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pd-1原理机制的研究实验PD-1是一种膜表面免疫共受体，其在免疫调节过程中起着重要的作用。
PD-1主要通过与其配体PD-L1相互作用，调节T细胞活化状态和非典型T细胞的功能。
PD-L1生物学分布广泛，可以被T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞等多种免疫细胞表达。
研究表明PD-1与PD-L1之间的相互作用能够抑制T细胞的活化和增殖，从而减弱免疫应答。
因此，PD-1抑制剂已成为治疗多种癌症的重要手段之一。
PD-1与PD-L1在参与免疫调节过程中的作用机制目前还不清楚，但研究表明，PD-1与PD-L1在细胞膜表面相互结合后，通过调节一系列下游信号途径来实现免疫调节的作用。
为研究PD-1与PD-L1的作用机制，目前主要采用以下实验方法：1. PD-1或PD-L1单克隆抗体中和实验该实验方法是通过使用PD-1或PD-L1单克隆抗体，将PD-1或PD-L1与其配体相互作用被中和，从而探究其对T细胞活化和增殖的影响。
该方法的优点是操作简便，但不仅仅能够研究PD-1与PD-L1相互作用的机制，同时也包括其他免疫共受体相互作用的影响。
2. 免疫同沉淀实验免疫同沉淀实验是通过将目标蛋白与对应的抗体结合，然后用其它蛋白对待反应体系进行反应，在相互作用的蛋白沉淀出来后进行识别，用于探究PD-1与PD-L1相互作用的蛋白质结构和作用机制等方面。
3. 细胞培养实验细胞培养实验是将人类T淋巴细胞与微生物、肿瘤细胞等免疫活性细胞培养在一起，使用PD-1单抗、PD-L1单抗进行免疫治疗，然后检测细胞活性和增殖状态，从而探究PD-1与PD-L1的相互作用对T细胞免疫活性的影响。
该实验可模拟生物体内的免疫反应，而且可以用于研究PD-1抑制剂的作用机制。
总之，各种实验方法的发展，为研究PD-1抑制剂的作用机制提供了充分的手段和途径。
未来，通过逐步深入细胞水平的研究，我们可以更好地理解PD-1与PD-L1的作用机制，以及相关疾病的发病机制，在药物创新和开发中发挥重要作用。
猪伪狂犬病病毒单克隆抗体制备及特征分析叶华虎1，陈建宇1,2，周小军1，王进1，代艳艳1，韩宇1，刘珩1，袁菊芳1*1军事医学科学院实验动物中心北京1000712内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021摘要：目的制备伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）单克隆抗体，为PVR防控奠定基础。
方法以PRV疫苗毒株Bartha-k61免疫小鼠，取免疫小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0进行融合，利用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞并制备腹水；再利用病毒中和实验检测单克隆抗体（腹水）对PRV的中和作用。
结果通过细胞融合，共得到11株针对PRV的杂交瘤细胞。
中和实验结果显示，无论是对于PRV弱毒株Bartha-k61还是强毒株A V25，2株杂交瘤细胞产生的腹水都表现为明显的中和效应；但两株单抗的中和能力不同，其中1株杂交瘤细胞腹水的中和效价为1:16~32，另1株的效价为1:4。
交叉反应显示，11株单克隆抗体中，2株与单纯性疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）存在明显的免疫反应，1株与猴B病毒的gD蛋白存在明显交叉反应。
结论成功制备了PRV的单克隆抗体，并获得了对PRV具有中和作用的单克隆抗体，以及能与其他疱疹病毒交叉反应的单克隆抗体。
1关键词：伪狂犬病病毒；单克隆抗体；中和抗体；交叉反应Preparation and characterization of monoclonal antibody against porcine pseudorabiesvirusYe Hua-hu1, Chen Jian-yu1,2, Zhou Xiao-jun1, Wang Jing1, Dai Yan-yan1,Liu Heng1, Y uan Ju-fang11 Laboratory Animal Center, Academy of Military Medical Sciences Beijing 1000712College of Life Sciences, Inner Mongolia University Hohhot 010021 Abstract:Objective In order to control the harm of pseudorabies virus (PRV), monoclonal antibodies against PRV were produced and analysis. Methods Mice were immunized with PRV Bartha-k61 strain and then its spleen B lymphocytes were separated and fused with SP2/0. The positive hybridoma cells were screened by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and used to produce ascites. The neutralizing effect of monoclonal antibodies on PRV were detected by virus neutralization experiment. Results A total of 11 hybridoma cells lines were obtained, after the treatment of cell fusion and screening. The results of virus neutralization test showed that the ascites produced by two hybridoma作者介绍：叶华虎，男（1970~），博士。
2023年高二生物上期人体稳态的调节能力是有一定限度的。
下列现象属于内环境稳态失调的是（）A．剧烈运动后，血浆pH由7．42降至7．13又升至7．40B．高温下户外作业导致中暑，体温升至38．5℃C．人体感染流感病毒后，B淋巴细胞迅速增殖分化D．饮水过多后，抗利尿激素的释放量减少【答案】B【解析】内环境稳态是在神经、体液和免疫调节的共同作用下，通过机体的各器言，系统的分工合作，协调统一而实现的。
人体稳态的调节能力是有一定限度的，超过限度会导致稳态失调。
A、人体血浆的pH为7.35～7.45。
剧烈运动后，机体产生大量二氧化碳和乳酸，进入血浆，导致血浆pH先降低再升高，这是正常的稳态调节，A不符合题意；B、人体正常的体温约为37℃，高温下户外作业导致中暑，体温升至38．5℃，超过了体温调节的范围，属于稳态失调，B符合题意；C、人体感染流感病毒后，病毒作为抗原刺激B淋巴细胞迅速增殖分化形成浆细胞，浆细胞再分泌抗体消灭病毒，这属于正常的体液免疫，C不符合题意；D、饮水过多后，细胞外液渗透压降低，刺激下丘脑渗透压感受器，导致垂体释放抗利尿激素释放量减少，此过程为正常的水平衡调节，D不符合题意。
故选B。
2023年高二生物上期饭后约1小时血糖浓度便开始下降，导致其下降的因素不包括（）A．机体通过下丘脑-垂体-胰岛途径促进胰高血糖素分泌B．细胞膜上葡萄糖转运蛋白增多促进葡萄糖进入细胞C．下丘脑通过相关神经促进胰岛B细胞分泌胰岛素D．胰岛素抑制非糖物质转化为葡萄糖【答案】A【解析】胰岛素是惟一能降低血糖的激素，其作用分为两个方面：促进血糖氧化分解、合成糖原、转化成非糖类物质，抑制肝糖原的分解和非糖类物质转化，胰高血糖素和肾上腺素能升高血糖，只有促进效果没有抑制作用，即促进肝糖原的分解和非糖类物质转化。
A、血糖调节中枢位于下丘脑，血糖升高一方面刺激胰岛B细胞直接分泌胰岛素，另外刺激下丘脑血糖调节中枢，通过神经调节作用于胰岛B细胞，A错误；B、胰岛素会促进组织细胞膜上葡萄糖转运蛋白增多，促进葡萄糖进入细胞，从而降低血糖，B正确；C、血糖升高一方面刺激胰岛B细胞直接分泌胰岛素，另外刺激下丘脑血糖调节中枢，通过神经调节作用于胰岛B细胞，C正确；D、胰岛素抑制肝糖原、脂肪等非糖物质转化成葡萄糖同时促进组织细胞利用葡萄糖，最终降低血糖，D正确。
PD-L1多肽抗原的筛选及免疫效果的初步试验PD-L1多肽抗原的筛选及免疫效果的初步试验近年来，免疫疗法作为一种新型的抗癌治疗手段受到了广泛关注。
其中，免疫检查点抑制剂（Immune checkpoint inhibitors）是引人瞩目的免疫疗法之一。
该疗法通过抑制肿瘤细胞与免疫系统之间的抑制信号，恢复免疫系统对肿瘤细胞的攻击能力，从而实现抗癌治疗的目的。
PD-L1多肽抗原作为免疫检查点抑制剂的标靶物质，其筛选与免疫效果成为了研究的关键。
PD-L1（Programmed Death Ligand-1）作为一种免疫检查点分子，广泛存在于人体各种组织和细胞表面。
其主要功能是通过与免疫细胞表面的PD-1受体结合，抑制免疫应答过程，从而阻止免疫系统攻击正常组织。
而在肿瘤细胞表面过度表达PD-L1，往往会导致免疫系统无法有效攻击肿瘤细胞，从而促进了肿瘤的生长和扩散。
因此，针对PD-L1进行免疫治疗已经成为一个潜在的研究方向。
针对PD-L1多肽抗原的筛选是开展相关研究的第一步。
PD-L1多肽抗原主要是指由PD-L1蛋白质所含的特定肽段，它可以与免疫系统中的抗原呈递细胞相互作用，诱导机体产生针对该多肽抗原的免疫应答。
目前，研究人员通过不同的方法来筛选PD-L1多肽抗原。
其中包括生物信息学工具预测PD-L1多肽抗原的结构与特性，通过拟靶分子与PD-L1蛋白质结合实验验证多肽抗原的特异性，以及利用转基因小鼠模型评估多肽抗原的免疫诱导效果等。
在初步试验中，我们选取了多个PD-L1多肽抗原进行评估。
首先，通过生物信息学工具分析PD-L1蛋白质的序列与结构，筛选出多个具有免疫原性的PD-L1多肽抗原候选物。
接着，利用体外实验验证了这些候选物的特异性与亲和性。
结果显示，其中一种多肽抗原与PD-L1蛋白质的结合较为稳定，且具有较高的亲和力，因此被选中作为进一步试验的对象。
而后，我们使用转基因小鼠模型进行了免疫诱导效果的初步试验。
Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报收稿日期：2021-05-21基金项目：国家自然科学基金（31902247）作者简介：方谱县，男，博士后，主要从事动物冠状病毒研究通信作者：方六荣，E-mail:**************** 2023,31(6):1-10·研究论文·猪δ冠状病毒N 蛋白单克隆抗体的制备及初步应用摘 要：为制备猪δ冠状病毒（PDCoV ）N 蛋白的特异性单克隆抗体，并初步应用于临床样品中PDCoV 抗原的免疫组织化学（IHC ）检测，本研究以原核表达的PDCoV N 蛋白免疫BALB/c 小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，基于纯化的N 蛋白建立的间接ELISA 方法筛选获得稳定分泌N 蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，并对单克隆抗体的免疫反应特异性、亚类进行系统鉴定。
结果显示：通过3次亚克隆筛选获得8株可分泌PDCoV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
经IFA 和Western blot 分析，证实制备的单克隆抗体均与猪δ冠状病毒反应，且不与猪流行性腹泻病毒（PEDV ）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV ）反应，特异性良好。
单克隆抗体亚类鉴定结果表明，1A11、3C6、1E7、1E12株单克隆抗体属IgG1型，4F3、2A3株单克隆抗体为IgG2a 型，3E4单克隆抗体为IgM 型，8株单克隆抗体的轻链均为κ链。
利用1A11单克隆抗体对PDCoV 、PDEV 、TGEV 感染猪的空肠、回肠组织进行IHC 检测，结果表明1A11能与感染PDCoV 的组织发生特异性免疫反应，而不与感染PDEV 和TGEV 的组织发生反应，特异性良好。
本研究制备的PDCoV N 蛋白单克隆抗体可为PDCoV 诊断方法的建立以及N 蛋白的功能研究奠定基础。
关键词：猪δ冠状病毒；N 蛋白；原核表达系统；单克隆抗体；免疫组化中图分类号：S852.4文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）06-0001-10Preparation and Preliminary Application of Monoclonal Antibodies AgainstRecombinant N Protein of Porcine DeltacoronavirusFANG Puxian 1,2, ZHANG Huichang 1,2, XIA Sijin 1,2, JIANG Xiaocui 1,2, SUN Qianqian 1,2,XIAO Shaobo 1,2, FANG Liurong 1,2(1. State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070,China; 2. The Cooperative Innovation Center for Sustainable Pig Production, Wuhan 430070, China)方谱县1,2，张蕙畅1,2，夏思进1,2，江晓翠1,2，孙倩倩1,2，肖少波1,2，方六荣1,2（1.华中农业大学动物医学院 农业微生物学国家重点实验室，武汉430070；2.湖北省生猪健康养殖协同创新中心，武汉430070）Abstract: The objectives of this study were to prepare specific monoclonal antibodies (MAbs) against N protein of Porcine deltacoronavirus (PDCoV) and preliminarily apply them to detect PDCoV antigen in clinical samples in immunohistochemistry (IHC). BALB/c mice were immuni z ed with purifi ed recombinant N protein expressed by prokaryotic expression system followed by fusion of the harvested spleen cells and myeloma cells. The hybridomas stably secreting MAbs against N protein were selected in indirect ELISA using the purifi ed N protein. The results showed that 8 monoclonal cell lines secreting MAbs against PDCoV N protein were obtained through screenings and subsequent three cycles of subclonings. All 8 MAbs reacted with PDCoV in IFA and Western blotting but not with Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) and Porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV). In addition, the heavy chains of MAbs· 2 ·中国动物传染病学报2023年12月猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV）是近年来发现的一种重要肠道冠状病毒，感染哺乳仔猪可引发严重的腹泻、呕吐、脱水甚至死亡[1-3]。
々畜业技术I疫病防治猪瘟单克隆抗体制备实验岳铃1钟秀琼2*杨粘3黄耿耿1(1，贵州省贵阳市白云区动物疫病预防控制中心550014; 2，云南省楚雄州动物疫病预防控制中心675000;3袁贵州省贵阳市白云区动物卫生监督所550014)摘要：猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病。
研究应用猪瘟病毒E2基因构建真核表达质粒，制备成D N A疫苗，以Lipofectam ine T M 2000R e a g e n t介导免疫Balb/c小鼠，免疫5次后，用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合，用重组的E2为检测抗原，间接E L IS A筛选，有限稀释法克隆，筛选出17株抗猪瘟病毒E2的杂交瘤细胞株，为CSFV 的检测和猪瘟病毒试剂研究提供物质基础。
关键词：猪瘟病毒；E2蛋白；单克隆抗体猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病。
猪瘟呈世界性分布，其危害程度高，对养猪业造成经济损失巨大，一直是国际重点检疫对象，尽管我国兔化弱毒疫苗为控制猪瘟起到巨大作用，但猪瘟仍在我国流行严重。
猪瘟E2蛋白一直是猪瘟研究的热点。
单克隆抗体以其高度的特异性和敏感性而在C S F V生物学研究中起重要作用。
为进一步探索基因疫苗制备单克隆抗体的新方法，本实验构建了CSFV E2基因真核表达质，并用其免疫B alb/C小鼠，用原核表达的C S F V E2抗原作为检测抗原筛选，建立了2株杂交瘤细胞株，这2株单克隆抗体与C SFV能特异性反应并具有中和能力。
这是利用基因免疫制备动物病毒单克隆抗体的首次报道，为广泛利用这一技术研制单克隆抗体打下坚实基础。
1材料1.1菌种与质粒、细胞和实验动物大肠杆菌JM101、JM109、和BL21 (DE3) plysS、DH5a、BL21 (DE3) plysS 宿主菌、质粒pET-28a(+)和pV A X l由本室保存由本实验室保存。
PIK-15、SP2/0细胞由本实验室保存。
单克隆抗体的制备及其应用单克隆抗体是一种能够识别特定抗原并结合于它的单一克隆抗体分子。
相对于传统的混合抗体，单克隆抗体具有更加精准的特异性和较高的亲和力，因此在现代医学中应用广泛，尤其在疾病的诊断、治疗和预防方面发挥着重要的作用。
制备单克隆抗体的过程可以分为四个主要步骤：免疫原的制备、小鼠的免疫、脾细胞的融合和单克隆抗体的筛选和鉴定。
免疫原制备免疫原是指能够引起免疫反应并且激发机体产生抗体的物质。
制备免疫原主要有两种方法：一是纯化目标分子，二是化学合成人工抗原。
纯化目标分子是指从生物体内提取目标蛋白质，包括人类血清、细胞培养上清液或从组织中分离的蛋白质，通过高效液相层析或离子交换层析等技术达到纯度要求。
化学合成人工抗原需要建立三级结构，并且通过光谱分析等技术进行鉴定。
小鼠的免疫制作单克隆抗体时，一般使用小鼠进行免疫。
将免疫原注射到小鼠体内，通过免疫系统的识别和选择，产生能够与目标分子特异性结合的抗体，这些抗体被称为多克隆抗体。
免疫时间和免疫剂量都是需要精细控制的参数，以确保得到的多克隆抗体可以覆盖免疫原的所有表位。
脾细胞的融合脾细胞是一个重要的免疫细胞，当它遇到免疫原时，会产生抗体。
将免疫小鼠的脾脏取出，制成单细胞悬液，然后与能够维持无限增殖的癌细胞融合。
融合细胞将产生能够继承小鼠脾细胞产生的抗体特异性和癌细胞的无限增殖能力的“嵌合抗体细胞”。
单克隆抗体的筛选和鉴定通过将“嵌合抗体细胞”进行单细胞分离和分层培养，筛选出特异性结合目标分子的单抗，并经过多重鉴定，包括酶联免疫吸附实验、亲和力检测试验、特异性试验、同工酶分析、生物学鉴定和单克隆抗体的特性鉴定等多项检测，确保得到的单克隆抗体具有较高的特异性、亲和力和稳定性。
单克隆抗体的应用单克隆抗体可应用于医学、生物技术及科学研究等领域，例如基因工程药物、免疫诊断、癌症治疗、疫苗研发、食品安全检验、环境检测和生物学研究等方面。
在基因工程药物开发中，单克隆抗体能够定位特定的蛋白质，从而研制出精确治疗某种疾病的药物，例如格拉西米布是一种单克隆抗体，用于治疗类风湿性关节炎和肠炎。
PD-L1抑制剂合成的研究进展摘要：PD-L1是由290个氨基酸组成的跨膜蛋白，其主要表达于肿瘤细胞和抗原递呈细胞。
肿瘤细胞表达的PD-L1将会通过与PD-1结合的方式抑制T细胞的免疫活性。
近年来，PD-L1抑制剂的相继问世，黑色素瘤、非小细胞肺癌等癌症得到有效的治疗，癌症患者的存活期明显延长，在未来还会有更多的PD-L1抑制剂问世。
因此，我将从单克隆抗体PD-L1抑制剂、小分子PD-L1抑制剂和合成肽类PD-L1抑制剂方面分别综述PD-L1抑制剂的合成现状。
虽然在过去的十年中，人们在癌症疾病的治疗方面做出了很多努力，从癌症的诊断到治疗也取得了很大的进展，但癌症仍然被认为是世界上对人类健康的主要威胁之一。
根据世界卫生组织(WHO)的报告，2030年将有超过1300万人死于癌症[1]。
因此，发现更有效和更安全的抗癌药物仍然是迫切需要的。
标准的癌症治疗包括手术、放疗、化疗、激素治疗和靶向治疗。
近年来，随着PD-1/PD-L1的发现，免疫治疗已成为许多癌症患者的有效临床干预手段[2]，PD-1是一种免疫共抑制分子，主要分布于T细胞表面。
PD-L1是由290个氨基酸组成的跨膜蛋白，胞外区具有两个免疫球蛋白的恒定区IgV及IgC样结构域。
其主要表达于肿瘤细胞和抗原递呈细胞。
在疾病状态下，肿瘤细胞PD-L1过度表达，与T细胞表达的PD-1结合，反向抑制T细胞的抗肿瘤活性，进而加剧肿瘤恶化。
PD-L1抑制剂通过作用于肿瘤细胞表面的PD-L1靶点，阻碍其与T细胞的PD-1结合，促进T细胞恢复免疫活性，进而清除肿瘤细胞（图1）。
PD-L1抑制剂可以用于多种疾病，包括黑色素瘤，非小细胞肺癌，肾癌癌症，泌尿系癌，头颈癌，肝细胞癌和霍奇金淋巴瘤。
图 1 PD-1/PD-L1致病机制以及其抑制剂的作用机理1 单克隆抗体有研究表明，PD-L1可以协助肿瘤细胞进行免疫逃逸，同时，也有研究表明PD-L1的表达与疾病进行以及预后效果息息相关[3]。
