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膀胱癌的分子标志物研究与诊断膀胱癌的分子标志物研究与诊断一、研究背景与意义膀胱癌是一种常见的泌尿系统恶性肿瘤，全球每年约有40万新病例发生。
其发病率逐年增高，尤以发达国家为甚。
目前，膀胱癌的早期诊断仍面临诸多困难，导致许多患者无法及时接受治疗，从而影响了治疗效果和患者的生存质量。
传统的临床手段如膀胱镜检查、尿细胞学和肿瘤标志物检测的特异性和敏感性较低，存在着漏诊和误诊的风险。
因此，研究膀胱癌的分子标志物及其在诊断中的应用具有重要的意义。
通过寻找与膀胱癌相关的分子标志物，可以提高其早期诊断的准确性和灵敏性，从而使患者更早地接受治疗，提高治疗效果和生存率，降低病死率。
此外，研究膀胱癌的分子标志物还可以为个体化治疗提供依据，指导治疗方案的制定，促进精准医疗的发展。
二、研究目标与内容本课题旨在通过研究膀胱癌的分子标志物，探索新的分子标志物在膀胱癌早期诊断中的应用价值，提高膀胱癌的早期诊断率。
研究内容包括：1.重视研究膀胱癌发生机制、转化过程中的关键分子事件，寻找与膀胱癌相关的分子标志物；2.建立膀胱癌分子标志物的检测方法，包括分子生物学技术和有机合成技术；3.评估膀胱癌分子标志物的特异性和敏感性，并与传统临床诊断手段进行比较；4.验证确定的膀胱癌分子标志物在大样本群体中的识别能力和准确性；5.建立膀胱癌分子标志物与患者临床特征、治疗方案及预后的相关性分析模型；6.总结膀胱癌分子标志物研究成果，撰写相关论文并申请专利。
三、研究方案与方法1.膀胱癌发生机制与转化过程中的关键分子事件的研究：- 收集现有文献，梳理与膀胱癌发生机制和转化过程相关的关键分子事件；- 建立关键分子事件与膀胱癌发生发展的关系网络；- 鉴定可能的候选分子标志物。
2.膀胱癌分子标志物的检测方法的建立：- 优化DNA、RNA和蛋白质的提取和检测方法；- 建立分子标志物的表达定量方法，比如PCR、Western blot、质谱等技术；- 确定标志物的检测阈值。
膀胱癌实验诊断进展膀胱癌是常见的泌尿生殖系恶性肿瘤之一，膀胱镜检查和细胞学检查仍是目前膀胱癌诊断的主要技术，前者是有创检查且检查费用较高，后者的敏感性低。
因此，研究开发特异性强、敏感性高的膀胱癌无创诊断新技术对于膀胱癌的诊断及其复发监测是迫切需要的，现已发现多种具有重要诊断作用的膀胱癌肿瘤标志物，其中部分已用于膀胱癌的筛查。
本文结合近年来有关膀胱癌实验诊断的新进展综述如下。
膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率居恶性肿瘤发病率的第六位，男性泌尿生殖系统肿瘤首位。
在欧洲其发病率约为1／万～3／万，在美国每年新增膀胱癌患者50 000多例，每年因该病引起死亡人数多达12500例：在我国膀胱癌也是泌尿系统中最为常见的恶性肿瘤，大多发生在老年人，但中年患者也占相当多的份额。
在国内外膀胱癌的发病率均呈上升趋势，发病率较高与吸烟、环境污染、通讯、化学致癌物有关，其中吸烟和职业接触芳香胺是目前已知的两个主要的膀胱痛危险因素。
膀胱癌90％以上为移行细胞癌，其中80％以上为无浸润的浅表性癌，初次治疗后复发率高达70％。
由此可见，膀胱癌严重威胁人类的健康，严重影响患者的生活质量。
膀胱癌的早期诊断有利于其早期治疗，而膀胱癌的早期诊断又有赖于有效的早期诊断方法。
另外，由于膀胱癌治疗后的复发率极高，其跟踪监测也迫切需要有效的、简便易行的诊断技术。
目前，临床上用于膀胱癌诊断手段主要有膀胱镜检查和尿细胞学检查，其中膀胱镜检查被视为目前膀胱癌诊断的金标准，它可提供直接视觉信息及肿瘤组织分期分级的依据，具有较高特异性。
但该检查耗时、费用较高、有时需要麻醉，对原位癌敏感性较差，且可能导致尿路感染、尿道损伤、膀胱损伤等并发症。
此外，该检查侵入性大，给许多患者尤其是男性患者带来痛苦和麻烦，也不能用于膀胱癌的筛查。
尿脱落细胞学检查是另一种目前用于诊断膀胱癌的常规方法，其优点是无创伤，特异性高、非侵入性，克服膀胱镜检查的缺点，但其检出率因受多因素的影响。
膀胱癌相关肿瘤标志物的研究进展膀胱癌在我国是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤，膀胱癌相关肿瘤标志物可以用作早期诊断、监测复发及评估预后，因此膀胱癌肿瘤标志物一直是泌尿外科的研究热点。
笔者就膀胱癌相关肿瘤标志物的研究进展作一综述。
标签：膀胱癌；肿瘤标志物；联合应用膀胱癌发病率和病死率均位于我国泌尿生殖系统肿瘤第一位，在美国的发病率为第5位，是人均治疗费用最高的肿瘤之一。
近十年间，膀胱癌的发病率逐年上升。
膀胱镜检是膀胱癌诊断的主要手段，但侵人性检查导致患者依从性差，且费用较高；尿细胞学是膀胱癌诊断和术后随诊的主要方法之一，但易产生假阳性。
膀胱癌肿瘤标志物有提高诊断准确性，协助疾病风险评估，监测肿瘤的恶性程度，预测肿瘤进展的潜力。
目前，BTA、NMP22、FDP等临床应用已获FDA（美国食品药品管理局）的批准，现将热点肿瘤标志物的研究综述如下。
1 膀胱癌相关肿瘤标志物1.1 BTA（膀胱肿瘤抗原）膀胱肿瘤抗原又被称为补体因子H相关蛋白，可干扰补体途径，使肿瘤细胞逃避免疫系统，从而产生肿瘤。
膀胱肿瘤与膀胱的基底膜相接触，肿瘤细胞通过分泌基底蛋白与基底膜表面蛋白受体结合，进而释放出蛋白水解酶将基底膜破坏，产生的基底膜碎片进入膀胱后聚集产生BTA。
BTA的常用检测方法为BTAStat和BTATrak。
一项针对BTA与膀胱肿瘤关系（大小、分期、分级、发病类型、生长方式）的分析发现，随膀胱肿瘤的分期、分级的升高，BTA检出水平升高，多发肿瘤检出率显著高于单发肿瘤，且初发肿瘤明显高于复发肿瘤。
有学者对3733例膀胱癌患者相关文献行Meta分析发现，BTAStat对膀胱肿瘤诊断的准确率中等，还不能代替尿细胞学检查，也不能单独应用于膀胱癌诊断，为无创性膀胱癌诊断的可选方法之一。
BTA检测主要缺点是易随尿液状态的改变而出现假阳性，如浓缩尿、血尿、行侵人性检查及经BCG治疗后。
美国FDA已批准BT-ASrat、BTATrak应用于膀胱癌患者的诊断和随访，但是目前BTA仅在膀胱癌的诊断中起辅助作用，不能取代膀胱镜检查。
肿瘤标志物检测技术的最新研究进展近年来，肿瘤标志物检测技术在肿瘤早期诊断以及治疗效果监测等方面起到了重要的作用。
随着科学技术的不断进步，对肿瘤标志物检测技术的研究也日趋深入。
下面将介绍一些最新的研究进展。
液体活检技术成为最新的研究热点之一。
传统的肿瘤检测多依赖于活检组织的获取，然而，这种方法存在创伤性高、有限的样本量等问题。
液体活检技术通过从体液中获取循环肿瘤标志物，可以非侵入性地对肿瘤进行检测。
这种技术的发展为肿瘤早期的筛查提供了新的思路。
多组学技术在肿瘤标志物检测领域也取得了突破性进展。
多组学技术是指通过整合基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等多种高通量技术的手段，全面地研究一个生物系统。
在肿瘤标志物检测方面，多组学技术可以同时分析多个标志物，提高检测的灵敏性和特异性。
同时，利用多组学技术可以对肿瘤的发展和进展进行较为全面的研究，为个性化治疗提供了新的思路。
研究人员还在探索新的肿瘤标志物。
传统的肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)和前列腺特异性抗原(PSA)虽然在某些肿瘤中有较高的敏感性，但也存在不足之处。
因此，寻找新的肿瘤标志物成为研究的重点之一。
一些最新的研究表明，细胞自由DNA(circulating cell-free DNA, cfDNA)、细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)以及肿瘤相关RNA等可能具有较高的敏感性和特异性。
这些研究成果为未来肿瘤标志物检测的发展提供了新的方向。
人工智能技术在肿瘤标志物检测方面也发挥着重要作用。
近年来，深度学习等人工智能技术在医学领域得到了广泛应用。
在肿瘤标志物检测方面，人工智能技术可以通过大规模数据的分析和模式识别，提高肿瘤标志物的预测准确性。
通过训练算法，人工智能技术可以识别和提取出与肿瘤相关的特征，从而帮助医生进行更精确的诊断和治疗决策。
总结起来，肿瘤标志物检测技术的最新研究进展主要集中在液体活检技术、多组学技术、寻找新的肿瘤标志物以及人工智能技术等方面。
尿液中膀胱癌肿瘤标记物的研究进展目前膀胱癌诊断及随访主要依靠尿细胞学检查与尿道膀胱镜检相结合，而膀胱镜检给患者带来较大的痛苦，还有诸多并发症及操作不便。
因此，从尿液中寻找可用于膀胱癌早期诊断及判断预后的无创指标非常重要。
本文概述了主要的尿液中膀胱癌肿瘤标志物的研究进展标签：肿瘤标记物；膀胱癌目前膀胱癌诊断及随访主要依靠尿细胞学检查与尿道膀胱镜检相结合的手段，然而侵入性的尿道膀胱镜检操作不便，给患者带来较大的痛苦，还有感染、出血等风险。
因此，寻找可用于膀胱癌早期诊断及判断预后的无创指标非常重要，尿液是膀胱癌理想的肿瘤标记物来源。
理想的膀胱肿瘤标记物应该具有的实验室特征：尿、血和肿瘤组织中存在并且其含量逐渐减少；不但精确预示肿瘤的存在，而且能够预示肿瘤的侵袭状态；标记物的水平须同疾病的严重程度相一致；检测方法具有高度的敏感性和特异性。
临床潜在作用：筛选高危人群；对血尿和排尿刺激症状患者的检查评价；患者术后的监测。
临床使用特点：检测结果的可重复性；收集标本方法简单实用；获取结果迅速，成本不高；检测方法简单，最好能在门诊进行。
本文将近年来尿液中膀胱癌肿瘤标记物的研究进行了综述。
1 目前通过美国食品和药物管理局批准用于临床的膀胱癌相关的无创诊断方法1.1 尿细胞学（cytology）尿细胞学不属于肿瘤标记物范畴，作为膀胱肿瘤诊断金标准已多年，传统细胞学（conventional cytology，CC）的涂片质量不十分理想，从而影响到细胞学的诊断。
尿脱落细胞学检测膀胱癌的敏感性为13%～75%，特异性为85%～100%，敏感性与肿瘤细胞分级密切相关。
1996年FDA批准的液基细胞学检测（1iquid based cytology，LBC）技术，从根本上改变了传统涂片的制作方法，检测膀胱癌的敏感性为达90%以上，特异度方面与传统细胞学相当，对膀胱癌的诊断比传统细胞学更准确[1]。
目前常见的几种液基细胞学检查技术有：新柏氏TCT技术、超柏氏LCT技术、利普液基细胞学LPT技术、国产液基细胞学技术如LBP。
膀胱癌尿液生物标记物的现状与展望
刘彩树;蔡森;张亚萍;闫合燕;李宏杰
【期刊名称】《生理科学进展》
【年(卷),期】2015(000)004
【摘要】膀胱癌是世界上最常见的肿瘤之一，膀胱肿瘤的早期检测对改善病人预
后至关重要。
目前检测和监视膀胱肿瘤的常规方法是膀胱镜检查联合应用尿细胞学检查，但其局限性已经表明膀胱癌需要更好的诊断方法。
理想中的诊断方法应该是非侵袭性的，既能够诊断，也能监测疾病的复发，并且能够为治疗提供依据。
因此，以尿液为基础的非侵袭性方法将会给患者和医院带来福音。
本文综述了近年来报道的膀胱癌尿液生物标记物及相关新技术。
【总页数】4页(P255-258)
【作者】刘彩树;蔡森;张亚萍;闫合燕;李宏杰
【作者单位】华北理工大学病理生理学教研室，唐山 063000;华北理工大学病理
生理学教研室，唐山 063000;华北理工大学病理生理学教研室，唐山 063000;华
北理工大学病理生理学教研室，唐山 063000;华北理工大学病理生理学教研室，
唐山 063000
【正文语种】中文
【中图分类】R737;R44
【相关文献】
1.尿液检查在膀胱癌诊断和术后复发监测中的现状及进展 [J], 寿建忠;马建辉
2.锁链素作为肺损伤生物标记物的研究现状与展望 [J], 许骥;方以群;袁恒荣;刘晓波;陈锐勇
3.膀胱癌尿液肿瘤标志物的现状和研究进展 [J], 吴亦硕;姜昊文;丁强
4.常用生物标记物在脓毒症中的应用现状及展望 [J], 艾红梅
5.生物标记物诊断框架下的阿尔茨海默病:历史,现状及展望 [J], 吴兴启;周珊珊;汪凯
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膀胱癌尿液肿瘤标志物的现状和研究进展
发表时间：2015-01-15T14:15:22.643Z 来源：《医药界》2014年10月第10期供稿作者：王冬梅
[导读] 进一步研究或可发现灵敏度和特异度更高的膀胱癌尿液肿瘤标志物，作为一种无创的检查手段，膀胱癌尿液肿瘤标志物具有很高的研究和临床价值。
王冬梅（南京市浦口区中心医院检验科江苏南京２１１８００）
【中图分类号】Ｒ７３７．１【文献标识码】Ａ【文章编号】１５５０－１８６８（２０１４）１０【摘要】目前膀胱癌诊断和随访主要依靠尿细胞学检查、影像学和膀胱镜相结合的方法，但影像学检查无法明确诊断，膀胱镜检查属有创操作，尿脱落细胞学检查的灵敏度低。
近年来很多尿液中膀胱肿瘤标志物被发现并应用于临床，本文概述了这些膀胱肿瘤标志物的应用现状及研究进展。
【关键词】膀胱癌；肿瘤标志物；尿细胞学膀胱癌的发病率居男性肿瘤发病率的第７位，死亡率居男性肿瘤的第９位，男性发病率是女性的１４倍［１］。
目前，膀胱癌诊断的主要手段为影像学检查、膀胱镜检查和尿脱落细胞学检查。
但影像学检查无法进行明确诊断，膀胱镜检查属有创操作，尿脱落细胞学检查的灵敏度低，而膀胱肿瘤具有高复发率的特点，患者需要长期膀胱镜检查或尿脱落细胞学检查随访监测，肿瘤的经济负担较重。
尿液标本的获取途径较容易，因此，通过尿液标本获得膀胱癌的早期诊断及随访检测方法是众多研究者追求的目标。
本文就这些膀胱肿瘤标志物的应用现状及研究进展作一综述。
１主要的膀胱癌尿液肿瘤标志物１．１膀胱肿瘤抗原最初对膀胱肿瘤抗原（ｂｌａｄｄｅｒｔｕｍｏｒａｎｔｉｇｅｎ，ＢＴＡ）的检测是通过乳胶凝集试验，检测尿液中肿瘤细胞在生长过程中由于基底膜水解产生的基底膜抗原。
但任何能引起细胞破坏的疾病均会影响这一试验的特异度，如膀胱炎等，此外该试验对于非基层浸润性膀胱癌的灵敏度也相对较低。
因此，后来出现了第二代膀胱肿瘤抗原检测试验，包括ＢＴＡｓｔａｔ和ＢＴＡＴＲＡＫ，这两种方法是ＢＴＡ的改进方法，可通过单克隆抗体的方法检测尿液中的补体因子Ｈ相关蛋白来诊断膀胱肿瘤。
补体因子Ｈ能和人类的上皮、内皮、基底膜以及一些肿瘤细胞结合，并对补体的激活有保护作用，研究认为肿瘤细胞能直接释放补体因子Ｈ进入尿液［２］。
ＢＴＡＴＲＡＫ属于定量酶联免疫试验，其灵敏度同样在低级别膀胱癌中较低。
总体灵敏度约５７．０％～８３．０％，特异度约５０．０％～９０．０％。
１．２细胞核基质蛋白２２核基质蛋白是细胞核内的一种网状结构蛋白，是细胞核内的结构支架，参与ＤＮＡ的复制、转录和基因表达调控等。
目前已发现４种核基质蛋白与膀胱癌相关，其中细胞核基质蛋白２２（ｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘｐｒｏｔｅｉｎ２２，ＮＭＰ２２）是唯一经过美国食品药品管理局（ＦＤＡ）批准并应用于临床检测的核基质蛋白。
研究发现，ＮＭＰ２２水平在膀胱癌的患者尿液中显著升高。
一项较早的报道显示，用ＮＭＰ２２作为膀胱肿瘤电切术后的随访指标，当阈值为１０Ｕ／ｍｌ时，其灵敏度为７０．０％，特异度为７９．０％。
一项包括２８７１例Ｔ１或者Ｔａ期膀胱癌患者随访的多中心研究显示，ＮＭＰ２２的诊断效果受膀胱癌分级和分期不同的影响。
对于所有泌尿上皮癌、３级及以上泌尿上皮癌、２期及以上泌尿上皮癌，ＮＭＰ２２的曲线下面积分别为０．７３５，０．８０６和０．８６４。
总体灵敏度和特异度分别为５７．０％和８１．０％。
１．３膀胱癌特异度核基质蛋白核基质蛋白家族中，膀胱癌特异度核基质蛋白４（ｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｎｕ ｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘｐｒｏｔｅｉｎ４，ＢＬＣＡ－４）仅在泌尿上皮癌细胞系中可检测到表达，而在正常细胞系中未发现表达，并且研究表明ＢＬＣＡ－４在肿瘤发生的早期就开始表达。
在一项包含５５名膀胱癌患者和５１名非膀胱癌患者的尿液标本检测中发现，ＢＬＣＡ－４的灵敏度和特异度分别为９６．４％和１００．０％。
但在２０２名脊髓损伤的患者中，有３８名患者的ＢＬＣＡ－４检测值超过阈值，并且ＢＬＣＡ－４的水平与脊髓损伤的持续时间成正比。
对于这一结果，研究者认为一个可能的解释是，脊髓损伤患者长期留置导尿管是引起膀胱癌的一个危险因素。
另外，多因素的分析未发现ＢＬＣＡ－４试验的结果和尿路感染、膀胱炎及吸烟有关［３］。
１．４透明质酸和透明质酸酶透明质酸酶（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＨＡａｓｅ）是透明质酸的水解酶，透明质酸酶在多种肿瘤包括膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌和神经系统肿瘤中可出现升高。
透明质酸酶同样通过ＥＬＩＳＡ的方法可以进行检测。
一项包括５１３份尿液标本的研究显示ＨＡａｓｅ的灵敏度和特异度分别为８１．５％和８３．８％，当结合透明质酸时，灵敏度和特异度上升至９１．２％和８４．４％［４］。
另一项研究将透明质酸和透明质酸酶作为膀胱癌患者的随访监测指标，在７０名膀胱癌患者中进行了随访和检测，结果显示，ＨＡ－ＨＡａｓｅ试验的灵敏度和特异度分别为９１．０％和７０．０％。
２总结目前尚无任何一个尿液蛋白组学标志物能够替代膀胱镜检查在膀胱癌的诊断和监测中的作用，但这些蛋白组学标志物能起到补充膀胱镜的作用，当病灶尚无法通过膀胱镜看到时，可能通过尿液标志物的检测来发现。
进一步研究或可发现灵敏度和特异度更高的膀胱癌尿液肿瘤标志物，作为一种无创的检查手段，膀胱癌尿液肿瘤标志物具有很高的研究和临床价值。
参考文献［１］ｅｍａｌＡ，ＢｒａｙＦ，ＣｅｎｔｅｒＭＭ，ｅｔａｌ．Ｇｌｏｂａｌｃａｎｃｅｒｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．ＣＡＣａｎｃｅｒＪＣｌｉｎ，２００１，６１（２）：６９－９０．［２］ＪｕｎｎｉｋｋａｌａＳ，ＪｏｋｉｒａｎｔａＴＳ，ＦｒｉｅｓｅＭＡ，ｅｔａｌ．ＥｘｃｅｐｔｉｏｎａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｈｕｍａｎＨ２ｇｌｉｏｂｌａｓ－ｔｏｍａｃｅｌｌｓｔｏｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｍｅｄｉａｔｅｄｋｉｌｌｉｎｇｂｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｕｔｉｌｉｚａ ｔｉｏｎｏｆｆａｃｔｏｒＨａｎｄｆａｃ－ｔｏｒＨ－ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ１［Ｊ］．ＪＩｍｍｕｎｏｌ，２０００，１６４（１１）：６０７５－６０８１．［３］ＳａｒｏｓｄｙＭＦ，ＨｕｄｓｏｎＭＡ，ＥｌｌｉｓＷＪ，ｅｔａｌ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｕｒｒｅｎｔｂｌａｄｄｅｒｃａｎ－ｃｅｒｕｓｉｎｇｔｈｅＢａｒｄＢＴＡｓｔａｔＴｅｓｔ［Ｊ］．Ｕｒｏｌｏｇｙ，１９９７，５０（３）：３４９－３５３．［４］ＲａｉｔａｎｅｎＭＰ，ＨｅｌｌｓｔｒｏｍＰ，ＭａｒｔｔｉｌａＴ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌｉｎｓｔｉｌｌａｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅｈｕｍａｎｃｏｍ－ｐｌｅｍｅｎｔｆａｃｔｏｒＨｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＴＡｓｔａｔ）ｔｅｓｔ［Ｊ］．ＥｕｒＵｒｏｌ，２００１，４０（４）：４２２－４２６．。
