常见的几种禽病毒病采样技术

中国动物保健2021.06禽流感（avian influenza ，AI ）的潜伏期一般较短，通常为4～5d 。

发病时精神沉郁，食欲、饮欲降低甚至废绝，被毛散乱，体温升高，趴卧不动，偶有流泪。

头部、面部水肿，脚鳞发紫出血，肉垂和鸡冠呈干枯紫色，甚至坏死。

呼吸困难，咳嗽，听诊呈啰音；下痢，粪便呈淡黄或白色。

出现神经症状，共济失调，不能站立或行走。

并且该病为人畜共患病，处理不好不但会危害养禽业的经济发展，还会危害人类身体健康。

1禽流感的流行病学特点1.1传染源主要由感染或携带禽流感病毒的鸡、鸭、鹅等家禽，野外野生鸟类，特别是迁徙性水禽相互传染所致。

1.2传播途径主要通过病禽的分泌物、排泄物、尸体，污染的饮水、饲料和其他物体，直接或间接接触引发感染，主要感染途径为呼吸道和消化道，以及直接接触病毒毒株感染。

人工接种可通过气溶胶经口鼻内、气管内、眼结膜、腹腔、肌肉、静脉和泄殖腔内等途径使易感禽类感染。

1.3易感动物禽流感病毒在世界范围内广泛分布。

许多家禽、野禽、人类、特别是鸭等迁徙水禽，发生病毒感染的概率比其他禽类高，而家养的鸡和火鸡所发生的流感最为严重。

1.4特点多为大流行，世界范围流行。

过去呈三年小流行，五年大流行。

该病主要在寒流较多，气温变化大的秋冬、冬春交替季节流行。

2禽流感的检测技术2.1血清学诊断技术中和试验中和试验的操作步骤复杂，容易造成材料的浪费，临床上不常用，但其为最原始的病毒检测技术，常用来做标准与其他检测方法作比较。

本试验常用鸡胚或组织培养细胞作为样本鉴定禽流感病毒。

中和试验是具有高度的灵敏性和特异性的血清学方法，抗体只和病毒上表面抗原相对应，特别是已吸附的宿主细胞上的病毒颗粒表面的抗原相对应。

所以，在某种特定血清型的中和实验中，抗体只和组内的其他病原发生有限的交叉反应。

琼脂扩散试验琼脂扩散试验检测禽流感时，以具有血凝素活性的鸡胚尿囊液作为样品，采用已知的阳性血清和未知抗原进行病毒抗原型的特异性鉴定。

非洲猪瘟实验室检测流程非洲猪瘟是一种高度传染性的猪病，严重危害猪类养殖业。

为了及早发现、确诊和控制非洲猪瘟，需要进行实验室检测。

下面是非洲猪瘟实验室检测流程的详细介绍。

1.采集样品：样品采集是非洲猪瘟实验室检测的第一步。

常见的样品包括猪体组织、血液、粪便、呼吸道分泌物等。

采集时需要遵守无菌操作规范，确保样品的纯净度和准确性。

2.样品预处理：采集到的样品通常需要经过预处理，以提取出样品中的病毒或基因组等重要信息。

不同样品的预处理方法可能有所不同。

例如，血液样品通常需要进行离心分离血浆或血清，粪便样品需要进行离心沉淀，猪体组织样品需要进行玻璃化处理等。

3.样品提取：样品提取是为了从复杂的样品中分离出非洲猪瘟病毒或病原体的核酸。

常见的提取方法包括酚-氯仿法、磁珠法、柱子法等。

提取过程中需要注意避免污染和交叉感染，保证提取的纯度和质量。

4.质检：提取的样品需要进行质检，以确保提取效果和所需浓度。

常见的质检方法包括核酸定量、质量评估、纯度检测等。

质检结果必须满足实验要求才能进一步进行后续检测。

5.PCR扩增：PCR（聚合酶链式反应）是非洲猪瘟实验室检测的主要方法之一、通过PCR扩增病毒或病原体的核酸序列，可以高效地检测非洲猪瘟。

PCR扩增反应包括反应液配置、扩增程序设定和实验仪器操作等。

PCR扩增结果可以通过凝胶电泳等方法进行可视化分析。

6.实时荧光定量PCR：实时荧光定量PCR是一种检测非洲猪瘟的快速敏感方法。

其原理是在PCR扩增过程中实时检测荧光信号的增加量，以判断样品中病毒数量的多少。

实时荧光定量PCR需要选择合适的引物和探针，并进行标准曲线建立和结果分析。

7.ELISA检测：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学检测方法。

通过特异性抗体的识别与结合，可以检测非洲猪瘟病毒的抗原或抗体。

ELISA检测方法包括抗原捕获ELISA和抗体间接ELISA等，具体的操作步骤需要根据实验需求进行选择。

8.核酸测序：核酸测序是对非洲猪瘟病毒基因组进行全面分析的方法。

畜禽免疫抗体监测采血技术及注意事项作者：罗士仙，康修田，梁盛，等来源：《江西畜牧兽医杂志》 2013年第4期罗士仙1,康修田1,梁盛2,饶鸣鹏3,曾梅群1,张有美4（1.泰和县畜牧兽医局，江西吉安343700；2马市畜牧兽医站；3沙村畜牧兽医站；4澄江畜牧兽医站）畜禽采血是疫病监测、检测、诊断和评估免疫效果的一项前提性工作，采血质量的好坏，直接影响到监测结果，所以作为基层兽医人员，畜禽的采血技术是必须掌握的常规技术之一。

现介绍几种常用的采血方法及注意事项供同行参考。

1采血样前器具的准备根据检测项目准备一次性手套、真空采血管、防护服、口罩、防护帽、采血针、离心管、套猪器、铁链条、一次性注射器、75％酒精棉球、橡皮筋、剪毛剪、灭菌脱脂棉球、采样单、油性记号笔、冷藏包、采样登记表等采样工具。

检查真空采血管管盖是否松动，一次性注射器安装是否密封等。

2畜禽血样采集的常用方法2.1牛血样的采集一般多采用颈静脉采血方法或耳静脉采血方法采集血样。

2.1.1牛颈静脉采血。

牛颈静脉分为颈内静脉和颈外静脉，颈内静脉较小，颈外静脉较粗，位于颈部肩骨乳突肌与胸头肌间的凹窝内。

采血前助手要用铁链栓树桩或电线杆保定好牛颈部，使其头向一侧上仰，让牛侧颈静脉充分暴露出来，采血者站立于牛颈部颈静脉暴露一侧，取真空采血针头，以拇指、食指和中指夹住，依靠腕力阴劲，沿颈静脉线走向垂直扎进颈静脉上的皮肤，然后调整位置，针头一旦进入血管，血液马上会喷射而出。

待血量达到要求后，拔出针头，用消毒过的干棉球按压针眼，轻压止血。

采血完毕后，及时做好血样的编号和采样表的填写工作。

2.1.2牛耳静脉采血。

①真空采血管牛耳静脉采血。

采血地点选择要平整、松软、干燥、有栓桩的场地，防止牛挣扎导致悬挂被勒死而出意外。

采血前助手用绳子把牛鼻栓两侧同时绑牢，先用铁链条栓树桩或电线杆保定好牛颈部，铁链条要调紧点，固定时先松后紧，避免采血时牛挣扎，同时用绳子把牛的双角固定在树桩或电线杆上，接着用一手压迫耳静脉近心端，或用皮筋绑紧耳根，另一手用75％酒精棉球涂擦牛耳静脉，使其耳静脉充盈。

禽流感病毒的分离与鉴定技术孙建宏,刘景利,张从禄①（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001）①摘要：禽流感病毒的诊断一般是通过鸡胚分离病毒，检测其血凝活性，并应用琼脂扩散试验或其他试验确定其是否为禽流感病毒，再进一步进行亚型鉴定、致病力测定。

如果是H5或H7亚型，还应采用PCR等方法对血凝素裂解位点的氨基酸序列进行测定。

①关键词:流感病毒;分离;鉴定①禽流感（Avianinfluenza，AI）由正黏病毒科A型流感病毒属的流感病毒引起。

该病毒的血清型分为15个HA亚型和9个NA亚型。

禽流感病毒可感染各种家禽和野禽，但多数呈亚临床感染。

一些H5和H7亚型可引起高致病性禽流感，可使鸡群100%死亡。

高致病性禽流感因其传播快、危害大，有的血清型可感染人，世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类动物疾病，我国将其列为一类动物疫病。

①禽流感病毒的诊断可以根据临床症状、剖检变化做出初步诊断，进一步确诊需进行实验室检测。

目前一般是通过病毒分离和血清学试验检测病毒或是检测感染鸡的抗体进行鉴定。

近年来，随着分子生物学技术的发展，RT-PCR方法日臻成熟，也逐渐成为一种常用的诊断技术。

文章对这些禽流感的诊断技术分别做一些介绍。

①1禽流感病毒的分离①样本可采集死禽样本或活禽样本。

死禽样本一般采集肠内容物或泄殖腔拭子、鼻拭子、咽喉拭子以及内脏组织（气管、肺、气囊、肠、脾脏、肾、脑、肝脏和心脏等）；活禽样本可采集气管拭子、泄殖腔拭子。

由于采集棉拭子时幼禽容易受伤，所以还可取粪便。

①采集的拭子放入1.0mLPBS（pH7.0～7.4，含抗生素）的离心管中，静止作用30min。

对于泄殖腔拭子和粪便，用过滤器过滤除菌，上清液作为样本。

内脏样本应无菌取样，放于灭菌的玻璃研磨器，用PBS配成100g/L的悬液，加入1/10体积的抗生素，将处理过的样本移至离心管内，3000r/min离心10min，取上清液接种。

①采集或处理的样本在2℃～8℃条件下保存应不超过24h；如果需长期保存，需放置-70℃条件，但应避免反复冻融（最多冻融3次）。

鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施鸡新城疫是由鸡新城疫病毒引起的一种高传染性、高致病性的家禽病。

该病毒属于冠状病毒科，感染家禽后可导致急性呼吸道疾病和神经系统病变，造成严重经济损失，且可对人体健康造成威胁。

疫情流行病学鸡新城疫最早于1930年在美国北卡罗来纳州发现，近年来全球范围内相继发生，且死亡率极高。

该病毒可通过空气、食品、尿液、粪便、蛋等途径传播，且病毒在环境中可存活较长时间。

受感染的鸡在短时间内就会发病，且疾病进展迅速，致病性极强。

鸡新城疫的爆发对禽业产生了极大的影响，并且对人类健康存在一定威胁。

临床症状感染过鸡新城疫病毒的鸡会出现多种症状，包括有以下几个方面：1. 呼吸道症状：鸡在感染鸡新城疫病毒后，会表现出急性呼吸道症状，如喘息、打嗝等。

2. 消化系统症状：鸡接触到感染病毒时，很可能会出现食欲缺失、呕吐、腹泻等消化系统症状。

3. 中枢神经系统症状：该病毒亦可引起鸡的中枢神经系统损害，表现出急性麻痹、死亡等严重症状。

4. 眼部症状：感染鸡新城疫病毒后，鸡的眼睛可能会出现水肿、异样分泌物等症状。

检测方法针对鸡新城疫的治疗方法并不多，因此必须尽早检测，以便及时采取各种防控措施。

以下是常见的鸡新城疫检测方法：1. 血清学检查：通过分离感染鸡新城疫病毒血清中的抗体或检测抗体水平变化，可以快速检测感染鸡新城疫病毒的鸡群。

2. 病灶检查：经过光学显微镜检查，可确定鸡是否感染鸡新城疫病毒。

3. 分子生物学检测：通过PCR等技术检测鸡群中病毒的核酸，可较准确的检测出感染鸡新城疫病毒的鸡只。

防控措施为了控制鸡新城疫的传播，人们必须采取有效的防控措施，以减轻疫情带来的危害。

以下是一些常见的防控措施：1. 消毒：加强对鸡舍、设备、车辆等物品的消毒处理。

2. 隔离：对于检测到感染鸡新城疫病毒的鸡只及其周边鸡舍，必须进行隔离管理。

3. 疫苗接种：对于禽类疾病，接种疫苗是最有效的防治方法之一，可以有效地预防鸡新城疫病毒的传播。

现代农业科技2017年第23期动物科学在进行鸡的疫病监测和诊断时,经常需要采集鸡的血液、喉拭子、泄殖腔拭子、粪便和环境污染物等,熟练掌握鸡样品采集操作技术,对快速准确地诊断鸡病、做好鸡病预警预报工作、及时扑灭疫情具有重要意义。

为使从事动物疫病防控工作的初学者尽快掌握本项技术,提高工作效率,做到样品采集快速准确、应激损失降到最低、安全防护科学到位,现将鸡样品采集的规范操作技术阐述如下。

1样品采集前的准备工作一是监测人员准备好防护用品,例如穿戴好隔离衣、防护帽、胶靴或鞋套、乳胶手套、口罩和护目镜等。

二是备齐样品采集器械和用品,例如5mL 一次性注射器、1.5mL 离心管、灭菌试管、pH 值为7.4的磷酸缓冲液、酒精棉球、碘酊棉球、消毒剂、保温箱或泡沫箱、热水袋、冰袋、自封袋、胶布、封口膜、封条、皮筋、无菌棉签、剪刀、笔、记号笔和采样单等[1]。

三是组织好抓鸡人员,准备好高度适宜的采血台或桌椅。

2鸡翅静脉采血技术2.1采血操作一是鸡的保定。

抓鸡人员一手抓住鸡的2个翅膀,一手抓住鸡的2条腿,侧放于采血台(桌椅)上,鸡腹部朝向采血人员,鸡头在采血人员的左侧。

二是采血部位用酒精消毒。

调整注射器,使注射器内留出空隙,安装针头且使针头的斜面和注射器的刻度保持在同一面上。

三是采血人员左手食指拨开覆盖在翅静脉上的羽毛,左手拇指压住翅静脉的近心端,左手心握住干棉球以备止血,右手持注射器,针头斜面朝上,从翅静脉近心端向远心端水平刺入,有回血时左手拇指压住针头基部,稍用力缓缓地吸血,达到2mL 时迅速拔出针头,左手拇指用干棉球按压止血,稍许把鸡放回原处。

四是采好的血吸入少量空气,留有空隙以便血清析出,编号后针头斜向上,用皮筋捆绑和采样单一起放入有热水袋的保温箱(泡沫箱)内。

五是将采血场地清扫干净并消毒。

2.2注意事项一是不注意个人防护,采血人员有时被鸡的粪便、羽毛和血等污染或抓伤。

二是采血台或桌椅高度不合适,鸡的保定不合适,影响规范操作。

正确采集和送检动物疫病检测样品的方法采集和送检动物疫病检测样品是确保动物健康和预防疫病传播的重要步骤。

下面将介绍正确的采集和送检动物疫病检测样品的方法。

1.选择合适的样品类型：根据疾病类型和检测要求，选择适合的样品类型。

常见的样品类型包括血液、组织、粪便、尿液、唾液、脑脊液等。

2.准备采样工具和消毒液：确保采样工具和容器干净且消毒良好。

常用的采样工具包括无菌采血针、无菌采样管、无菌拭子等。

消毒液可选择常见的酒精、碘酒等。

3.采集血液样品：首先消毒样品采集区域，通常在动物的耳根、颈部或前肢内侧静脉进行采血。

用无菌采血针采集适量的血液，放入无菌采样管中。

采血后在采样点按压数分钟，以防止出血。

4.采集组织样品：选择合适的组织（如肌肉、肺、肠道等），消毒采样区域，用无菌手术刀或剪刀切取组织样品，放入无菌采样袋或离心管中。

注意保持样品的完整性和干燥，避免污染。

5.采集粪便样品：使用无菌容器收集新鲜的粪便样品，避免杂质的污染。

可采用无菌拭子或勺子将样品转移到采样管中。

样品应该保持湿润，避免缺氧和干燥。

6.采集尿液样品：消毒动物的泌尿部位，用无菌容器收集动物的尿液。

尽量避免尿液污染，如土壤、皮毛等。

如需要定量采样，可使用无菌尿道导管。

7.采集唾液样品：使用无菌拭子或无菌吸管，激发动物产生唾液，将唾液收集到无菌采样管中。

唾液样品可以用于许多疾病的检测，如口蹄疫等。

8.采集脑脊液样品：对于神经系统相关的疾病检测，可以采集脑脊液样品。

这通常需要进行脑部解剖，使用无菌针头从脑脊液池中吸取适量的脑脊液，放入无菌收集管中。

10.存储和运输样品：将采集好的样品存放在低温或冷藏条件下，避免样品变质。

如果无法立即送检，可以选择使用干冰或冷冻保存设备进行保存。

在运输时，保持样品的稳定和避免温度变化。

11.委托专业实验室进行检测：根据样品类型和检测需求，选择有资质和经验的实验室进行检测。

确保送检时填写准确的样品信息和检测要求。

总之，采集和送检动物疫病检测样品需要严格执行规范的操作流程和消毒措施，确保样品的完整性和准确性。

非洲猪瘟实验室检测流程非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是一种高度致命的病毒性疾病，主要影响猪的健康和生存。

为了预防和控制ASF的传播，各国都设立了实验室来进行ASF的检测。

下面是非洲猪瘟实验室检测的基本流程。

1.样品收集：首先需要从疑似感染ASF的猪的组织、血液、粪便等样品进行采集。

收集到的样品必须遵循适当的采样方法，以确保样本的完整性和准确性。

2.样品处理：收集到的样品需要进行处理，以便提取病毒或检测病毒的核酸。

处理过程可能包括样品离心、冻干或冷冻保存等步骤，以确保样品的保存和稳定性。

3.样品提取：处理后的样品需要进行核酸提取，以获取样品中的ASF 病毒的DNA或RNA。

提取方法包括使用商用试剂盒或自制提取试剂等多种方式。

4.PCR检测：提取到的核酸可以用于聚合酶链式反应（PCR）检测ASF 病毒的存在。

PCR是一种常用的分子生物学方法，可以放大病毒的核酸并检测其存在与否。

5.结果分析：通过PCR检测，可以获得ASF病毒的阳性或阴性结果。

阳性结果表明样品中存在ASF病毒，阴性结果则表示样品中不存在ASF病毒。

6.病毒分离与鉴定：如果样品经过PCR检测呈阳性结果，接下来需要进行病毒的分离和鉴定。

这通常是通过将阳性样品接种到特定细胞系或动物体内，观察病毒是否能够繁殖和感染。

7.结果报告：最后，实验室将审核、整理和报告检测结果。

病毒检测报告通常包括样品信息、检测方法、结果和相关建议等内容，以便于参与疫情控制和预防的机构进行后续处理。

此外，非洲猪瘟实验室检测流程还可能包括对样品进行深度测序以了解ASF病毒株系、进行病毒血清学检测以了解对ASF病毒的免疫反应等。

总的来说，非洲猪瘟实验室检测流程需要收集、处理和提取样品，通过PCR检测病毒核酸，进行病毒的分离与鉴定，并最终形成检测结果和报告。

这些检测流程的目的是及时、准确地检测ASF病毒，为疫情监测和控制提供依据。