼜能进⼊溶源⽣命周期的噬菌体。

8.溶源性细菌：具有⼀套完整的噬菌体基因组的细菌叫溶源性细菌。

9.整合：如果噬菌体的DNA是被包容在寄主细菌染⾊体DNA中，便叫做已整合的噬菌体DNA。

基因工程-3.1载体

基因工程-3.1载体

非整合型质粒
所有的质粒都至少含有一段可作为复制起点 的DNA序列， 因此能够在细胞内独立于宿主细胞本身的复 制周期而实现扩增[图2-3(a)]。
小一些的质粒可以利用宿主细胞本身的DNA 复制酶来对自身进行拷贝，而一些较大的 质粒本身携带有能够编码自身质粒复制所 需的专一性酶的基因。
整合型质粒或游离型质粒(episome)
前噬菌体被从宿主细胞切除后，大量新λ 噬菌体DNA 分子通过滚环复制模式被复制出来。形成一个包含 一系列线形基因组的连环体，由COS位点连接在一起。 该内切核酸酶是λ DNA中基因A的表达产物，能够切开 双链DNA分子并形成单链的黏末端，并与其他一些蛋 白相耦联，在将每个λ 基因组包裹入一个噬菌体头 部的过程中发挥作用。
1. 基因组小于10kb：
对一个载体来说恰好处于令人满意的范围。 2. M13基因组的复制型： 非常像质粒，实验时也能够像质粒一样被处理。 3. M13基因组容易从大肠杆菌培养中获得，也能够 通过转染而重新引入。
4. 最重要的是，以M13为载体克隆基因，能够得 到单链形式的DNA。 单链形式的克隆基因在一些技术中能够发挥作 用，尤其是DNA测序和体外突变。
分类：基于质粒的主要特征 本质是质粒的基因
质粒分为以下5种：
(1)致育(fertility)质粒或称F质粒 仅携带转移基因，能促进质粒间有性接合转移； 不再具备其他的特征。 如：大肠杆菌中的F质粒
(2)耐药性(resistance)质粒或称“R”质粒 携带有能够赋予宿主细菌对一种或多种抗菌药的耐 药性的基因，如抗氯霉素、氨苄青霉素或水银。 R质粒通过正常的繁殖而传播, 对细菌感染的治疗产 生深远的影响，如RP4，通常在假单胞菌中被发现， 但也能够在其他细菌中出现

基因工程第三章基因工程的载体


基因工程载体的种类
质粒载体
质粒是一种裸露的、独立于细菌 拟核DNA之外的DNA分子，具有 自我复制能力，可携带外源DNA 片段。
病毒载体
病毒载体是指能够将外源DNA片 段插入到病毒基因组中，并利用 病毒的复制机制将外源DNA片段 导入到受体细胞中的媒介。
基因工程载体的作用
基因转移
基因工程载体能够将外源DNA片 段导入到受体细胞中，实现基因 的转移和表达。
通过优化载体结构，提高其在宿主细胞内的稳定性，降低丢失和突变 的风险。
开发NA的载体，提高基因工 程的效率和安全性。
拓展载体功能
通过基因工程技术对载体进行改造，赋予其新的功能，如表达调控、 靶向输送等。
智能化载体
利用合成生物学和纳米技术，开发具有智能响应能力的基因工程载体， 实现基因治疗的精准化和个性化。
利用基因工程载体生产食品添加剂、 酶制剂等，提高生产效率和产品质量。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
此外，噬菌体载体还可以用于疫苗研 发和生物治疗等领域。
04 人工染色体载体
人工染色体的概念与特性
人工染色体是一种通过基因工程技术 构建的染色体，具有与天然染色体相 似的结构和功能。
人工染色体具有高容量、可定制和可 调控等特性，能够承载和表达大量的 外源基因，为基因治疗、生物制药等 领域提供了新的工具。
质粒载体的应用
总结词
质粒载体在基因工程中广泛应用于基因克隆、表达和基因治疗等领域。
详细描述
质粒载体此外，质粒载体还可以用于基因治疗和疫苗研制等领域， 为疾病治疗和预防提供了新的手段。
03 噬菌体载体
噬菌体的生物学特性
基因克隆
基因工程载体可作为基因克隆的 工具，将外源DNA片段插入到载 体中，通过复制和扩增实现基因 克隆。

第三章 基因克隆载体

第三章 基因克隆载体

基因克隆载体(gene cloning vector): 能承 载外源基因，将其带 入受体细胞得以稳定 维持的DNA 分子。
克隆载体的功能
运送外源基因高效转入受体细胞。 为外源基因提供复制能力或整合能力。 为外源基因的扩增或表达提供必要的条件。

克隆载体具备的条件：
载体越小越好。 >10kb的DNA在纯化过程中容易断裂。
② 双抗菌素抗性选择标记
插入失活，分两次先后选择：
没有获得载体的寄主细胞 在Amp或Tet中都死亡。
获得载体的寄主细胞 在Amp或Tet其中之一中死亡。
插入失活筛选法
pBR322质粒载体的筛选
③ 高拷贝数
氯霉素扩增之后，每个细胞可达 1000~3000copy
OC
SC
L
1.1.2 质粒的分类
1）根据质粒自身传递的性质分为： 接合型质粒 能自我转移
非接合型质粒 不能自我转移
接合型质粒

又叫自我转移型质粒。
除了带有自我复制所必需的遗传信息外还带有
一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因。 如：F质粒（性质粒、或F因子）： 能使寄主染色体上的基因随其一道转移到原先 不存在该质粒的受体菌中。
简称phage 。

蛋白质外壳内包裹着 DNA（双链、单链、 线性、环状等）。
2 噬菌体载体
2.1 噬菌体的一般特性 2.2 λ噬菌体载体的构建 2.3 λ噬菌体载体的类型
2.1 噬菌体的一般特性

类型：

大多数呈带尾部的20面型，相当一部分为线
状体型。


核酸：
核酸多数为DNA，少量为RNA，如烟草花

分子克隆载体

第三章 分子克隆载体第一节 分子克隆载体如果只有基因而没有负责运载它的载体，则基因就不可能发挥作用。

基因工程载体决定了外源基因的复制、扩增和表达。

载体的本质DNA。

载体（vector）就是指携带外源DNA片段进入宿主细胞进行扩增或表达的工具。

目前常用有载体有很多种，它们分别由从细菌质粒、噬菌体DNA、病毒DNA分离出的元件组装而成。

它们可分为克隆载体和表达载体，表达载体又分胞内表达和分泌表达载体。

从表达所用的受体细胞，又可分为原核细胞和真核细胞载体。

从功能上又可分为测序载体、克隆-转录载体和基因调控报告载体等多功能载体。

1.1 克隆载体1.1.1 克隆载体具备的条件①载体都能携带外源DNA片段(基因)进入受体细胞，或停留在细胞质中自我复制，或整合到染色体DNA上，随着染色体DNA的复制而同步复制。

②载体都具有合适的筛选遗传标记。

③载体都具有供外源基因插入的限制性核酸内切酶位点，即多克隆位点。

④载体都必须是安全的，不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入除受体细胞以外的其他生物细胞，尤其是人的细胞。

⑤载体本身的分子量都比较小，可容纳较大的外源基因片段。

⑥载体在细胞内的拷贝数要高，方便外源基因在细胞内大量扩增。

⑦载体在细胞内稳定性要高，保证重组体稳定传代而不易丢失。

⑧载体的特征都是充分掌握的，包括它的全部核苷酸序列。

克隆载体在基因工程中占有十分重要的地位，目的基因能否有效转入受体细胞，并在其中维持和高效表达，在很大程度上取决于克隆载体。

基因工程是随着克隆载体系统的建立才发展起来的。

原核生物基因工程之所以起步早，发展快，成果大，就是因为最早建立了适用于原核生物的克隆载体系统，并且至今已建立了种类繁多的用于原核生物的大量克隆载体。

近十年来，植物基因工程所发展，同样是因为成功地构建了适用于植物的一系列的克隆载体。

因此，国内外把构建新的克隆载体始终作为基因工程基础研究的优先项目，构建的克隆载体可以申请专利保护。

第三章载体ppt课件


2. 质粒载体必须具备的基本条件
（1）具有复制起点（ORI） （2）具有抗菌素抗性基因：是筛选的标志。理想的
载体应该有两种抗菌素抗性基因。 （3）若干限制性内切酶的单一位点：用来插入外源
DNA片断。且插入后不影响复制功能。 （4）具有较小的分子量和较高的拷贝数。
3. 质粒的选择标记及其工作原理：
（2）长度: 约2.7kb （3）克隆位点: 10个连续的单一限制酶切位点，位于lacZ’基因的
5’端。
（4）选择标记：Ampicillin 抗性和 lacZ的肽 互补（蓝白斑）相结合。
蓝白斑选择原理： ① Xgal ② -半乳糖苷酶Xgal显色反应：-半乳糖苷
酶能把无色的化合物Xgal分解成半乳糖和一 个深蓝色的物质5-溴-4-氯靛蓝。 ③ lacZ的肽互补
加到1000个以上。
（4） 插入失活型质粒载体
载体的克隆位点位于其某一个选择性标记基因内 部。如pDF41、pDF42、pBR329。
（5） 表达型质粒载体
主要用来使外源基因表达出蛋白质产物。注意启动子的 性质，终止子、起始密码、终止密码的阅读正确。如果在大 肠杆菌里表达，必须把所克隆的真核生物的基因置于大肠杆 菌的转录—翻译信号控制之下。
六、其它质粒载体
1. pGEM-3Z
由pUC派生而来。与pUC的主要区别是 在MCS的两侧分别加了一个噬菌体启动子 T7和SP6。可被T7和SP6的RNA聚合酶识 别转录。
2. 穿梭质粒载体（shuttle plasmid vectors）
（1）穿梭质粒载体的结构
人工构建的具有两种不同复制起点和选 择标记、可以在两种不同的寄主细胞中存 活和复制的质粒载体。
1）-肽（ lacZ’ ）： -半乳糖苷酶N端的一段氨基酸片断（11-41氨
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6
质粒载体 (Plasmid vector):
以质粒DNA分子为基础构建(construct)而成的克隆 载体。
构型: 超螺旋 supercoil
Relaxed DNA
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Supercoil DNA
7
1.2 质粒的大小
天然质粒:1kb~100kb 质粒载体较小, 有的只有3kb, 具有作为载体的 必须序列即可。
（1）T-DNA • Ti质粒中能转移进入植物细胞内的DNA片段。
长约20kb， • 包含冠瘿碱合成和冠瘿瘤生长基因
20/32
20
T-DNA的结构特征：
➢ T-DNA区两端具有25个碱基对的顺向重复序列称为边 界序列。
21/32
21
➢ 右边界序列更重要。 • 去除右边界序列，将使T-DNA失去转移和整合的
• 农杆菌粘附到植物细胞壁。
• 植物激素诱导vir基因表达，其表达产物引起T-
DNA•脱离质粒 • 并位移进入植物细胞中,进入植物细胞的T-DNA整
合并表达。
26/32
26
3.2、 Ti质粒载体的构建(Construction)
• 构建Ti质粒克隆载体不是真正用于农杆菌， 而是用于植物，农杆菌起介导作用。
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14
启动子
合适的质粒
多克隆位点 终止子
标记基因
Ori EcoRI
15/32
15
2.2 获得合适的DNA片段.
❖DNA也要用限制酶切开，有 两个粘性末端。 ❖易于DNA ligase连接.
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2.3、重组连接
❖混合酶切后的DNA片段和载体，加入DNA ligase催 化连接。
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5
第一节 质粒 Plasmid
1 质粒的特点
1.1 定义 ❖细菌染色体之外的能自主复制的双链环状DNA分 子。 ❖ Circular, double-stranded DNA (dsDNA) that are separated from the chromosomal DNA in bacteria.
12
1.6 显性质粒与隐蔽质粒
• 隐蔽质粒：引入后，受体细胞的遗传特性无 变化。
• 显性质粒：引入后，为受体细胞提供了新的 遗传特性。
• 如：抗抗生素，颜色变化等。
13/32
13

2 质粒载体的构建
2.1 选择合适的出发质粒，并用限制酶切开。 好的质粒应具备： • 复制起始位点（Replication Origin，Ori） • 标记基因（Marker gene ） • 多克隆位点（Multiple cloning site ） • 启动子（Promoter ） • 终止子（Terminator）
布什
本.拉登
布什
• 受体细胞最好无内源质粒.
11/32
布莱尔
11
1.5 质粒的迁移性
• 接合质粒：含有 tra基因，可连接宿主细胞和受体 细胞，并在两者间转移。 特点: 大，拷贝数少，宿主多，不安全。
• 非接合质粒：无tra基因， 特点: 小，拷贝多，宿主少，安全，常用载体。
接合质粒 染色体
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2. 携带外源DNA进入受体细胞(receptor cell, host cell)，并能自我复制。
3. 有选择标记基因(marker gene),例如：抗抗生素 基因。
4. 载体要安全，对受体安全，不能转入其他生物， 尤其人细胞。
4/32
4
复制起始位点
多克隆位点
抗氨苄青霉素基因
The essential nucleotide sequences of cloning vectors: 1. A replication origin, 2. A drug-resistance gene, 3. Multiple cloning sites.
200kb 8/32
3kb
8
1.3 质粒的复制 Replication
• 每次细胞分裂，质粒均可复制传给子代 细胞。
• 一般，细胞中质粒的拷贝数保持稳定。
9/32
9
• 松驰型质粒：拷贝数多，小质粒。 • 严紧型质粒：拷贝数少，大质粒。
200kb 10/32
<5kb
10
1.4 质粒的不亲合性
• 能寓于同一细胞的质粒为亲合性质粒 • 不能寓于同一细胞的质粒为不亲合性质粒。
第三章 基因克隆载体 Chapter 3 Gene Cloning Vector
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1
计划学时: 4h • 第一节 质粒载体 (plasmid vector) • 第二节 病毒载体(virus vector) • 第三节 染色体定位整合载体(chromosome
position fixing vectors) • 第四节 酵母人工染色体载体 (YAC vector) • 第五节 特殊用途的载体
17/32
17
质粒克隆60
18/32
18
3 Ti 质粒载体
• Ti 质粒: 农杆菌中可引起寄主产生肿瘤的质粒。 • Ti plasmid (tumor-inducing plasmid) • 农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)
19/32
19
3.1 Ti质粒的组成（4个功能区）
2/32
2
克隆载体的定义
• 通过不同途径能将承载的外源DNA片段带入 受体细胞，并在其中得以维持的DNA分子。
3/32
3
载体的特点
1. 有多克隆位点,供外源DNA插入。
多克隆位点(multiple cloning site, polylinker): 具有多个限制酶的识别序列,可供处源DNA片段 插入.
• （4） Ori区：复制起始区.
24/32
24
25/32
Left border
right border
Vir region
Con region
Ori region
25
3.2 基因转化过程 Left border
right border
• 农杆菌感染后，植物细胞接受刺激释放信号分子，
反过来激活农杆菌Ti质粒上的vir基因；
功能；左边界的缺失，对无明显影响。
22/32
22
• 只要保留边界序列， T-DNA的其它序列被外源 DNA片段替换，仍可转入植物基因组。
Left border
right border
23/32
23
• （2） Vir区:位于T-DNA上游的一组基因， 可引起T-DNA的转移，长度约35kb
• （3） Con区：含有与农杆菌之间接合转移 有关的基因（tra），使Ti质粒在细菌间转 移。