HPLC测定穿心莲内酯原料药的含量

RP—HPLC法测定不同产地穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量目的：建立高效液相色谱法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心蓮内酯含量的方法。

方法：采用AgiLent C18（250mm×4.6mm，5·m）色谱柱，甲醇-水（56：44）为流动相，流速为0.8 mL/min，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的检测波长分别为225nm、250nm。

结果：穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别在0.172μg～1.892μg、0.186μg～2.046μg的范围内呈良好的相关性，相关系数分别为0.9997、0.9998，平均回收率分别为98.53%、99.11%，RSD分别为0.63%、0.57%。

结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于穿心莲药材的质量控制。

标签：RP-HPLC法穿心莲穿心莲内酯脱水穿心莲内酯含量测定穿心莲为爵床科植物穿心莲（Andrographis paniculata（Burm.f.）Nees）的干燥地上部分[1]。

又名春莲秋柳、一见喜、榄核莲、金香草、印度草、苦草等。

有清热解毒，消肿止痛之功效。

主治细菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎及流行性感冒等多种感染性疾病，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。

穿心莲主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种栽培，但质量差异较大。

故建立合理的穿心莲质量分析评价方法，将有利于中药材生产、加工及其制剂质量控制[2-4]。

穿心莲主要活性成分为穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，其含量常作为控制药材及制剂质量的指标。

通过查阅资料，在对不同产地药材研究中一般采用紫外、薄层扫描法，本研究采用高效液相色谱法测定两种成分含量对不同产地穿心莲药材进行对比研究，作为评价该药材的质量标准依据，通过试验证明此方法稳定可靠、重现性好，为穿心莲制剂的生产投料及质量控制提供依据。

1 材料与方法1.1 实验材料高效液相色谱仪：美国安捷伦（1）1200高效液相色谱仪；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；MeltterAE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。

HPLC法测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量摘要目的：建立测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的方法。

方法：采用HPLC法，色谱柱Phenomenex Gemini 5u 250mm×4.6mm C18柱，甲醇-水(52:48)为流动相，流速1.0ml/分，检测波长：穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯250nm。

结果：穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别在0.236～2.360μg和0.1528～1.5280μg与峰面积线性关系良好；平均回收率分别为101.57%和98.37%，RSD分别为0.12%和1.02%。

结论：本法操作简便、准确，能有效地控制该制剂的质量。

关键词复方穿心莲片穿心莲内酯脱水穿心莲内酯高效液相色谱复方穿心莲片由穿心莲、路边青两味中药组成，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第19册，具有清热解毒、利湿之功效。

用于治疗风热感冒、咽喉疼痛、湿热泄泻［1］。

穿心莲的高效液相测定方法报道很多［2］，复方穿心莲片的高效液相单测定穿心莲内酯含量或脱水穿心莲内酯含量亦有报道［3］，但关于复方穿心莲片用高效液相测定方法同时测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量尚无报道［4］。

本实验采用HPLC法对复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量进行测定。

结果表明，本法准确、精密、重现性好。

仪器与试剂LC-10A高效液相色谱仪及SPD-10A紫外检测器，HL-3000色谱工作站。

穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品由中国药品生物制品检定所提供。

复方穿心莲片由贵港市冠峰制药有限公司提供。

甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。

方法与结果色谱条件：色谱柱：C18(Phenomenex Gemini 5u 250mm×4.6mm)；流动相：甲醇-水(52:48)；检测波长：穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯250nm；体积流量1ml/分；柱温30℃；进样体积20μl。

高效液相色谱法脱水穿心莲内酯的含量测定高效液相色谱法脱水穿心莲内酯的含量测定随着科学技术的进步，人们对于天然药物的认识越来越深入。

穿心莲是一种传统中药材，具有良好的保健功效。

其中的有效成分内酯类物质，被广泛应用于中药的制备中。

在穿心莲内酯的提取、制备过程中，更需要准确地测定样品的内酯含量，以保证产品质量和安全性。

为了达到从样品中高效、准确测定内酯含量的目的，常常使用高效液相色谱法（HPLC）进行分析和检测。

下面将对HPLC法进行详细介绍。

HPLC法的基本原理HPLC法是一种高效、高精密度并且具有高灵敏度的分析方法。

在HPLC分析过程中，采用液相色谱柱对样品进行分离、纯化，再通过检测器对样品进行测定。

其中，可选用的柱和检测器是非常多样化的，不同的柱和检测器可适用于不同的样品和检测目的。

在脱水穿心莲内酯的含量测定中，可以选择烷基或芳香基取代的正相和反相柱，这两种柱分别可用于正相和反相分离，用来分离和检测疏水性或亲水性物质。

而检测器可选择紫外-可见光检测器和荧光检测器等。

这些检测器对于内酯类物质具有比较高的检测灵敏度，因此可用于对内酯含量进行测定。

HPLC法的具体操作步骤下面将介绍HPLC法的具体操作步骤：1. 样品准备：取穿心莲提取物5.0 mL置于100 mL烧结瓶中，加入0.2 mol/L氢氧化钠溶液(5 mL)，加入氢氧化钠溶液数字分别为10、20、40、80、120、160，各5毫升。

标准品的准备，将内酯标准品称取精确的10 mg，用甲醇稀释至100 mL，最后得到内酯标准溶液，将其分别稀释5倍、10倍用于检测。

2. 加热：将上述烧结瓶放入加热水浴中，在90℃恒温条件下反应2 h。

冷却，取出；加入冷离心管中。

3. 萃取：用pH=3.5磷酸缓冲液提取，加入萃取液1 0 mL，振荡1 h，离心10 min，取上清液备用。

4. 柱前处理：取上清液4.0 mL加入1 mol/L HCl调节pH到2.0，然后用微孔过滤膜过滤，取2.5 mL待用。

HPLC法测定穿心莲注射液中穿心莲内酯的含量目的建立穿心莲注射液中穿心莲内酯的高效液相色谱法含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法测定含量，色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（50∶50）；检测波长：224 nm；流速：1.0 ml/min。

结果穿心莲内酯在0.02 022～0.1011 mg/ml（r=0.9999）内呈良好的线性关系，平均回收率（n=6）为99.1%（RSD=1.1%）。

结论建立的测定穿心莲内酯的方法准确有效，有助于进一步完成穿心莲注射液的质量控制方法。

[Abstract]Objective To establish the HPLC method for determination of Andrographolide content in Chuanxinlian Injection.Methods HPLC was used in content determination，the chromatographic column was Agilent TC-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），the mobile phase consisted of methanol-water （50：50），the detection wavelength was 224 nm and the flow rate was 1.0 ml/min.Results The good linear relation was maintained when Andrographolide was from 0.02 022 to 0.1011 mg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 99.1% （n=6，RSD=1.1%）.Conclusion The method of determination of Andrographolide is accurate and effective，which can help to complete the quality control method of Andrographolide Injection.[Key words]HPLC method；Chuanxinlian Injection；Andrographolide；Content穿心莲注射液是由穿心莲的乙醇提取物制成的注射液，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十九册，具有清热解毒的功效，主要用于咽喉肿痛、肺热咳嗽、热痢，亦可用于上呼吸道感染、细菌性痢疾等。

HPLC法测定清火栀麦片中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量(1)】目的建立清火栀麦片中对穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯测定的HPLC法。

方法外标法，DiamonsilTMC18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）;流动相：甲醇-0.4%冰醋酸水溶液（46：64）；检测波长225nm和250nm；流速1ml/min。

结果穿心莲内酯的线性范围为0.112～0.391μg（r=0.9997），平均回收率为99.8%，RSD=1.8% (n=5)；脱水穿心莲内酯的线性范围为0.221～0.773μg(r=0.9996)，平均回收率为98.7%，RSD=0.5% (n=5)。

结论方法准确、灵敏，可作为清火栀麦片中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯的定量分析方法。

【关键词】片剂；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；高效液相色谱【Abstract】 Objective To determine the content of andrographolide、dehydroandrographolide in Qinghuozhimai tablets by HPLC. Methods An external standard method by HPLC with DiamonsilTMC18 column as fixed phase and methanol-0.4%HAC(46:64) as mobile phase was adopted. The detection wavelength was 225nm、250nm and the flow rate was 1.0ml/min.Results The linear range for andrographolide was0.112～0.391μg(r=0.9997).The average recovery of tablets sample was 99.8% and RSD was 1.8% (n=5);the linear range for dehydroandrographolide was 0.221～0.773μg(r=0.9996). The average recovery of tablets sample was 98.7% and RSD was 0.5%(n=5).Conclusion The method is simple and accurate， which can be adoptable for quantitative analysis of andrographolide、dehydroandrographolide of Qinghuozhimai tablets.【Key words】 tablets; andrographolide;dehydroandrographolide;HPLC清火栀麦片［1］是由穿心莲［2］、栀子、麦冬三味药经提取精制而成，具有清热解毒，凉血消肿等功效，主用于咽喉肿痛、发热、牙痛、目赤等。

HPLC 测定穿心莲内酯原料药的含量徐嵬,杨秀伟*(北京大学药学院天然药物学系,天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京100191)[摘要] 目的:建立HPLC 测定穿心莲内酯原料药含量的方法。

方法:选用D i a m onsil C 18(2)色谱柱(416mm @250mm,5L m ),流动相甲醇2水(60B 40),流速110mL #m i n -1,检测波长为225n m 。

结果:穿心莲内酯在015~510L g 线性关系良好(r =11000),低、中、高3浓度的平均加样回收率分别为9911%,9915%,10018%(n =3)。

结论:本方法简便、精确且准确,可用于穿心莲内酯原料药的质量控制。

[关键词] 穿心莲内酯;质量控制;HPLC[稿件编号] 20100713006[基金项目] 5中国药典62010版一部标准研究项目(TS 207)[通信作者] *杨秀伟,Te:l (010)82805106,E 2m ai:l xwyang@b j 2mu 1edu 1cn穿心莲内酯(andrographolide)系从爵床科植物穿心莲Andrographis pan ic ula ta (Bur m 1f 1)Nees 的干燥地上部分提取精制所得,具有清热解毒,抗菌消炎之功效,用于上呼吸道感染,细菌性痢疾[1]。

本原料药的生产以四川为多,重庆、广西、广东、湖南、湖北等省份亦有生产。

以本品为原料的制剂包括穿心莲内酯片、胶囊、软胶囊和滴丸,以及穿琥宁、炎琥宁、莲必治、喜炎平等水溶性衍生物注射剂,其解热、抗菌、抗病毒等疗效显著,多年来已广泛应用于临床。

本品首次收载于5中国药典61977年版一部,在5中国药典6标准提高行动计划中,对其质量标准进行修订和提高。

在中国药典1977年版中,本品的含量测定采用比色法[1]。

由于比色法不能排除穿心莲中其他内酯类物质的干扰,特异性不佳,结果不准确。

该文采用特异性良好的高效液相色谱法替代比色法作为含量测定法。

HPLC法测定清火栀麦片中穿心莲内酯的含量摘要【目的】建立清火栀麦片中穿心莲内酯的含量测定方法。

【方法】HPLC法，以甲醇—水（50∶50，pH=4.5）为流动相，检测波长为225nm。

【结果】加样回收率为98.4%，RSD=2.03%。

【结论】该法测定结果准确，精密度、重现性均好，可用于该产品的质量控制。

关键词清火栀麦片穿心莲内酯HPLC法中分类号R284清火栀麦片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册\{\[1\]\}。

本品由穿心莲、栀子、麦冬组成，具有清火，解毒，凉血，消肿之功效，用于咽喉肿痛，急性扁桃腺炎，头痛等。

穿心莲内酯为穿心莲的主要有效成分之一，本文以HPLC法测定其含量，报告如下。

1 仪器与试药1.1 仪器LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10A紫外检测器，威玛通用多媒体色谱工作站，赛多利斯BP211D型十万分之一分析天平。

1.2 试药穿心莲内酯对照品，购自中国药品生物制品检定所（含量测定用）。

样品：清火栀麦片为本所抽验样品，分别为广西A药厂（990181）；B药厂（991104012）；C药厂（991106057）。

试剂：甲醇为优级纯；乙醇、氯仿、盐酸等试剂均为分析纯；水为离子交换水。

2 实验方法与结果2.1 色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相∶甲醇—水（50∶50，用盐酸调至pH=4.5）；检测波长为225nm；流速0.8ml/min；理论塔板数按穿心莲内酯峰计不低于1000，分离度大于1.5，色谱见1。

1 清火栀麦片及穿心莲内酯对照品HPLC谱2.2 标准曲线的绘制精密称取穿心莲内酯10.13mg，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶解并摇匀，即得穿心莲内酯对照品溶液。

取对照品溶液适量于12000r/min下离心10min，精密吸取上清液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，结果得一不通过原点的直线。

10141014中国中医药现代远程教育C h i n es e M e di ci ne M od er n Di s t an ce Edu ca t i on of Chi na 第6卷第09期2008年09月感冒清片收载于《部颁标准》中成药分册第19册，处方由南板蓝根、大青叶、穿心莲叶、对乙酰氨基酚等6种中药及5个化药成分组成。

该制剂具有疏风解表、清热解毒的功能，临床常用于治疗风热感冒、发热、头痛、鼻塞流涕、喷嚏、咽喉肿痛、全身酸痛等症。

穿心莲叶为处方中臣药，具有清热解毒功效，而穿心莲内酯是穿心莲叶中有效成分，因此本文选择穿心莲内酯作为指标成分，采用H PL C 法测定制剂中穿心莲内酯含量[1，2]，为该制剂的质量标准提高提供实验依据。

1仪器与试药1.1仪器日本岛津LC -10A T vp 型(SPD -10A T 型紫外检测器，W M SP 色谱工作站)；B r ans on SB 3200超声波清洗仪（上海，B r a ns o n ）；色谱柱为Shi m pac k VP-OD S C 18(4.6×250m m ,5μm )。

1.2试药穿心莲内酯对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号为0797-200105）；甲醇（色谱纯，天津四友）；水（自制重蒸馏水）；感冒清片（广西万寿堂药业有限公司，基片重0.22g ，批号为071001、071002、071003）。

2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为Shi m p ack V P-OD S C 18(4.6×250m m ,5μm ）；甲醇-水（52∶48）为流动相；检测波长为225nm ；流速为1.0m l /m i n ；进样量10μl ；理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于2500。

2.2对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1m l 含60μg 的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，取细粉2g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25m l ，称定重量，超声处理（功率200W ，频率45KHz ），放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

HPLC法测定喉舒宁片中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量目的建立测定喉舒宁片中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯的方法。

方法色谱柱为C18柱Shim-pack VP-ODS（250mm×4.6mm，5?m）；流动相甲醇-水（53：47）；检测波长240nm；流速1.0ml/min。

结果穿心莲内酯线性范围0.184～1.472μg （r=0.9999），平均回收率为100.1%，RSD=1.5% （n=6）；脱水穿心莲内酯线性范围0.446～3.568μg （r=0.9999），平均回收率为100.5%，RSD=1.2% （n=6）。

结论方法准确、专属性强，可作为喉舒宁片中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯的定量分析方法。

标签：喉舒宁片；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；高效液相色谱喉舒宁片[1]是由白花蛇舌草、穿心莲[2]、山芝麻三味药经提取制成，具有清热解毒、散结止痛等功效，用于急、慢性咽喉炎，急性扁桃体炎，声带息肉，声带小结等。

但其现行质量标准尚无含量测定方法[3]。

为完善产品质量标准，本文建立了采用HPLC单波长同时测定喉舒宁片中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的方法。

1 仪器、试剂和样品美国安捷伦1100型高效液相色谱仪，VWD紫外-可见检测器，Agilent化学工作站。

甲醇（色谱纯），水为重蒸水。

穿心莲内酯（供含测用，0797-200105）、脱水穿心莲内酯（供含测用，0854-200204）对照品由中检所提供；喉舒宁片及缺穿心莲的阴性样品由广西方略药业集团有限公司提供。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Shim-pack VP-ODS，C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：甲醇-水（53：47）；流速1.0ml/min；柱温30℃；检测波长240nm。

2.2 样品制备及专属性考察2.2.1 对照品溶液取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯0.1mg、脱水穿心莲内酯0.2mg的混合溶液，备用。