血培养操作规程
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. 血液标本检验程序
1.概述：正常人的血液及骨髓是无菌的，当细菌侵入血液时，则可引起菌血症，败血症或毒血症，侵入骨髓可引起严重的骨髓炎。因此细菌学检验对其诊断和治疗具有重要的意义。
检验目的：检出血液及骨髓标本中的病原微生物并进行体外药物敏感性试验，为临床抗生素使用提供依据。
2.目的：规范微生物血液标本检验程序，以保证微生物检验工作和检验质量的正确进行。
3.范围：适用于血液和骨髓标本。
4.程序原理：根据培养阳性细菌的形态特点、菌落特征及生化反应特点，鉴定细菌种类，后根据CLSI推荐选择抗生素试验方法。
5.血液培养报告要严格遵守三级报告制度和危急值报告制度。
6.所用设备：Versa-TREK血培养仪、VITEK2全自动细菌鉴定/药敏分析系统、YQS-II厌氧培养箱、II级生物安全柜、显微镜、恒温培养箱、红外线高温灭菌灯、接种环。
7.试剂：成人需氧和厌氧血培养瓶、革兰染色液、各种培养基、Vitek 2鉴定卡、K-B药敏和MIC药敏试验试剂、厌氧指示剂 、无菌盐水、接种槽、反应板、触酶试剂、氧化酶试剂、凝固酶试剂、药敏纸片等等。
8.标本采集：见微生物标本采集和送检程序（YLJY-WSW-PF-6-8）。
9.检验程序：
9.1本实验室所有血液和骨髓标本均同时进行需氧和厌氧培养(厌氧培养瓶内含85％的N2、1O％CO2、5％H2的厌氧气体)。接到血培养标本后，根据采样时间，在室温放置20-30分钟。
9.2将病人信息输入，在仪器上扫描培养瓶条型码。具体操作按Versa-TREK血培养仪标准操作规程进行。
9.3培养瓶进入Versa-TREK血培养仪系统后，当被注入样本的培养瓶中有微生物存在时，它们就会在培养液中进行新陈代谢，释放处二氧化碳，CO2 + H2O=H2CO3，解离后成H+和HCO3—，在酸性环境下使培养瓶底部灰绿色变成不可褪色的黄色，仪器每10分钟读取数据，一旦计算机系统对检测到的原始数据采用一定的计算法判断被检测样本是否有微生物的存在，此时仪器会自动以声音和屏幕变黄报警，提示有阳性瓶出现。
9.4根据“Versa-TREK血培养仪标准操作规程”卸下阳性瓶，根据所检阳性瓶结果选择培养基。如果需氧瓶阳性则选择血琼脂平皿、巧克力琼脂平皿、如果厌氧瓶阳性选择血琼脂平皿、巧克力琼脂平皿、麦康凯平皿和哥伦比亚厌氧血平皿；如果涂片看到真菌样孢子或菌丝，则增加沙保弱琼脂平皿，必要时加玉米和土豆琼脂平皿，置孵箱350C培养。厌氧菌培养经48-72小时培养后，打开厌氧箱，并作耐氧试验，将同一菌落分别置需氧培养18-24小时及置厌氧培养48-72小时。同时作涂片和初步药物敏感试验，将涂片结果电话报告临床医生，此报告为一级报告，并根据科内和微生物电话报告制度进行记录。8小时后报告初步药敏结果为二级报告。
9.5 转种平皿经18-24小时孵育后，作进一步鉴定和正式药敏试验。不同细菌鉴定参照其相应检精品文档
. 查程序进行，做出最终报告。
9.6厌氧菌鉴定选择耐氧试验阳性菌株，行厌氧菌鉴定（Vitek2。若系统最终报告为阴性，也应转种厌氧血琼脂证实无菌生长后方可报告阴性结果。推荐厌氧菌血液培养最终报告时间为1周。厌氧菌感染对临床有重要意义应予高度关注，及时与临床联系。
9.7若培养瓶在预置时间内未呈现阳性结果，除特殊情况需将瓶内培养液转种血琼脂平皿， 一般情况无细菌生长即可报告经XX天培养无细菌生长。
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榆林市第一
医院检验科
微生物室程序文件 七 微生物室临床标本检验中程序
02血液标本检验程序 文件编号：YLJY-WSW-PF-7-2
版本-修改号：1-01
生效日期：2014-04-01
9.9血液及骨髓检验流程图
血液和骨髓
增菌培养（需氧及厌Versa-TREK自动血液培养系统指示有菌生长
涂片、染色、镜检（一级报告）分离培养 直接药敏试验
需氧培养及CO2培养（血琼脂、巧克力琼脂、真菌培养厌氧培养（贴鉴定和药敏纸35℃ 4~6小时
初步报告（二级报告）记录 观察菌落
涂片、染色、镜检、描述 纯培养物
VITEK 2
全自动细菌鉴定/药敏分析系统 涂片、染色、镜检、生化试验
（API
最终报告（三级报告）记录
最终报告（三级报告）检验
医师履行危急值追踪报告制度 精品文档
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9.10各种细菌检测参照其各自检测程序进行。
9.11血液培养阳性属微生物危急报告值，检验医师和技师要特别记录加以追踪，如果怀疑污染应立即通知临床再次送检。
10.质量控制： Versa-TREK全自动血液培养系统质量控制、VITEK 2鉴定系统质量控制、涂片染色质量控制、培养基质量控制、K-B法和MIC药敏试验质量控制、氧化酶试验质控、触酶试验质控，具体操作参照各自程序。
11.报告制度：
11.1培养系统提示有细菌生长，要立即涂片，革兰染色镜检，电话通知主管医生，为一级报告；将可疑生长的培养瓶转种相应培养基上，并作初步药敏试验，经6-8小时培养后，将结果电话通知主管医生，提示高度敏感的抗菌药物，为二级报告；完成鉴定及标准化的药敏试验，并发出正式的细菌检验报告单为三级报告。
11.2若培养5天仍无细菌生长者，报告无菌生长。
11.3 临床诊断为亚急性细菌性心内膜炎者，可继续培养至2周再发出阴性报告，但自动血液培养仪在5天作出阴性报告，因此可以人工延长时间。
12.常见细菌与临床意义：
12.1血液培养是用来发现、识别细菌或其它可培养分离的微生物，这些微生物侵入血液中，迅速繁殖超出免疫系统清除这些微生物的能力时形成菌血症或真菌菌血症。
12.2常见的革兰阳性菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群B群链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、炭疽芽孢杆菌、厌氧链球菌、产单核李斯特菌、丙酸杆菌、念珠菌、结核分枝杆菌等。
12.3常见的革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌、卡他布兰汉菌、伤寒及其他沙门菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌科细菌、沙雷菌、铜绿假单胞菌、其他假单胞菌、不动杆菌、流感嗜血杆菌、布氏杆菌等。
12.4葡萄球菌：葡萄球菌属于微球菌科，已知葡萄球菌属有28个种，其中14个种可从人类临床标本中分离到。以血浆凝固酶作为分离标准可将其分为二大类：一类是金黄色葡萄球菌：引起人类感染的最主要的葡萄球菌，占葡萄球菌菌血症的90％。耐甲氧西林金黄色葡萄球（MRSA）常呈多重耐药，使用万古霉素治疗死亡率仍可达10％-30％，因此MRSA的确定要及时准确。另一类是凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）：葡萄球菌菌血症的患者中有10％是由于凝固酶阴性葡萄球菌所致，多见化疗、激素、放射治疗者。CNS已成为医院导管治疗的主要致病菌，耐苯唑青霉素的凝固酶阴性的葡萄球菌（ MRCNS）其耐药性较MRSA更高。
12.5链球菌：A群链球菌是引起化脓性感染的主要细菌，致病力强。B群链球菌（无乳链球精品文档
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菌），近十年来感染也有所增加。绿色链球菌可致亚急性细菌性心内膜炎。其中缓症链球菌、唾液链球菌、犬血链球菌、米勒链球菌多见，缓症链球菌耐药性强。
肺炎链球菌可导致血流播散，而导致败血症。此外还应注意发现营养变异链球菌；该种细菌的生长需要补充巯醇复合物和维生素B6。血培养基中含有足够的营养成分使营养变异链球菌生长。然而传代培养时，培养基中需要补充盐酸-磷酸吡哆醛（0.001%）或L半胱氨酸（0.05%至0.1%）或二者皆有，否则营养变异链球菌不能生长。也可将血培养物传种至血琼脂平板上，然后交叉划线接种金黄色葡萄球菌，在金黄色葡萄球菌菌落周围有营养变异链球菌卫星样菌落。
12.6肠球菌是医院内感染中常见病原菌之一。引起人类感染的主要是粪肠球菌、屎肠球菌和鸟肠球菌,庆大霉素高耐菌株(HLAR)多见屎肠球菌。万古霉素是高耐肠球菌的首选药物。
12.7奈瑟菌属： 脑膜炎球菌是引起脑膜炎的病原菌，可侵入血液，冬春季为发病高峰期。卡他布兰汉菌感染引起中耳炎、化脓性支气管炎和肺炎时可入血液。
12.8革兰阳性杆菌： 产单核李斯特菌在近年的感染中呈下降趋势。炭疽杆菌为人畜共患传染病，分皮肤炭疽、肺炭疽、纵隔炭疽和肠炭疽，三型均可能并发败血症。从艾滋病发现以来，已从部分例数患者血液中分离出鸟复合分枝杆菌及结核杆菌等，因此血液分枝杆菌培养已引起广泛重视。分枝杆菌的血液感染常发生于初染结核病患者、免疫力低下患者，艾滋病患者为易感染者，鸟分枝杆菌对抗结核药物不敏感或产生耐药。
12.9革兰阴性杆菌： 在常规血液培养中革兰阴性菌引起的菌血症约占71.4％。肠道革兰阴性杆菌引起肠外感染而导致败血症的主要菌种有伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、大肠埃希菌、气单胞菌、布鲁菌和沙雷菌等。非发酵革兰阴性杆菌：铜绿假单胞菌常发生于大面积创伤后。可术后经感染、褥疮、脓肿等导致血行播散。不动杆菌属当人体抵抗力下降时，因局部感染而导致血液感染，败血症发生率有上升趋势。嗜麦芽窄食单胞菌呈多重耐药，产金属ß-内酰胺酶是其主要耐药机制，首选治疗药物是复方磺胺甲恶唑、替卡西林钠／克拉维酸钾（特美汀）和多西环素（强力霉素）。洋葱伯克霍德菌可引起免疫低下患者心内膜炎和败血症。其他革兰阴性杆菌 流感嗜血杆菌：可入侵血流。心杆菌属：当机体抵抗力下降时，可引起心内膜炎入血流。链杆菌属代表菌种是念珠状链杆菌，对各种抗菌药物均较敏感。多杀巴斯德菌可通过猫或狗咬伤、抓伤感染或与动物接触的工作人员，可引起菌血症和败血症。放线杆菌属有5个种即李氏放线菌（A．Lignieresii）、马驹放线杆菌（A.equuli）、猪放线杆菌（A.Sals）、荚膜放线杆菌（A.Capsulatus）和伴放线放线杆菌（A.actinomycete-mcomitans），除荚膜放线杆菌外，其他4个种均可引起人类败血症或心内膜炎。
12.10细菌L型：血液中很少分离出细胞壁缺陷的细菌。含10%蔗糖或甘露醇渗透压恒定的培养基，适合培养细胞壁缺陷的细菌。该培养基也适合某些细胞壁完整的细菌生长，因此在这类培养
