HPLC法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量
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HPLC法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量
[摘要] 目的用高效液相色谱法测定复方穿心莲片中脱水穿心
莲内酯的含量。方法采用dia-monsil c18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-水((52∶48)为流动相;流速:1.0 ml/min;检测波长:250 nm。结果脱水穿心莲内酯的线性范围为0.036~0.328 μg,r = 0.999 8;本品平均回收率为100.04%,rsd值为0.11%。结论本法简便、灵敏、准确。
[关键词] 高效液相色谱法;复方穿心莲片;脱水穿心莲内酯;含量测定
[中图分类号] r927.2 [文献标识码] a [文章编号] 1674-4721(2013)01(c)-0062-02
复方穿心莲片是以穿心莲、路边青药材制成的内服制剂,具有清热解毒、凉血、利湿的功效,用于风热感冒、喉痹等疾病[1]。本文采用hplc法对制剂中的有效成分脱水穿心莲内酯进行含量测定,所建立的方法准确可靠、专属性强、稳定,可用于该制剂的质量控制。现报道如下:
1 仪器与试药
仪器:agilent lc-1260高效液相色谱议(美国)、agilent
lc-1200dad检测器;ad204-s电子天平;kq-300de超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。复方穿心莲片样品(广州白云山和记黄埔中药有限公司,批号:c1d001、c1d002、c1d003),甲醇(色谱纯,天津市大茂化学试剂厂);水为纯净水;脱水穿心莲内酯对照
品(中国药品生物制品检定所,批号:110854~200306);
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:dia-monsil c18(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(52∶48);流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;检测波长为250 nm。进样量10 μl,理论塔板数按脱水穿心莲内酯峰计,应不低于2 500[2-4]。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备取脱水穿心莲内酯适量,精密称定,加甲醇制成每1 毫升含20 μg的溶液,摇匀,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品细粉约0.5 g,精密称定,置50 ml量瓶中,加入甲醇约45 ml,超声处理30 min,取出,放冷,用甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例,取缺穿心莲的其他各味药材,按供试品制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 干扰试验
取脱水穿心莲内酯对照品溶液、供试品溶液及缺穿心莲药材的阴性对照溶液各10 μl注入液相色谱仪,记录色谱。从图谱可以看出,在此色谱条件下,脱水穿心莲内酯峰与其他组分峰分离完全,在与脱水穿心莲内酯峰相同的保留时间处,阴性对照无干扰,见图
1、2、3。
2.4 线性关系考察
精密称取脱水穿心莲内酯对照品11.40 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密吸2 ml至25 ml容量瓶中,用甲醇溶液稀释至刻度,分别进样2、6、10、14、18 μl,测定峰面积,以脱水穿心莲内酯浓度(μg)为横坐标(x),峰面积积分值(a)为纵坐标(y),计算脱水穿心莲内酯回归方程为:y = 43.990x + 0.033 2,r = 0.999 8。结果表明,脱水穿心莲内酯在0.036~0.328 μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取脱水穿心莲内酯[(对照品溶液(0.018 mg/ml]10 μl,注入高效液相色谱仪中,平行测定6份,平均峰面积为430.278,求出相对标准偏差,rsd = 0.90%,结果表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
取本品(批号:c1d002)约0.5 g,研细,精密称定,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,吸取供试品溶液,分别在0、4、8、16、24 h测定1次。平均峰面积为428.63。结果表明,rsd值为1.1%,供试品在24 h内基本稳定。
2.7 重复性试验
取6份本品(批号:c1d002),每份约0.5 g,精密称定,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液各10 μl,测定脱水穿心莲内酯峰面积,结果显示,平均峰面积为420.640,平均含量为0.964 mg/片,rsd值为0.70%,表明重复性良好。
2.8 加样回收试验
取已知含量(3.419 mg/g)的本品(批号c1d002)5份,每份约为0.25 g,精密称定,分别精密加入脱水穿心莲内酯对照品(0.902 mg/ml)1 ml,按供试品溶液的制备方法操作,计算回收率。结果表明,本品的平均回收率为100.04%,rsd值为0.11%,见表1。2.9 含量测定
取样品3批,按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液,按“2.1”项下的色谱条件进行含量测定,结果表明,脱水穿心莲内酯的平均含量为0.868 mg/片,见表2。
3 讨论
3.1 提取时间的选择
在进行本研究前,笔者对提取时间进行了考察:分别取本品4份,每份约0.5 g,精密称定,置入50 ml量瓶中,加入甲醇约45 ml,分别超声提取20、30、40、50 min,放冷,用甲醇定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液[5],按“2.1”项下的色谱条件进行含量测定,结果证明,超声提取30 min既能提取完全,故选择超声时间为30 min。
3.2 色谱条件优化
本研究过程中分别比较了甲醇-水(52∶48)、甲醇-0.1%磷酸溶液(52∶48)、乙睛-水(30∶70)等不同的流动相[6-8],结果证明,以甲醇-水(52∶48)为流动相能使其他峰完全分离,因此选甲醇-水(52∶48)为流动相。
综上所述,复方穿心莲片中选择君药穿心莲药材中的脱水穿心莲
内酯进行含量测定,本法准确、可靠、稳定,可作为复方穿心莲片的质量控制。
[参考文献]
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