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间充质干细胞成骨及成脂诱导培养基标准制作方法浏览： 185|更新： 2013-07-01 11:12间充质干细胞培养细胞诱导分化时必然用到的就是培养液，配置出合适的培养液能够促进细胞的分化，因此这一步操作时相当的关键。
如何才能配置适合的诱导培养液呢？济南中赛生物来介绍成骨与成脂诱导培养液的配备方法。
成骨诱导培养液配备与诱导操作：1.准备含 10%FBS的α -MEM培养液；2.在备好的α -MEM培养液中添加 50μ M 抗坏血酸 , 10mmβ - 磷酸甘油和 100nm地塞米松；3.准备 6 孔培养板，将 P4 细胞按照 5× 103 个 / 平方厘米的规格接种于原始α -MEM 培养液中；4.待细胞长至基本融合后，更换上述制备完成的成骨诱导培养液；5.每三天换液一次，细胞长至 7 天时进行碱性磷酸酶染色；6.二十八天后再进行矿化结节的茜素红染色。
茜素红染色方法介绍：1. 去除细胞当前使用培养液，使用PBS清洗两次；2.使用 10%甲醛室温固定 15 分钟，完成后使用重蒸馏水冲洗两次；3. 按照 1ml/ 孔加入 40mM的茜素红染色液，室温孵育20min 并轻微振荡；4. 清除掉没有完全结合的染料，用重蒸馏水漂洗并振荡5min 重复 4 次；5.倾斜放置 2min, 吸取多余的重蒸馏水；倒置显微镜观察拍照记录。
成脂诱导培养液配备与诱导操作：1.配置 FBS10%含量的 HG-DMEM培养液；2.在配制完成的 HG-DMEM培养液中加入 1μ M地塞米松 ,10 μg/ml 胰岛素， 200μ M吲哚美辛和 0.5mM IBMX；3. 准备 6 孔培养板，将P4 细胞按照 2× 104 个 / 平方厘米的规格接种于原始HG-DMEM 培养液中4. 待细胞长至基本融合后，更换上述制备完成的成脂诱导培养液培养 2 天，在用只含有 10μg/ml 胰岛素的成脂维持培养液培养 1 天，如此交替循环培养至14 天，使用红油 O染色。
生长因子诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究尹战海;曹峻岭;刘淼;张璟;郑钧【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2002(023)002【摘要】目的建立一种体外分离兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,诱导其表达软骨细胞表型.方法抽取兔骨髓,经密度梯度离心和粘附分离得到MSCs.用生长因子诱导,观察细胞的增殖情况和软骨特异性基质的表达水平.结果①纤维粘连蛋白促进MSCs贴壁,可提高细胞分离率;②TGF-β1,IGF-Ⅰ和维生素C结合可促进MSCs增殖,表达软骨特异性的Ⅱ型前胶原mRNA和基质蛋白多糖成分.结论①密度梯度离心结合粘附分离可提高MSCs的分离效率.②TGF-β1,IGF-Ⅰ和维生素C结合诱导可促进MSCs增殖,表达软骨细胞表型.【总页数】4页(P117-120)【作者】尹战海;曹峻岭;刘淼;张璟;郑钧【作者单位】西安交通大学,第一医院骨科,西安,710061;西安交通大学,医学院地方病研究所,西安,710061;西安交通大学,第一医院骨科,西安,710061;西安交通大学,第一医院血液内科,西安,710061;西安交通大学,第一医院骨科,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R681.3【相关文献】1.不同浓度转化生长因子β1体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究 [J], 吴星欣;师树田;缪黄泰;王晓;辛毅;甄雷;任红梅;聂绍平2.髁突软骨诱导外源性骨髓间充质干细胞成软骨分化的实验研究 [J], 张赵一淳;鹿蕾;于世宾;杨鸿旭;叶涛;冯剑颖3.电针诱导骨髓间充质干细胞分化为血管生长因子的机制研究 [J], 王秀珍;贾坤平;赵楠;倪虹;王虹;王亚楠;王树人;彭宇飞;吴全娥4.丁酸钠协同成纤维细胞生长因子2体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究 [J], 赵亚如;刘洋;吕洋;王文华;王浩宇;王巧敏;王海萍5.鼠神经生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究 [J], 陈再丰;许信龙;魏晓捷;傅小君;潘红松;谢青松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程干细胞是一种具有自我更新能力和多潜能分化的细胞，可以分化成为各种类型的细胞，包括脂肪细胞和骨细胞。
间充质干细胞（MSCs）是一种重要的干细胞类型，它们存在于各种组织中，如骨髓、脂肪组织和胎盘组织等。
间充质干细胞成脂成骨分化的实验方法学开发，是生物医学研究中一个重要的课题。
本文将从方法学开发的思路和流程入手，对间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学进行探讨。
一、研究背景间充质干细胞成脂成骨分化是指间充质干细胞在一定的诱导条件下分化为脂肪细胞或骨细胞的过程，这一过程在细胞生物学和再生医学领域具有重要意义。
成脂成骨分化的研究有助于深入了解骨质疏松症、骨折愈合和脂肪代谢等疾病的发病机制，同时也为干细胞治疗提供了理论基础。
因此，开发一套可靠的实验方法学对于间充质干细胞成脂成骨分化研究至关重要。
1.确定分化诱导条件间充质干细胞在体外培养时，可通过添加不同的生长因子、细胞因子或药物来诱导其分化为脂肪细胞或骨细胞。
因此，确定最佳的分化诱导条件是方法学开发的第一步。
此过程需要考虑到诱导因子的种类、浓度、培养时间等因素，以及不同来源的间充质干细胞在分化过程中的差异性。
2.确定评价指标分化过程中，需要通过一系列的生物化学和分子生物学方法来评价间充质干细胞的脂肪细胞或骨细胞特征。
这些评价指标包括脂肪细胞的油红O染色、脂肪球形成实验，以及骨细胞的矿化实验、ALP染色等。
确定合适的评价指标对于评估分化效果至关重要。
3.确定实验方案在确定了分化诱导条件和评价指标后，需要制定详细的实验方案。
包括细胞的处理方法、诱导条件的优化、实验的时间节点等，以便后续实验的顺利进行。
1.间充质干细胞的提取和培养首先需要从适当的组织中分离和提取间充质干细胞，并进行细胞培养。
这一步需要注意细胞的纯度和活性，以保证后续实验的准确性。
2.分化诱导实验将培养好的间充质干细胞分别进行脂肪和骨分化诱导实验，根据预先确定的诱导条件进行处理。
