培养基的常规配制程序
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培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基:乳糖=5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数,使分装装量为1.0g,分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下,把准备好的无菌培养基用无菌注射器(规格为5ml)分装到各管制瓶中,每瓶分装5ml,然后加塞,轧盖。
8.2.3阴性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养,作为阴性对照。
8.2.4阳性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支分装有培养基的管制瓶,其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液,另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液,作为阳性对照。
培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基:乳糖=5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数,使分装装量为1.0g,分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下,把准备好的无菌培养基用无菌注射器(规格为5ml)分装到各管制瓶中,每瓶分装5ml,然后加塞,轧盖。
8.2.3阴性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养,作为阴性对照。
8.2.4阳性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支分装有培养基的管制瓶,其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液,另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液,作为阳性对照。
培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基的配制过程1.材料准备:配制培养基需要准备一系列的材料,包括溶液、固体成分和试剂。
常见的溶液成分有蛋白胨、蔗糖、葡萄糖、酵母提取物等。
固体成分通常包括琼脂、琼脂糖或者琼脂葡萄糖。
试剂则包括酸碱试剂、染色剂等。
2.秤重和称量:根据配方,使用准确的天平将所需的材料进行称量。
确保称量的准确性,以避免配制出来的培养基浓度不合适。
3.溶解固体成分:将固体成分加入适量的蒸馏水中,并通过搅拌等方法将其充分溶解。
4.调整pH值:测定溶液的pH值,并根据实验需求进行调整。
通常使用盐酸或氢氧化钠进行酸碱调节。
5.添加其他成分:根据实验需求,将其他需要的溶液成分添加到培养基中。
比如,添加抗生素、试剂等。
6.蒸馏水补足体积:根据所需体积,使用蒸馏水补足培养基的总体积。
在此过程中,需使用一种无菌的容器。
7.烧瓶或培养皿灭菌:将配制好的培养基倒入烧瓶或培养皿中,并进行灭菌处理。
灭菌的方法包括高压灭菌器、滤过消毒器、微波炉等。
8.装瓶和标记:将灭菌好的培养基倒入培养瓶中,并进行标记。
标记应包括培养基的配制日期、配方、pH值等重要信息。
在配制培养基的过程中,需要注意以下几个关键点:1.保持无菌:在配制培养基的过程中,需要使用无菌的材料和操作台,以避免杂菌的污染。
同时,注意避免培养基与外界环境接触,以防止污染。
2.准确称量:为了确保培养基的配制浓度准确,需要使用准确的天平进行称量。
避免因称量不准确而导致培养基浓度上下起伏,影响到微生物的生长。
3.pH值调节:培养基的pH值对微生物的生长有重要影响,因此在配制培养基时,需要测定pH值,并根据实验需求进行调节。
4.灭菌处理:在配制好的培养基倒入培养瓶中之前,必须进行灭菌处理,以杀灭可能存在的微生物。
灭菌方法有多种,可以根据实验需求和设备条件选择适当的灭菌方法。
总结起来,培养基的配制过程需要准备材料、秤重和称量、溶解固体成分、调整pH值、补足体积、灭菌处理、装瓶和标记等步骤。
在配制过程中需要注意无菌、准确称量、pH值调节和灭菌处理等关键点。
培养基的配制过程及注意事项
培养基是一种用于培养微生物和其他生物体的溶液,通常包含营养物质、溶剂和添加剂等成分。
配制培养基的过程需要遵循一定的步骤和技巧,以确保培养基的质量和稳定性。
以下是培养基的配制过程简述:
1. 收集和准备成分:培养基的主要成分包括营养物质、溶剂和添加剂等。
营养物质通常包括葡萄糖、氨基酸、维生素、矿物质等,溶剂通常是水,而添加剂可以是抗生素、激素、缓冲剂等。
这些成分的质量和配比对培养基的质量至关重要。
2. 计量和称量:准备好所需成分后,需要按照一定比例进行计量和称量。
计量和称量的准确性对于培养基的质量和稳定性非常重要,因此需要使用精确的计量和称量工具。
3. 溶解和混合:将称量好的营养物质、溶剂和添加剂等成分倒入容器中,然后进行充分溶解和混合。
在溶解和混合过程中,需要注意不要混入气泡和沉淀物,以免影响培养基的质量和稳定性。
4. 调整 pH 值:培养基的 pH 值对微生物的生长和代谢有重要影响,因此需要对培养基进行适当调整。
通常可以使用氢氧化钠或氢氧化钾等化学试剂进行调整,但要注意控制 pH 值的范围,避免过高或过低的 pH 值对微生物的影响。
5. 冷却和储存:将配制好的培养基冷却至适当的温度,通常是室温或稍低,然后密封储存在冰箱里。
储存的温度和时间是培养基制备过程中非常重要的因素,过长的储存时间和温度过高都会影响培养基的质量和稳定性。
培养基的配制过程需要认真、细心的工作态度,以确保培养基的质量和稳定性。
同时,不同种类的培养基还需要根据不同的微生物和实验需要进行专门的配
制和调整。
简述培养基的配置流程英文回答:Media Preparation Workflow.1. Gather materials: Collect all necessary components, including base powder, supplements, and sterile water.2. Calculate volumes: Determine the exact volumes of each component required based on the manufacturer's instructions.3. Heat water: Heat the required volume of sterile water to the appropriate temperature, usually around 50-60°C.4. Dissolve base powder: Slowly add the base powder to the heated water while stirring continuously to avoid clumping.5. Adjust pH: If necessary, adjust the pH of the medium to the desired value using either acidic or alkaline solutions.6. Add supplements: Add any required supplements to the medium, such as serum, antibiotics, or growth factors.7. Sterilization: Sterilize the prepared medium usingan autoclave, filtration, or other appropriate methods.8. Dispense: Dispense the sterilized medium into appropriate containers, such as petri dishes, tubes, or flasks.中文回答:培养基配置流程。
简述培养基的配置流程培养基的配置流程包括准备原料、称量、溶解、调pH值、灭菌和包装等步骤。
The process of preparing culture medium includes preparing raw materials, weighing, dissolving, adjusting pH, sterilizing, and packaging.首先,准备所需的化学药品和生物学制剂,例如琼脂、葡萄糖、氨基酸等。
First, prepare the necessary chemicals and biological agents, such as agar, glucose, amino acids, etc.然后,按照配方要求,精确称量各种原料,并分装到培养瓶中。
Then, accurately weigh the various ingredients according to the formula and dispense them into culture bottles.接着,用适量的蒸馏水溶解固体成分,并在高温高压下灭菌。
Next, dissolve the solid ingredients in an appropriate amount of distilled water and sterilize them under high temperature and pressure.随后,根据实验要求,调节培养基的pH值,使其适合微生物的生长。
Subsequently, adjust the pH of the culture medium according to the experimental requirements to make itsuitable for microbial growth.最后,将培养基分装到培养皿或试管中,用铝箔包好,完成制备过程。
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备:首先,需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外,还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂:按照配方中的比例,准确地称取所需的试剂。
在称量过程中,应注意保持实验环境的清洁,并使用洁净的称量工具,以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂:将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中,可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后,应检查溶液的透明度和均匀性,确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值:根据具体的培养基配方,使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液,并经过搅拌均匀,逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中,应注意避免过度调节,以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒:将配制好的培养基加热至沸腾,保持沸腾状态持续5-10分钟,以达到消毒的目的。
在加热过程中,应注意避免溢出和烧焦,同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却:将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度,通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中,应避免引入环境中的微生物污染,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存:将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中,并密封保存。
在分装过程中,要注意避免试剂接触到外界空气,以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁,操作过程要注意无菌操作,以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中,应准确称取试剂的质量,并按照配方中的比例进行配比,以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时,应充分搅拌均匀,确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时,应注意控制加热时间和温度,以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中,要避免污染和细菌的侵入,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行,并尽快密封保存,避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
培养基的配制培养基是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺,服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散淀粉溶解:少量的冷水进粘贴琼脂融化温度为95-97℃,加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤滤纸或棉。
(有时可以省略)5. 分装一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶静态培养时,100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml否则,在灭菌过程中,培养基的煮沸极易污染棉塞,造成细菌污染;如果进行瓶培养,15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装液体培养基通常填充4-5ml,约为试管高度的1 / 4;一般固体斜培养基为3-4ml,约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎包装完毕后,塞好棉塞,用牛皮纸包好棉塞,防止灭菌时湿气进入,弄湿棉塞。
7. 灭菌高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高,营养成分就会被破坏培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜灭菌后,需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置,使其固化成一个斜坡,约占试管长度的1 / 2。
9. 存储中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好,置于2-8℃冰箱中保存。
培养基的配制过程
培养基的配制过程
培养基是实验中常用的培养材料,其质量和性能对试验数据的准确性有很大的影响。
合理配制培养基,是保证实验质量和可靠性的重要一步。
以下分步介绍培养基配制过程。
第一步,准备原料。
准备所需培养基原料,包括氮来源、碳来源、催化剂、维生素、矿物质和无机盐。
这些原料及添加量应按照培养基配方要求准备好。
第二步,蒸馏水灭菌。
所有材料,包括悬浮成分在内的所有培养基,都应使用蒸馏水加热灭菌。
第三步,全部成分混合。
将所有成分混合搅拌均匀,直到培养基完全溶解,形成无色透明液体。
第四步,灭菌处理。
将混合后的培养基放入灭菌器中,以121℃、
15psi的压力对培养基进行30-60分钟的高温杀菌处理。
第五步,检测培养基。
检测培养基的 pH 值,通常可用 pH 计或试纸检测。
第六步,培养基存储。
将灭菌后的培养基储存在4℃的冰箱内,以避免受到可能的污染。
以上就是培养基的配制过程,它可以有效地确保培养基的质量和可靠
性,从而确保实验效果的准确性。
正确的配制培养基非常重要,只有这样才能确保实验的可靠性和准确性。
培养基的常规配制程序
一、目的要求
了解培养基的配制原理。
了解培养基常规配制程序。
了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。
二、基本原理
正确掌握培养基基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础,由于微生物种类及代谢类型的多样性,因而用于培养微生物培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异。
但一般培养基的配制程序却大致相同,例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相向。
三、实验材科
(一)药品
待配各种培养的组成成分,琼脂,1mol/L NaOH溶液,1mol/l (升,统一用大写)HCl 溶液。
(二)仪器
天平或台秤,高压蒸汽灭菌锅。
(三)玻璃器皿
移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
(四)其他物品
药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。
四、实验内容
(一)玻璃器皿的洗涤和包装
1.玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中,用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。
再用自来水及蒸馏水冲洗,洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2.灭菌前玻璃器皿的包装
(1)培养皿的包装培养皿由一盖—底组成一套。
可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
(2)移液管的包装在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脱脂棉)。
它的作用是避免外界及口中杂菌吹入管内,并防止菌液等吸入口中。
塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左有。
棉花自身长度约1-1.5cm。
塞棉花时,可用一外圈拉直的曲别针,将少许棉花塞入管口内。
棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端,约成45度角,折叠纸条包住尖端,用左手握住移液管身,右手将移液管压紧,在桌面上向前搓转,以螺旋式包扎起来。
上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌(见图5—1—1)。
(二)液体及固体培养基的配制过程
1.液体培养基配制
(1)称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药品。
先按培养基配方计算各成分的用量,然后进行准确称量。
(2)溶化将称好的药品置于一烧杯中,先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水),用玻棒搅动,加热溶解。
(3)定容待全部药品溶解后,倒入一量筒中,加水至所需体积。
如某种药品用量太少时,可预先配成较浓溶液,然后按比例吸取一定体积溶液,加入至培养基中。
(4)调pH 一般用pH试纸测定培养基的pH。
用剪刀剪出一小段pH试纸,然后用镊子夹取此段pH试纸,在培养基中蘸一下,观看其pH范围,如培养基偏酸或偏碱时,可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液进行调节。
调节pH时,应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分。
边加边搅拌,并不时用pH试纸测试,直至达到所需pH为止。
(5)过滤用滤纸或多层纱布过滤培养基。
一般无特殊要求时,此步可省去。
2.固体培养基的配制
配制固体培养基时,应将已配好的液体培养基加热煮沸,再将称好的琼脂(1.5%-2%)加入,并用玻棒不断搅拌,以免糊底烧焦。
继续加热至琼脂全部融化,最后补足因蒸发而失去水分。
(三) 培养基的分装
根据不同需要,可将己配好培养基分装入试管或锥形瓶内,分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口,造成污染。
如操作不小心,培养基沾污管口或瓶口时,可用镊子夹一小块脱脂棉,擦去管口或瓶口的培养基,并将脱脂棉弃去。
1.试管的分装
取一个玻璃漏斗,装在铁架上,漏斗下连一根橡皮管,橡皮管下端再与另一玻璃管相接,橡皮管的中部加一弹簧夹。
分装时,用左手拿住空试管中部,并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内,以右手拇指及食指开放弹簧夹,中指及无名指夹住玻璃管嘴,使培养基直接流入试管内(图5—1—2)。
装入试管培养基的量视试管大小及需要而定,若所用试管大小为15×150 mm 时,液体培养基可分装至试管高度1/4左右为宜;如分装固体或半固体培养基时,在琼脂完全融化后,应趁热分装于试管中。
用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1/5(约3—4m1);半固体培养基分装量为管高的1/3为宜。
2.锥形瓶的分装
用于振荡培养微生物用时,可在250 m1锥形瓶中加入50 ml的液体培养基,若用于制作平板培养基用时,可在250 m1锥形瓶中加入150ml培养基,然后再加入3g琼脂粉(按2%计算),灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。
(四)棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎
为了培养好气性微生物,需提供优良通气条件,同时为防止杂菌污染,则必须对通入试管或锥形瓶内空气预先进行过滤除菌。
通常方法是在试管及锥形瓶口加上棉花塞等。
1.试管棉塞的制作
制棉塞时,应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块,铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上,用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞,然后直接压入试管或锥形瓶口。
也可借用玻璃棒塞入,也可用折叠卷塞法制作棉塞(图5—1—3)。
制作的棉塞应紧贴管壁,不留缝隙,以防外界微生物沿缝隙侵入。
棉塞不宜过紧或过松,塞好后以手提棉塞,试管不下落为准。
棉塞的2/3在试管内,1/3在试管外(图5—1—4)。
目前也有采用金属或塑料试管帽代替棉塞。
直接盖在试管口上。
灭菌待用。
将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管拥成一捆,外面包上一层牛皮纸。
用铅笔注明培养基名称及配制日期,灭菌待用。
2.锥形瓶棉塞制作
通常在棉塞外包上一层纱布,再塞在瓶口上。
有时为了进行液体振荡培养加大通气量,则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上。
目前也有采用无菌培养容器封口膜直接盖在瓶口,既保证良好通气,过滤除菌又操作简便,故极受欢迎。
在装好培养基并塞好棉塞或包上八层纱布或盖好培养容器封口膜的锥形瓶口上,再包上一层牛皮纸并用线绳捆好,灭菌待用。
(五)培养基的灭菌
培养基经分装包扎之后,应立即进行高压蒸汽灭菌,100Pa灭菌20min(灭菌条件根据培养基不同有所差异,含糖培养基105℃,30min)。
如因特殊情况不能及时灭菌,则应暂存于冰箱中。
(六)斜面和平板的制作
1.斜面的制作
将已灭菌装有琼脂培养基的试管,趁热置于木棒上,使成适当斜度,凝固后即成斜面(图5—1—5)。
斜面长度不超过试管长度1/2为宜。
如制作半固体或固体深层培养基时,灭菌后则应垂直放置至冷凝。
2.平板的制作
将装在锥形瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后,待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。
温度过高时,皿盖上的冷凝水太多,温度低于50℃,培养基易于凝固而无法制作平板。
平板的制作应采用无菌操作,左手拿培养皿,右手拿锥形瓶的底部或试管,左于同时用小指和手掌将棉塞打开,灼烧瓶口,月左手大拇指将培养皿盖打开一缝,至瓶口正好伸入,倾入10-12m1的培养基,迅速盖好皿盖,置于桌上,轻轻旋转平皿、使培养基均匀分布于整个平皿中、冷凝后即成平板(图5—1—6)。
(七)培养基的无菌检查
灭菌后的培养基,一般需进行无菌检查。
最好从中取出1-2管(瓶),置于37℃恒温箱中培养1—2天,确定无菌后方可使用。
(八)无菌水的制备
在每个250 mL的锥形瓶内装99mL的蒸馏水并塞上棉塞。
在每支试管内装4.5m1蒸馏水。
塞上棉塞或盖上塑料试管盖。
再在棉塞上包上一张牛皮纸。
高压蒸汽灭菌,100 Pa灭菌20分钟。