实验四尿标本的微生物学检验

微生物检验标本的正确采集及注意事项正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。

可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。

为此应正确采集各种细菌学标本。

一、血液标本的采集1、采集方法（1）75%酒精清洁局部皮肤。

（2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。

（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。

（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。

2、注意事项（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。

（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。

切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。

（3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。

（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。

（5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。

（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。

（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。

（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。

二、骨髓的采集1、采集方法在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。

2、注意事项（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。

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尿液常规检验标本采集指南尿标本种类按检查目的，常可采用下列标本：1.晨尿：最好，安静状态下留取清晨第一次尿，该标本为浓缩尿。

其细胞和管型等状态完整，适合做各种有形成分的检查和尿蛋白、尿糖等项目的测定。

2.随机尿：较常用，适合于门诊和急诊病人常规检查。

结果易受多种因素影响。

3.空腹或餐后尿：适合于糖尿病、尿胆原、尿蛋白等的检查。

4.24h尿：用于尿液成分定量检查分析。

（1）24h尿采集方法：留尿当日早晨8时排空尿液，之后每次排尿收集于一大容器内。

至次日早晨8时最后一次尿液共24小时之间的所有尿液完全收集于洁净容器内。

在收集期间每次尿液标本均应放到冰箱(2~8摄氏度)或阴凉处保存。

全部收集完毕测量并记录24h总尿量，混匀后取20-30毫升置于有盖容器内送检即可。

（2）24h尿可用于检测Cr、BUN、K、Na、CL、Ca、P、UPR、UAER 等。

5、特殊实验尿(如3h、8h、12h等计时尿和餐后尿等)，则应按医嘱要求进行留尿，并注明用药时间，便于分析比对。

6、清洁尿（中段尿、导管尿、膀胱穿刺尿）：用于病原微生物学培养、鉴定和药敏。

尿液标本收集容器要求1.清洁、干燥、有盖、便于标记和传送、一次性使用，有较大开口便于收集；2.避免阴道分泌物、精液、粪便等污染，还应注意避免烟灰、纸屑等异物混入；3.无干扰化学物质（如表面活性剂、消毒剂）混入。

不可使用未经洗涤的装药物或试剂的器皿收集标本；4.能收集足够尿液，最好大于50ml，如收集定时尿，容器应足够大，并加盖，必要时加防腐剂；5.如需培养应在无菌条件下，用无菌容器收集中段尿液。

尿液采集方法尿液常规检查标本应按以下原则进行采集：1.尿液检验最好留取新鲜标本及时检查，否则尿液生长细菌，使其中的化学成分发生变化。

新鲜晨尿最佳，以清晨第一次尿为宜，较浓缩，条件恒定，便于对比。

门、急诊患者亦可随机留取。

在留取24h或12h尿液时，尿液标本最好至冰箱保存，也可根据检测目的加入防腐剂（本室未要求使用防腐剂）。

临床检验基础尿液检验尿液检验目的要求1.掌握尿液标本的采集、保存和处理；掌握尿液理学、化学、显微镜检查的方法和临床意义。

2.熟悉尿液理学检查、化学检查、显微镜检查的质量保证；熟悉尿液的特殊化学检查。

3.了解尿液的生成和生理。

泌尿系统 (urinary system ) :由一对肾脏、两条输尿管、 一个膀胱和一条尿道组成。

由肾产生的尿液经输尿管流入膀胱暂时贮存， 当尿液达到一定数量后，经尿道排出体外。

尿液检验定义尿液检验生理功能：1. 排出体内的代谢终产物以及进入机体的过剩物质和异物：如尿素、尿酸、肌酐、药物等。

2. 通过尿的生成，维持人体水的平衡。

3. 维持电解质和酸碱平衡：调节钠、钾、碳酸氢盐及氯离子浓度, 排出氢离子，制造氨和马尿酸。

4. 分泌生物活性物质：如肾脏可产生和释放肾素（调节血压）、前列腺素和促红细胞生成素、活性维生素D3(1,25-二羟维生素D3)等。

尿的生成过程尿液的生成过程包括：1.肾小球滤过形成超滤液（产生原尿）2. 肾小管和集合管选择性重吸收3. 肾小管和集合管的分泌和排泄（产生终尿）滤过膜 (filtration membrane) ：由肾小球毛细血管内皮、基膜和肾小囊脏层足细胞组成。

每层膜上均有不同直径的微孔，以基膜的最小。

MW < 70 000 Da 的小分子蛋白 (如Hb)可以滤过，大分子蛋白不能滤过。

尿液检验尿液检验尿的生成过程正常尿液为淡黄色透明液体，尿比密：1.015~1.025 ，pH：5.0~7.0。

尿液中95% ~ 97%为水，溶质3% ~ 5%，有机物主要为尿素，无机物主要为NaCl，还有其他多种成分。

尿蛋白(-)、尿糖(-)。

正常成人每昼夜尿量（终尿量）为1000 ~ 2000 ml，平均1500 ml/24h。

多尿：> 2500 ml /24h 、少尿：< 500 ml /24h 、无尿：< 100 ml。

1、尿常规、尿沉渣：尿常规是临床上最基础的化验检查之一。

《微生物学检验》教学大纲课程代码：00031025课程名称：微生物学检验课程总学时：136学时（其中理论68学时，实验68学时）课程类别：必修课课程性质：专业课面向专业：医学检验技术专业开设单位：基础教学部病原生物与免疫学教研室一、课程的性质、地位和任务《微生物学检验》是医学检验技术专业的一门专业课程。

本课程总论部分主要介绍微生物学及微生物学检验的基本知识，各论部分主要介绍常见病原微生物的生物学特性，包括形态染色特征、培养特性、生化反应特点、抗原性和分类，致病性和免疫性，微生物学检验的标本采集要求与方法、检验鉴定程序、具体的鉴定方法及鉴定要点和报告方式。

通过实验课程的学习，巩固和加强对微生物学及微生物学检验理论知识的认识和理解，提高学生的实际操作能力，培养学生创新思维和实事求是的科学态度。

二、课程教学目标（一）理论、知识方面1.明确微生物学检验的研究内容，学习微生物学检验的目的，认识医学微生物分类的意义及各类医学微生物的主要特性。

2.掌握医学微生物的主要生物学性状、遗传与变异机理、理化因素及生物因素对医学微生物的影响。

3.熟悉病原微生物的主要传播途径、致病性及免疫性。

学会对各类病原性微生物感染的常用实验室诊断方法。

4.明确病原微生物感染的特异性防治和药物治疗原则。

5.掌握常见的微生物所致疾病的临床症状和诊断指标6.了解对各类病原微生物的防治原则。

（二）能力、技能方面1.熟练掌握显微镜的使用和保养。

2.正确阐述常见的病原微生物的生物学性状，致病物质，主要传播途径及引起疾病的类型。

3.掌握常见的病原微生物感染的诊断方法。

4.将理论知识与具体的实验操作相结合，熟练掌握各种基本的医学微生物学诊断方法的机理，熟练各种基本实验的操作。

5.能运用学到的微生物学及微生物学检验专业知识，对各类临床标本进行病原微生物学的鉴定，及时地发出规范、准确的鉴定报告。

三、课程教学内容和要求第一篇微生物学检验基础绪论（1学时）1.教学内容及基本要求【教学内容】（1）微生物与微生物学（2）医学微生物学发展简史（3）微生物学及微生物学检验【基本要求】：掌握:微生物的定义与特点;微生物的分类。

实验十、血液标本的细菌学检验【器材】发已增菌血液标本1套/桌（1#、2#、3#、4#），发血琼脂平板1个/人【分离培养】（仅做有氧培养）标本→分区划线血平板，35℃18—24h观察结果。

【形态学检查】（每人做）（1#尿标本）涂片，革兰染色镜检。

【鉴定】1.观察菌落形态：2.涂片、革兰染色镜检：3.生化试验1）G+C→触酶：①触酶阳性，为葡萄C→血浆凝固酶试验：阳性为金葡，阴性为表葡②触酶阴性，为链C2）G-b→氧化酶①氧化酶阳性，为非发酵菌，O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b②氧化酶阴性，肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定结合凝固酶试验、胆汁溶菌试验、氧化酶试验鉴定。

【实验结果】（1#尿标本）1.观察菌落形态：在血平板上完全透明的溶血环（β溶血）2.直接镜检，G+葡萄状球菌葡萄状球菌3.生化试验1）触酶试验（+）2）血浆凝固酶试验（+）鉴定结果：1#血液标本直接涂片革兰染色观察：G+球菌，单个或呈葡萄状排列；再经过血平板分离培养，观察菌落特征，革兰染色，生化鉴定（触酶+、血浆凝固酶+）鉴定1#血液标本中的细菌为金黄色葡萄球菌。

【实验讨论】1.血液标本的采集：①采血时间和次数：血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集作细菌培养，为提高阳性率常需连续三次采血进行血培养。

②血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血做血培养。

采血量为成人一次5ml～10ml，儿童为3-5ml。

抽取的血液立即以无菌要求注入血培养瓶中，迅速送检。

③采集血标本和接种时要严格无菌操作，避免杂菌污染。

④根据菌血症和脓毒症所引起的疾病，还可采集不同部位的分泌物（痰液和脓液等）标本做涂片、染色和镜检或培养。

2.血液标本采集注意事项：血液标本的细菌学检验，一般不用抗凝剂(因为氟化钠、EDTA、枸橼酸钠可对细菌不利，肝素目前尚未报导有影响)近年来认为在培养中加入0.03-0.05%聚茴香脑磺酸钠有抑制血清中的杀菌物质作用，效果较好。

临床标本微生物检验概述● 考点临床标本微生物学检验（血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤）（1）常见病原菌（2）标本采集及运送（3）检验方法（4）临床意义一、临床标本细菌检验的基本程序二、血液感染◆正常人的血液是无菌的。

◆菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。

◆败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。

◆脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。

（一）常见病原菌（二）标本采集1.采血时间和频率◆病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。

但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。

2.采血量◆一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。

3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。

4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。

（三）微生物分离培养和鉴定1.培养基的选择◆用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧＋厌氧，需氧＋高渗等。

2.分离和鉴定当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：◆（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；◆（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；◆（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。

（四）报告方式阴性结果：◆7d报告无细菌生长。

◆疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。

阳性结果——三级报告方式：◆第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验；◆第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验；◆第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。

（五）临床意义◆葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。

临床微生物学检验标本的采集和转运1 范围本标准规定了临床微生物学（病毒学、细菌学和真菌学）检验标本采集和转运的技术要求。

本标准适用于开展临床微生物学检验的各级医疗机构及其临床微生物学实验室。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的用是必不可少的。

凡是注明日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

WS/T 348 尿液标本的收集及处理指南WS/T 499 下呼吸道感染细菌培养操作指南WS/T 442 临床实验室生物安全指南WS/T 503 临床微生物实验室血培养操作规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

3.1微生物学检验标本Clinical Microbiological Specimen本文件微生物学标本指临床病毒学、细菌学和真菌学检验（包括涂片镜检、培养、抗原、抗体和分子技术等）所用的标本。

3.2紧急检查标本STAT因疾病可能危及患者生命而需要立即处理的标本。

3.3采样拭子Sampling swab用于采集含病原微生物标本的拭子，由两部分组成：① 涂抹棒：柄部常为塑料或铝杆，柄部的一端是具有吸附作用的采样头，采样头材质包括脱脂棉、合成聚酯纤维、聚酰胺纤维、人造丝和泡沫聚氨酯等；②手柄：位于柄部的另一端，也可作为转运装置（容器或管）的帽。

3.4转运Transport标本由采样地点运送到检验地点的过程，分为内部转运（如使用人工或气动传输等内部送样方式）和外部转运（如使用汽车、飞机或火车等外部送样方式）。

3.5转运容器Transport container用于盛放转运培养基和送检标本的容器。

该容器应无菌、无消毒剂及防腐剂、无污染、密封性好及透明以便于从外部观察。

当采样装置具备密闭功能，且能有效保护样本不被污染时，可作为转运容器运送标本。

3.6转运培养基Transport medium液体或半固体的培养基，用于保护和维持标本在转运期间（从标本采集后到实验室处理这段时间）的完整性。

微生物检验检验标本不合格原因有哪些，如何处理微生物检验对医院具有重要的作用，检验科是医院和疾控中心的重要组成部分，占有重要地位。

微生物检验结果是否准确，可对临床医生的诊断及患者的临床治疗效果造成直接影响，微生物检验标本的质量与病原菌的准确检出率息息相关。

但微生物检验过程较为复杂，如在某一过程中出现人为或机器因素导致出现差错或导致微生物检验标本不合格，将严重影响到检验结果。

微生物检验不仅对传染性疾病具有检验，起到辅助诊断病情的作用，同时对疾病的传播途径有了解。

在临床的治疗中，微生物检验也非常重要，可以对疾病的抗菌药物的应用有依据，避免抗菌药物滥用，使其应用更合理。

但是微生物检验中样本不合格的情况会影响检验结果，影响临床判断。

对于微生物检验，影响其结果的原因都有哪些呢？现在就通过样本不合格的情况说起，微生物检验不合格的原因主要与标本不合格，以及采集过程不规范直接的关系。

样本不合格主要是指采采集痰液、血压、尿液、分泌物等标本出现问题，痰液标本采集主要一般由患者自行采集，容易不规范，且保存过程中不规范，而发生污染。

血液标本不合格主要发生在送检不及时，发生溶血，或微生物增多的情况；采集时间错误、消毒时间不够和没有控制好抽血量,而导致结果出现假阴性或假阳性。

尿液一般由患者自行采集，采集过程中容易发生污染；同时留取的是中段尿,于 1 小时内送到检测。

若无法及时送达,则需要在 4 到8℃ 的环境下冷藏保存。

但在临床中,常见各因素影响标本接收、运送不流畅,故可能受到污染。

且院内对于中段尿的标本,未有专门留取的地方,只是告知患者自行留取,这也是标本被污染的最主要原因。

分泌物的采集由于部分的特殊性，与肛门位置较近，容易造成污染。

微生物检验涉及多种学科，例如，细胞学、分子生物学、微生物学等，临床上通过实验及研究，促进了微生物技术的不断更新及持续发展，提出了微生物检验技术并将其应用于临床检验中，可对患者是否患有疾病进行检验。