丙氨酸氨基转移酶(ALT GPT)测定试剂盒(丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶比色法)产品技术要求瑞尔达

丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)检测试剂盒说明书【产品名称】丙氨酸氨基转移酶（ALT/GPT）试剂盒【包装规格】2000人份，1000人份，500人份，200人份【预期用途】本试剂用于体外在酶标仪，生化分析仪上测定血清中丙氨酸氨基转移酶活性。

【检验原理】L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+P+O2 PO H2O2+乙酰磷酸H2O2+色原剂POD 红色化合物【主要组成成份】R150m l×1瓶L-丙氨酸、a-酮戊二酸、TBHBA、低铁氰化钾。

R2 2.5m l×1瓶丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林。

R3 50m l×1瓶终止剂校准血清0.75ml×1瓶(校准值请参见校准血清包装标签）质控血清0.75ml×1瓶(质控值请参见质控血清包装标签）【条件及有效期储存】1．储存条件：试剂在2-8ºC密封保存。

若试剂出现颗粒物质、浑浊或在492nm处用蒸馏水调零，试剂吸光度值≥0.150时，请不要使用。

校准血清和质控血清于-15ºC以下冰室内保存。

2．有效期：自生产日期起2~8℃保存，有效期为半年。

工作液存放于2~8℃可稳定一周。

【适用仪器】酶标仪：HT3；MK3；ZS-3；Spectra系列Ⅲ；BioRad系列680 【样本要求】血清1. 由于标本中红、白细胞糖酵解作用而产生丙酮酸，造成ALT假性增高，如8小时内不测定，将标本在2~8℃冰箱内保存。

2. 血清ALT>100 KarU的标本，用生理盐水将标本按1：9稀释后再测定，将结果乘以10。

【检验方法】1.工作液配制根据自己实验室工作量可任意选择下列一种方法配制工作液。

（1）用前取R2瓶试剂倒入R1瓶内混匀，然后小心地将少量R1再倒入R2瓶内，最后再倒入R1瓶内，混匀待用。

（2）用前分别取R1试剂2.0份与R2试剂0.1份（20比1）比例混匀待用。

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（丙氨酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中丙氨酸氨基转移酶的活性。

1.1 规格试剂1:3×60 mL，试剂2:1×45 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×20 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×12 mL；试剂1:4×60 mL，试剂2:4×15 mL；试剂1:2×40 mL，试剂2:2×10 mL；试剂1:3×28 mL，试剂2:3×7 mL；试剂1: 1×4L，试剂2: 1×1L；试剂1: 2×4L，试剂2: 1×2L。

1.2 主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液。

外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度应不小于1.0（波长340nm，光径1cm）。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.004。

2.4 分析灵敏度测试100U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0025。

2.5 准确度用参考物质(GBW09177)定值的血清测定，实测值与标示值的偏差不超过±12.0％。

2.6 重复性批内变异系数（CV）应不大于5%。

2.7 线性2.7.1在[0.5，800]U/L区间内，线性相关系数r应不低于0.9900；2.7.2[0.5，96）U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±11.52U/L；[96，800]U/L 区间内，线性相对偏差应不超过±12%。

2.8 批间差批间差应不大于10％。

2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，检测结果应符合2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7的要求。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)简介：Leagene 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙酮酸与NADH 经LDH 催化生成NAD +，上述方法实际为ALT 速率法，其反应公式如下：L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。

丙酮酸+NADH+H +→L-乳酸+NAD +。

在上述偶联反应中，NADPH 的氧化速率与样本中酶活性呈正比。

对于单试剂速率法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT 催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在340nm 处吸光度下降速率(-ΔA /min)，下降速率(-ΔA /min)与ALT 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，进而计算酶的活性单位。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①_x0001_ 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。

②_x0001_ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。

③_x0001_ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT 含量。

编号 名称TE0125 100TTE0125 200TStorageALT 检测液(R)成分 终浓度 2×50ml 2×100ml 4℃ 避光Tris 缓冲液 100mM L-丙氨酸 500mM 酮戊二酸 15mM NADH 0.18mM LDH 1700U/L 防腐剂 15mM使用说明书1份分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。

检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。

下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。

一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。

具体步骤如下：1.患者空腹4～8小时。

2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。

3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。

4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。

二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确的测试结果。

具体步骤如下：1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。

2.采集患者的静脉血标本。

3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。

4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。

三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。

具体步骤如下：1.准备特定的抗ALT抗体试剂。

2.采集患者的静脉血标本。

3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。

4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。

5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。

综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。

针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。

总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。

您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。

血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。

ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。

因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。

2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。

不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

丙氨酸氨基转移酶检测操作程序丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ）属于转氨酶类，主要存在于肝细胞内，参与肝细胞内的新陈代谢，在血液中不发挥催化作用。

采用速率法测定，能有效地降低内源性物质的干扰，使测定结果较为准确。

主要用于肝脏等疾病的诊断。

实验原理L-丙氨酸和a-酮戊二酸在ALT 作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸被试剂中的LDH 还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD +，通过监测340nm 处吸光度值下降的速率，可以测定ALT 活力。

样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH 在初始孵育期内快速、完全地消除，不会干扰测定。

反应如下：L-丙氨酸 + a-酮戊二酸丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+样本中丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+试剂与仪器1. 试剂1.1.丙氨酸氨基转移酶试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：R1: L-丙氨酸600mmol/L 乳酸脱氢酶 ＞1820U/L NADH 0.26mmol/L Tris 缓冲液 80mmol/L R2: Tris 缓冲液 80mmol/L a-酮戊二酸 36mmol/LEDTA5.0mmol/L在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。

技术性能指标:试剂空白起始吸光度（340nm37℃）≤1.60A 。

线性范围：450U/L ±10%。

准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。

精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。

储存条件、有效期：储存于2～8℃，避光可稳定12个月。

启用后可稳定30天。

混浊或以蒸馏水为空白在340nm 处光吸收值高于1.0A 时，则不能使用。

ALTLDH LDH计算公式： ALT(U/L )= K= ——————————式中 TV=总反应体积(mL )SV=样本体积(mL )6.3=NADH 在340nm 处的毫摩尔吸光系数P=比色杯光径(cm )K 为工作参数表中的【K Factor 】以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将工作参数（K 值）输入仪器即可。

丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）说明书[产品名称] 通用名称: 丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）英文名称:L-Alanine Aminotransferase Assay Kit（ALT）[包装规格]2×200Tests；2×400Tests；R1:4×60ml、R2:4×15ml；R1:4×80ml、R2:4×20 ml；R1:4×120ml、R2:2×60ml；R1:8×40ml、R2:2×40ml；R1:4×50ml、R2:2×25 ml；R1:2×40ml、R2:2×10ml；R1:4×50ml、R2:4×25ml。

[预期用途] 用于体外定量检测人血清中的丙氨酸氨基转移酶的活力。

[检验原理]ALTL-丙氨酸 +α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O[主要组成成份]由试剂R1和试剂R2组成。

试剂R1：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、乳酸脱氢酶（LDH）、L-丙氨酸、α-酮戊二酸；试剂R2：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、还原型辅酶（NADH）。

[储存条件及有效期] 试剂在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。

有效期12个月。

开瓶后2℃～8℃可稳定30天。

备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。

[适用仪器]日立7170、奥林巴斯AU640、贝克曼LX-20全自动生化分析仪。

[样本要求]使用新鲜的无溶血血清，血清不宜反复冻融，以免影响酶活性。

[检验方法]（1）双试剂无需配制，直接使用。

（2）试验条件：样本（S）：15 µl试剂1(R1) ：200 µl 试剂2（R2）：50 µl温度：37 ℃测定类型：速率法主波长：340 nm 副波长：405 nm 反应方向：下降方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后2分钟至4分钟之△A/min 。

丙氨酸氨基转移酶测定试剂（ALT）（酶法）1. 检测原理本试剂采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐方法：丙氨酸+α-酮戊二酸−−→−ALT丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+−−→−LDH L-乳酸+NAD++H2ONADH氧化成NAD+引起340nm处吸光度的下降，下降速率与样品中ALT活性成正比。

2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTA（1mg/mL）作为抗凝剂2.4 标本的处理和储存：1血标本室温放置30min～45min后离心分离血清，置洁净试管加盖低温保存。

2标本在2-8℃可稳定3天，避免溶血。

3．试剂3.1 试剂及配套品：3.1.1试剂：本科使用重庆中元生物技术有限公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂R1：Tris缓冲液NADH 100mmol/L 0.3mmol/L试剂R2：Tris缓冲液100mmol/Lα-酮戊二酸85mmol/LL-丙氨酸 800mmol/LLDH ≥8.5kU/L不同批号试剂盒中各组份不能互换。

3.1.2配套品：无配套品。

3.2 试剂的稳定性：1.原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。

试剂的有效期为12个月。

2.试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天4：校准4.1校准血清：朗道复合校准品4.2校准方式：使用去离子水与校准血清两点定标。

丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。

【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。

后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。

L-ALT丙酮酸+ L-谷氨酸+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/LL-丙氨酸750 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。

【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。

试剂不可冰冻。

【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。

若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。

建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。

【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。

【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。

校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。

丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP丙氨酸胺基转移酶（Alanine Aminotransferase，ALT）是一种广泛存在于人体肝脏、心脏、肌肉、肾脏等组织中的酶，也是临床常用的生化指标之一、ALT水平的测定对于判断肝脏功能异常、诊断肝病以及监测治疗效果等方面具有重要的临床意义。

ALT测定的方法多样，其中常用的是酶促动力学法（Enzymatic Method），根据它在临床实验室中所编制的检验科生化项目SOP （Standard operating procedure），以下是一个大致的SOP描述：一、仪器与试剂准备：1.准备分光光度计、比色皿、移液器、计时器等常规实验室设备。

3.试剂室内温度要保持在15-25℃，避免试剂的高温和阳光直射。

4.准备质量控制品，用于质控测定，确保测定结果的准确性和可靠性。

二、样本准备：1.首先从病人或者健康受试者采集适量的血样，采用无抗凝剂的干管采血，保证采样时的无菌操作。

2.快速分离血清并尽快进行测定，避免搅拌和离心操作。

3.如果无法立即测定，血清应储存于-20℃以下的低温环境中，确保样本的稳定性。

4.样本在测定前应恢复至室温，并充分混匀至均匀液体。

三、操作步骤：1. 准确地取1ml标准和样本血清分别加入两个比色皿中。

2.在两个比色皿中分别加入相等的ALT试剂盒中提供的试剂，即ALT底物和ALT酶。

3.避免氧化反应的干扰，比色皿中的液体应尽快使用，并带入分光光度计中。

4.以酶反应的速率来计算ALT活性，通常使用每分钟多少个单位酶反应的方法。

5.根据试剂盒提供的标准曲线，将两个比色皿中的吸光度值与ALT标准品的吸光度值进行比较，计算出ALT的活性。

四、结果解释与质控：1.结果的单位一般为单位/升（U/L），正常成年人的ALT水平通常在10-40U/L之间。

2.高于正常范围的ALT水平常常是肝脏疾病的指示，如肝炎、肝硬化、肝癌等。

3.结果的准确性和稳定性需要进行质控，定期进行质量控制品的测定，并记录在质量控制记录簿中。

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒原理一、引言丙氨酸氨基转移酶（Aspartate Aminotransferase，简称AST）是一种存在于多种组织和细胞内的酶。

AST的测定对于诊断和评估多种疾病具有重要意义，特别是与心肌梗死、肝疾病和肝细胞损伤相关的疾病。

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒是用于测定血清或血浆中AST水平的一种常用试剂盒。

本文将详细讨论丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒的原理及其应用。

二、试剂盒原理试剂盒主要包括两个试剂：底物和辅酶。

底物一般为丙氨酸和α-酮戊二酸。

辅酶则为重要的催化底物转化过程的参与者。

1. 底物的使用丙氨酸和α-酮戊二酸是常用的AST底物。

丙氨酸是AST的氨基供体，而α-酮戊二酸是AST的接受者。

2. 丙氨酸氨基转移酶的反应过程丙氨酸氨基转移酶催化的反应是丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转氨基反应。

该反应的化学方程式如下：丙氨酸+ α-酮戊二酸⇌ L-谷氨酰基丙酮酸 + L-天冬氨酸该反应是可逆的，AST能够在体液中进行反应转化。

通过测定该反应中生成的L-谷氨酰基丙酮酸或L-天冬氨酸的含量，就可以间接反映出AST的活性。

3. 辅酶的作用辅酶在丙氨酸氨基转移酶的催化反应中起到重要的作用，可以促进底物的转化并催化产生特定的化合物。

辅酶的种类有很多，其中比较常见的有辅酶A、辅酶B6等。

三、测定原理丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒的原理是基于酶促反应和光度法测定酶的活性。

其测定步骤如下：1. 取样和预处理取待测样品（血清或血浆），并根据试剂盒的要求进行预处理。

预处理过程可能包括稀释、离心等步骤，以确保样品符合试剂盒的操作要求。

2. 添加试剂将试剂盒提供的底物和辅酶加入到样品中。

底物和辅酶的浓度在试剂盒中已经根据实验要求进行了优化。

3. 酶促反应在试剂的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸发生酶促反应。

该反应生成的产物L-谷氨酰基丙酮酸或L-天冬氨酸的浓度与AST的活性相关。

4. 光度法测定使用光度计测定反应产物浓度的变化。

丙氨酸氨基转移酶试剂盒（丙氨酸底物法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。

2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。

3 适用范围：本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活力。

4 检验方法本试剂反应原理采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的方法。

5 检验原理在丙氨酸氨基转移酶的作用下，L-丙氨酸与α-酮戊二酸反应，生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD＋，使340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定丙氨酸氨基转移酶活力。

样品中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH在反应延迟时间内消除，不会干扰测定。

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+6 检验标本要求6.1 样本为血清。

6.2 不得使用溶血或被污染的样本。

6.3 样本在2℃~8℃条件下可保存7天、室温条件下可保存1天。

7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司丙氨酸氨基转移酶试剂盒7.2试剂组成7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。

7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天，试剂不可冷冻。

7.3.3 反应液在2℃~8℃可稳定30天。

7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，或在340 nm处试剂空白吸光度值低于1.000A 时，不能使用。

8 实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 空白吸光度：A≥1.000。

8.2.2 空白吸光度变化率：︱△A︱/min≤0.002/min。

8.2.3 分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＜-0.0001。

8.2.4 线性范围：4U/L～1000U/L；线性相关系数r≥0.9900；[4，200]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±40U/L；（200，1000]范围内，线性相对偏差不超过±15％。

2014级12班1组201450557 陆丽霞血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定实验原理：以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，在血清丙氨酸氨基转移酶的作用下，生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性的大小,丙氨酸能与2，4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸二硝基苯腙。

丙酮酸二硝基苯腙在碱性溶液中呈现棕色，可用比色测定。

实验步骤：1.标准曲线绘制：⑴取6支试管并编号，按表4-16操作；表4-16 标准曲线的绘制试剂对照 1 2 3 4 52mmol/L丙酮酸标准液0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25底物溶液0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 PBS缓冲液0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37摄氏度水浴5分钟，然后各管加入2,4—二硝基苯肼2,4——二硝基苯肼0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0相当于ALT活力单位0 28 57 97 150 200A5200 0.059 0.107 0.167 0.208 0.249⑵将所得6支试管混匀，10min后以对照组调零，用520nm波长比色并读取吸光度；⑶以吸光度为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标，绘制标准曲线2．酶活性测定：⑴取2支试管，编号，按表4-17操作：表2 ALT活力测定试剂对照测定血清——0.1PBS缓冲液0.1 ——底物溶液0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴30分钟，然后各管加入2,4——二硝基苯肼2,4—二硝基苯肼0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH 5.0 5.0A5200 0.122⑵用520nm波长比色，以对照管调零，读取测定管吸光度；实验结果:由标准曲线方程y=0.0014x，当A520=0.122，即y=0.122，故x=87那么测得ALT酶活力单位为87讨论：1．查资料得参考正常值为40单位以下，实验测得ALT酶活力单位为87，机体可能发生了肝病变。

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒原理一、引言丙氨酸氨基转移酶（AST）是一种肝脏和心肌细胞内特有的酶，它能够催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转移反应。

AST测定是临床上常用的一种生化指标，可以反映肝脏、心肌等组织的损伤情况。

AST测定试剂盒是一种用于测定血清或血浆中AST活性的试剂盒。

二、试剂盒组成AST测定试剂盒通常由以下几种试剂组成：1. 丙氨酸氨基转移酶底物液：含有适量的丙氨酸和α-酮戊二酸作为底物，以及其他辅助成分。

2. 缓冲液：用于调节反应体系pH值，保证反应体系稳定。

3. 样品稀释液：用于将样品稀释至适宜范围内，以保证测得准确结果。

4. 阻断液：用于阻断某些干扰因素对反应结果的影响。

5. 标准品或对照品：用于建立标准曲线或验证试剂盒性能。

三、AST测定原理AST测定的原理是利用丙氨酸氨基转移酶催化底物丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转移反应，生成谷草酰乙酰胺和丙酮酸。

在这个过程中，丙氨酸氨基转移酶被消耗掉，因此反应体系中AST的活性与底物转化速率成正比。

在试剂盒中，标准品或对照品已知AST活性值，可以用于建立标准曲线。

通过将不同浓度的标准品或对照品加入反应体系中，并测量其吸光度值，可以得到标准曲线。

然后将待测样品加入反应体系中，同样测量其吸光度值，并根据标准曲线计算出样品中AST的活性值。

四、操作步骤1. 取出所需试剂，并根据说明书调制好缓冲液、底物液等试剂。

2. 将标准品或对照品按照说明书要求加入反应孔中。

3. 加入待测样本和阻断液。

4. 加入缓冲液和底物液，开始反应。

5. 反应一定时间后，加入停止液终止反应。

6. 测量吸光度值，并根据标准曲线计算出样品中AST的活性值。

五、注意事项1. 严格按照说明书要求操作，避免误差。

2. 注意试剂的保存条件和有效期。

3. 样品的采集、保存和处理要符合规范，避免样品污染和变质。

4. 注意试剂盒中含有有毒或刺激性物质，操作时需佩戴防护手套等个人防护用品。

六、总结AST测定试剂盒是一种常用的生化检测试剂盒，能够快速、准确地测定血清或血浆中AST活性。

酶学速率法波音特生物科技（南京）有限公司PO IN TE BIO TEC H(N ANJ ING ) C O., LTD.血清丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(ALT)使用说明书（酶学速率法）【产品名称】通用名称：血 清 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 检 测 试 剂 盒) 英文名称： The Serum ALT Reagent Kit 【包装规格】 型号 规格通用型 240ml （R1:4×48ml + R2:1×48ml ） 通用型 255ml （R1:3×68ml + R2: 3×17ml ） 通用型360ml （R1:3×96ml + R2:3×24ml ）【预期用途】本试剂盒用于测定人血清或血浆中ALT 的含量。

【检验原理】OH NAD L H NADH L L LDH ALT2+− → +− → −−++乳酸＋丙酮酸＋谷氨酸丙酮酸＋酮戊二酸丙酮酸＋α上述偶联反应中，还原性辅酶Ⅰ(NADH)的氧化速度与标本ALT 活性成正比。

NADH 在340nm 处有特异性吸收率，因而可通过监测NADH 吸光度的下降速率来计算出ALT 的活力。

【主要组成成份】 试 剂成 份 含 量 Tris 缓冲液60mmol/L NADH 0.18mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L R 1LDH 600U/L a-酮戊二酸15mmol/L 丙氨酸 500mmol/L R 2稳定剂和防腐剂【储存条件及有效期】本试剂盒在2~8℃避光保存，防止冷冻，可稳定12个月； 开启后在2~8℃避光保存可稳定30天。

【适用仪器】本试剂通用型适用于日立7170/7180/7080/7600 /7060/7150 /7 020;奥林巴斯AU400/640/7200/5400; Abbott Aeroset 2000/C 8000;SHIMADZU CL7200/7300/8000；东芝40FR/120FR/200FR;迈瑞BS-300；利霸；Beckman CX/LX;DADE Behring AR/RxL/X –Pand 。